Questo lavoro è stato sostenuto dal Centro tedesco per la ricerca cardiovascolare (DZHK; 81X3600221to H.V., 81X2600255 to S.C.), dal China Scholarship Council (CSC201808130158 to R.X.), dalla Fondazione tedesca per la ricerca (DFG; Clinician Scientist Program in Vascular Medicine (PRIME), MA 2186/14-1 a P. T.), e la Fondazione Corona (S199/10079/2019 a S. C.).

Rivelatore dell'architettura miocardica delle vene polmonari murine

<ol>
	<li>Lippi, G., Sanchis-Gomar, F., Cervellin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+epidemiology+of+atrial+fibrillation:+An+increasing+epidemic+and+public+health+challenge.">Global epidemiology of atrial fibrillation: An increasing epidemic and public health challenge.</a> International Journal of Stroke. 16 (2), 217-221 (2021).</li><li>Wijesurendra, R. S., Casadei, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+atrial+fibrillation.">Mechanisms of atrial fibrillation.</a> Heart. 105 (24), 1860-1867 (2019).</li><li>Ha&#239;ssaguerre, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+initiation+of+atrial+fibrillation+by+ectopic+beats+originating+in+the+pulmonary+veins.">Spontaneous initiation of atrial fibrillation by ectopic beats originating in the pulmonary veins.</a> The New England Journal of Medicine. 339 (10), 659-666 (1998).</li><li>Mueller-Hoecker, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+rodents+and+humans:+a+light+microscopic+and+ultrastructural+study+on+cardiomyocytes+in+pulmonary+veins.">Of rodents and humans: a light microscopic and ultrastructural study on cardiomyocytes in pulmonary veins.</a> International Journal of Medical Sciences. 5 (3), 152-158 (2008).</li><li>Kramer, A. W., Marks, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+occurrence+of+cardiac+muscle+in+the+pulmonary+veins+of+Rodenita.">The occurrence of cardiac muscle in the pulmonary veins of Rodenita.</a> Journal of Morphology. 117 (2), 135-149 (1965).</li><li>Nathan, H., Eliakim, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+junction+between+the+left+atrium+and+the+pulmonary+veins.">The junction between the left atrium and the pulmonary veins.</a> Circulation. 34 (3), 412-422 (1966).</li><li>Nathan, H., Gloobe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+atrio-venous+junctions+and+extensions+(sleeves)+over+the+pulmonary+and+caval+veins:+Anatomical+observations+in+various+mammals.">Myocardial atrio-venous junctions and extensions (sleeves) over the pulmonary and caval veins: Anatomical observations in various mammals.</a> Thorax. 25 (3), 317-324 (1970).</li><li>Bond, R. C., Choisy, S. C., Bryant, S. M., Hancox, J. C., James, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ion+currents,+action+potentials,+and+noradrenergic+responses+in+rat+pulmonary+vein+and+left+atrial+cardiomyocytes.">Ion currents, action potentials, and noradrenergic responses in rat pulmonary vein and left atrial cardiomyocytes.</a> Physiological Reports. 8 (9), 14432 (2020).</li><li>Thiagalingam, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+vein+contraction:+Characterization+of+dynamic+changes+in+pulmonary+vein+morphology+using+multiphase+multislice+computed+tomography+scanning.">Pulmonary vein contraction: Characterization of dynamic changes in pulmonary vein morphology using multiphase multislice computed tomography scanning.</a> Heart Rhythm. 5 (12), 1645-1650 (2008).</li><li>Spach, M. S., Barr, R. C., Jewett, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spread+of+excitation+from+the+atrium+into+thoracic+veins+in+human+beings+and+dogs.">Spread of excitation from the atrium into thoracic veins in human beings and dogs.</a> The American Journal of Cardiology. 30 (8), 844-854 (1972).</li><li>Scott McNutt, N., Weinstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+ultrastructure+at+mammalian+intercellular+junctions.">Membrane ultrastructure at mammalian intercellular junctions.</a> Progress in Biophysics and Molecular Biology. 26, 45-101 (1973).</li><li>Barr, L., Dewey, M. M., Berger, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propagation+of+action+potentials+and+the+structure+of+the+nexus+in+cardiac+muscle.">Propagation of action potentials and the structure of the nexus in cardiac muscle.</a> Journal of General Physiology. 48 (5), 797-823 (1965).</li><li>Kawamura, K., Konishi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+of+the+cell+junction+of+heart+muscle+with+special+reference+to+its+functional+significance+in+excitation+conduction+and+to+the+concept+of+&amp;#34;disease+of+intercalated+disc&amp;#34.">Ultrastructure of the cell junction of heart muscle with special reference to its functional significance in excitation conduction and to the concept of &amp;#34;disease of intercalated disc&amp;#34.</a> Japanese Circulation Journal. 31 (11), 1533-1543 (1967).</li><li>Van Kempen, M. J., Fromaget, C., Gros, D., Moorman, A. F., Lamers, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+distribution+of+connexin43,+the+major+cardiac+gap+junction+protein,+in+the+developing+and+adult+rat+heart.">Spatial distribution of connexin43, the major cardiac gap junction protein, in the developing and adult rat heart.</a> Circulation Research. 68 (6), 1638-1651 (1991).</li><li>Verheule, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+structure+and+connexin+expression+of+canine+pulmonary+veins.">Tissue structure and connexin expression of canine pulmonary veins.</a> Cardiovascular Research. 55 (4), 727-738 (2002).</li><li>Xiao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+connexin+43,+ion+channels+and+Ca2+-handling+proteins+in+rat+pulmonary+vein+cardiomyocytes.">Expression of connexin 43, ion channels and Ca2+-handling proteins in rat pulmonary vein cardiomyocytes.</a> Experimental and Therapeutic Medicine. 12 (5), 3233-3241 (2016).</li><li>Xia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-mount+immunofluorescence+staining,+confocal+imaging+and+3D+reconstruction+of+the+sinoatrial+and+atrioventricular+node+in+the+mouse.">Whole-mount immunofluorescence staining, confocal imaging and 3D reconstruction of the sinoatrial and atrioventricular node in the mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (166), (2020).</li><li>Tomsits, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medetomidine/midazolam/fentanyl+narcosis+alters+cardiac+autonomic+tone+leading+to+conduction+disorders+and+arrhythmias+in+mice.">Medetomidine/midazolam/fentanyl narcosis alters cardiac autonomic tone leading to conduction disorders and arrhythmias in mice.</a> Lab Animal. 52 (4), 85-92 (2023).</li><li>Xia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+resident+cardiac+macrophages+from+the+murine+sinoatrial+and+atrioventricular+node.">Isolation and culture of resident cardiac macrophages from the murine sinoatrial and atrioventricular node.</a> Journal of Visualized Experiments. (171), (2021).</li><li>Bredeloux, P., Pasqualin, C., Bordy, R., Maupoil, V., Findlay, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automatic+activity+arising+in+cardiac+muscle+sleeves+of+the+pulmonary+vein.">Automatic activity arising in cardiac muscle sleeves of the pulmonary vein.</a> Biomolecules. 12 (1), 23 (2021).</li><li>Chen, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanisms+of+atrial+fibrillation.">The mechanisms of atrial fibrillation.</a> Journal of Cardiovascular Electrophysiology. 17, S2-S7 (2006).</li><li>Thibault, S., Ton, A. -. T., Huynh, F., Fiset, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Connexin+lateralization+contributes+to+male+susceptibility+to+atrial+fibrillation.">Connexin lateralization contributes to male susceptibility to atrial fibrillation.</a> International Journal of Molecular Sciences. 23 (18), 10696 (2022).</li></ol>

Gli autori non hanno conflitti di interesse da dichiarare.

Con questo protocollo, condividiamo un metodo per distinguere e isolare i PV del cuore di topo ed eseguire la colorazione in immunofluorescenza su di essi. Dopo il prelievo di organi, il cuore e i polmoni sono stati disidratati in una soluzione di saccarosio sterilizzata, seguita dalla separazione dei ventricoli dall'atrio e dai lobi polmonari sotto guida microscopica. Successivamente, la base del cuore è stata preparata per visualizzare i PV seguiti dal taglio dai polmoni all'ilo. La successiva colorazione a immunofluo...

La fibrillazione atriale (FA) è l'aritmia sostenuta più comune1. La prevalenza della fibrillazione atriale è in ulteriore aumento, con un numero previsto di ~17,9 milioni di pazienti in Europa nel 20601. La fibrillazione atriale è clinicamente molto importante poiché è un fattore di rischio essenziale per lo sviluppo di infarto miocardico, insufficienza cardiaca o ictus, con conseguente enorme onere individuale, sociale e socioeconomico1. Anche se la fibrillazione atriale è nota da decenni, la fisiopatologia della fibrillazione atriale non è ancora del tutto compresa2.
Già alla fine degli anni '90, gli studi hanno dimostrato il grande impatto delle vene polmonari (PV) nell'avvio e nel mantenimento della fibrillazione atriale, in quanto sono la principale fonte di battiti ectopici che innescano la fibrillazione atriale3. È stato dimostrato che i PV differiscono strutturalmente dagli altri vasi sanguigni. Mentre i vasi sanguigni tipici contengono cellule muscolari lisce, la tunica media dei PV contiene anche cardiomiociti4. Nei roditori, questa muscolatura cardiaca è presente in modo ubiquitario in tutte le PV, comprese le parti intra ed extrapolmonari, nonché la regione dell'orifizio5. Nell'uomo, i PV contengono anche cardiomiociti, che possono essere osservati all'interno delle estensioni del miocardio dell'atrio sinistro (LA), le cosiddette maniche miocardiche (SM)6,7.
La SM presenta somiglianze morfologiche con il miocardio8 atriale. La forma e le dimensioni dei cardiomiociti atriali e PV non variano significativamente tra loro e mostrano proprietà elettrofisiologiche comparabili8. Le registrazioni elettrofisiologiche all'interno del PV hanno dimostrato l'attività elettrica della SM e l'imaging angiografico ha rivelato contrazioni sincronizzate con il battito cardiaco 9,10.
Le giunzioni gap sono complessi proteici che formano pori composti da sei subunità connessine, che consentono il passaggio di ioni e piccole molecole11. Le giunzioni gap esistono nelle apposizioni cellula-cellula, interconnettono i cardiomiociti vicini e consentono un accoppiamento elettrico intercellulare tra i cardiomiociti 12,13. Diverse isoforme di connessina sono espresse nel cuore, con la connessina 43 (Cx43) che è l'isoforma più comune espressa in tutte le regioni del cuore14. Studi precedenti hanno fornito prove dell'espressione di Cx43 nei cardiomiociti dei PV15,16.
Rimane difficile studiare la SM all'interno di PV intatti a causa della loro struttura delicata, specialmente nei modelli animali di piccola taglia. Qui, dimostriamo come identificare e isolare i PV insieme a LA e ai lobi polmonari nei topi utilizzando la microdissezione guidata dalla microscopia. Inoltre, dimostriamo la colorazione in immunofluorescenza (IF) dei PV per visualizzare i cardiomiociti e le loro interconnessioni all'interno dei PV.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adhesion slides</td>
			<td>Epredia</td>
			<td>10149870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AF568-secondary antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11036</td>
			<td>Host: Goat, Reactivity: Rabbit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Biozym LE</td>
			<td>840104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488-secondary antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>4408S</td>
			<td>Host: Goat, Reactivity: Mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Connexin 43 /GJA1 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab11370</td>
			<td>Polyclonal Antibody, Clone: GJA1, Host: Rabbit&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-cTNT antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>MA5-12960</td>
			<td>Monoclonal Antibody, Clone: 13-11, Host: Mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brush</td>
			<td>Lukas&#160;</td>
			<td>5486</td>
			<td>size 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slips</td>
			<td>Epredia</td>
			<td></td>
			<td>24 mm x 50 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryotome Cryo Star NX70</td>
			<td>Epredia&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Settings: Specimen temperature: -18 &#176;C, Blade Temperature: -25 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DFC365FX camera</td>
			<td>Leica&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DM6 B fluorescence microscope</td>
			<td>Leica&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry ice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dubecco&#39;s phosphate-buffered saline (DPBS) 1x conc.</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14040133</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5FS Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>91150-20</td>
			<td>2 pieces needed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14090-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence mounting medium</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>S3023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11052-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>H3570</td>
			<td>Cell nuclei counterstaining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>FIJI</td>
			<td></td>
			<td>analysis and processing software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LAS X</td>
			<td>Leica&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Imaging software for Leica DM6 B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome blades S35</td>
			<td>Feather</td>
			<td>207500000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal goat serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S26-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O.C.T. compound</td>
			<td>Tissue-Tek</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 16%</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>28908</td>
			<td>methanol-free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>612-1681</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>TPP</td>
			<td>93100</td>
			<td>100 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rocker 3D digital</td>
			<td>IKA Sch&#252;ttler</td>
			<td>00040010000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide staining jars</td>
			<td>EasyDip</td>
			<td>M900-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specimen Molds</td>
			<td>Tissue-Tek Cryomold</td>
			<td>4557</td>
			<td>25 mm x 20 mm x 5 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StainTray M920 staining system</td>
			<td>StainTray</td>
			<td>631-1923</td>
			<td>Staining system for 20 slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterican Needle</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4657705</td>
			<td>G 27 - used for injection (step 2) and pinning (step 3 and 4) in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Vannas Spring Scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>91500-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super PAP Pen Liquid Blocker</td>
			<td>Super PAP Pen</td>
			<td>N71310-N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4606108V</td>
			<td>10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris base</td>
			<td>Roche</td>
			<td>TRIS-RO</td>
			<td>component for 1x Tris-Buffered Saline (TBS)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P2287</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microdissection and immunofluorescence staining of myocardial sleeves in murine pulmonary veins

Le vene polmonari (PV) sono la principale fonte di battiti ectopici nelle aritmie atriali e svolgono un ruolo cruciale nello sviluppo e nella progressione della fibrillazione atriale (FA). I PV contengono manicotti miocardici (SM) composti da cardiomiociti. Le sclerosi multipla sono implicate nell'inizio e nel mantenimento della fibrillazione atriale, in quanto conservano somiglianze con il miocardio cardiaco, inclusa la capacità di generare impulsi elettrici ectopici. I roditori sono ampiamente utilizzati e possono rappresentare ottimi modelli animali per studiare il miocardio della vena polmonare poiché i cardiomiociti sono ampiamente presenti in tutta la parete del vaso. Tuttavia, la microdissezione precisa e la preparazione di PV murini sono impegnative a causa delle piccole dimensioni dell'organo e dell'anatomia intricata.
Dimostriamo un protocollo di microdissezione guidato dalla microscopia per isolare l'atrio sinistro murino (LA) insieme ai PV. Viene eseguita una colorazione a immunofluorescenza utilizzando anticorpi cardiaci Troponina-T (cTNT) e connessina 43 (Cx43) per visualizzare LA e PV in tutta la sua lunghezza. L'imaging con ingrandimenti 10x e 40x fornisce una visione completa della struttura del PV e approfondimenti dettagliati sull'architettura miocardica, evidenziando in particolare la presenza della connessina 43 all'interno della SM.

Atrial fibrillation (AF) is the most common sustained arrhythmia1. The prevalence of AF is increasing even further with an expected number of ~17.9 million patients in Europe in 20601. AF is clinically highly important since it is an essential risk factor for the development of myocardial infarction, heart failure, or stroke, resulting in an enormous individual, social, and socioeconomic burden1. Even though AF has been known for decades, the pathophysiology of AF is still not fully understood2.
Already in the late 1990s, studies demonstrated the great impact of pulmonary veins (PVs) in initiating and maintaining AF, as they are the main source of AF-triggering ectopic beats3. It has been demonstrated that PVs structurally differ from other blood vessels. While typical blood vessels contain smooth muscle cells, the tunica media of PVs also contains cardiomyocytes4. In rodents, this cardiac musculature is ubiquitously present throughout the whole PVs, including intra- and extrapulmonary parts, as well as the orifice region5. In humans, PVs also contain cardiomyocytes, which can be observed within extensions of the left atrial (LA) myocardium-so-called myocardial sleeves (MS)6,7.
MS have morphological similarities to the atrial myocardium8. The shape and size of atrial and PV cardiomyocytes do not vary significantly between each other and show comparable electrophysiological properties8. Electrophysiologic recordings within the PV have proven the electrical activity of MS, and angiographic imaging has revealed contractions synchronized with the heartbeat9,10.
Gap junctions are pore-forming protein complexes composed of six connexin subunits, which allow the passage of ions and small molecules11. Gap junctions exist in the cell-to-cell appositions, interconnect neighboring cardiomyocytes, and enable an intercellular electrical coupling between cardiomyocytes12,13. Several connexin isoforms are expressed in the heart with connexin 43 (Cx43) being the most common isoform expressed in all regions of the heart14. Previous studies provide evidence for the expression of Cx43 in cardiomyocytes of the PVs15,16.
It remains challenging to investigate MS within intact PVs due to their delicate structure, especially in small animal models. Here, we demonstrate how to identify and isolate PVs together with LA and lung lobes in mice using microscopy-guided microdissection. Additionally, we demonstrate immunofluorescence (IF) staining of PVs to visualize cardiomyocytes and their interconnections within the PVs.

Autore in primo piano: Sviluppo di un modello traslazionale per la ricerca sulla fibrillazione atriale in tutte le specie 

Microdissezione e colorazione in immunofluorescenza di manicotti miocardici nelle vene polmonari murine

Atrial fibrillation is the most common arrhythmia, but the complex pathophysiology is still not fully understood. With our research, we contribute to a better understanding of the mechanisms that lead to the initiation and maintenance of atrial fibrillation. Translating medical research from bench to bedside is a major challenge.To address this, we established a translational pipeline from cellular models over mouse models to large animal models and pigs, allowing us to identify and validate novel therapeutic targets. Mice are often used for studying arrhythmia. However, it is challenging to study the pulmonary veins in mice.The pulmonary veins are the main triggers for atrial fibrillation in patients. Our protocol provides an effective guideline for identifying and micro-dissecting pulmonary veins to conduct further investigations.

Abbiamo eseguito la microdissezione, la colorazione e l'imaging dei PV in 10 topi di 12-16 settimane. Seguendo il protocollo, abbiamo microsezionato con successo i PV insieme al LA in tutti i topi sperimentali e abbiamo ottenuto sezioni con una visione completa dei PV in otto topi. Le immagini panoramiche sono state scattate con un ingrandimento di 10x per identificare la regione dell'orifizio PV (PVO) alla giunzione LA-PV, i PV extrapolmonari (PVex) (PV tra l'ilo polmonare e la giunzione LA-PV) e i PV intrapo...

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Questo protocollo dimostra l'isolamento guidato dalla microscopia e la colorazione in immunofluorescenza delle vene polmonari murine. Prepariamo campioni di tessuto contenenti l'atrio sinistro, le vene polmonari e i polmoni corrispondenti e li coloriamo per la troponina T cardiaca e la connessina 43.

Pulmonary veins (PVs) are the major source of ectopic beats in atrial arrhythmias and play a crucial role in the development and progression of atrial ...

La fibrillazione atriale è l'aritmia più comune, ma la complessa fisiopatologia non è ancora del tutto compresa. Con la nostra ricerca, contribuiamo a una migliore comprensione dei meccanismi che portano all'inizio e al mantenimento della fibrillazione atriale. Tradurre la ricerca medica dal laboratorio al letto del paziente è una sfida importante.Per affrontare questo problema, abbiamo stabilito una pipeline traslazionale da modelli cellulari su modelli murini a modelli animali di grandi dimensioni e suini, che ci consente di identificare e convalidare nuovi bersagli terapeutici. I topi sono spesso usati per studiare l'aritmia. Tuttavia, è difficile studiare le vene polmonari nei topi.Le vene polmonari sono i principali fattori scatenanti della fibrillazione atriale nei pazienti. Il nostro protocollo fornisce una linea guida efficace per l'identificazione e la micro-dissezione delle vene polmonari per condurre ulteriori indagini.

microdissection-immunofluorescence-staining-myocardial-sleeves-murine

Research

JoVE Journal

Medicine

Microdissection and Immunofluorescence Staining of Myocardial Sleeves in Murine Pulmonary Veins

509 Views.  Ludwig-Maximilians-University Munich (LMU). La fibrillazione atriale è l'aritmia più comune, ma la complessa fisiopatologia non è ancora del tutto compresa. Con la nostra ricerca, contribuiamo a una migliore comprensione dei meccanismi che portano all'inizio e al mantenimento della fibrillazione atriale. Tradurre la ricerca medica dal laboratorio al letto del paziente è una sfida importante.Per affrontare questo problema, abbiamo stabilito una pipeline traslazionale da modelli cellulari su modelli murini a modelli animali di...