Questo lavoro è stato supportato dalla National Natural Science Foundation of China (82000624), dal Programma di ricerca di base in scienze naturali dello Shaanxi (2022JQ-899 e 2021JM-268), dal Programma di supporto alle capacità di innovazione della provincia dello Shaanxi (2023KJXX-030), dal Piano di ricerca e sviluppo chiave della provincia dello Shaanxi, dal Progetto congiunto universitario-Progetto chiave (2021GXLH-Z-047), dalla Fondazione istituzionale del primo ospedale affiliato dell'Università di Xi'an Jiaotong (2021HL-42 e 2021HL-21).

Questo studio è stato approvato dal Comitato per l'etica degli esperimenti sugli animali dell'Università di Xi'an Jiaotong e condotto in conformità con le linee guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio.
1. Raccolta della milza
<ol><li>Utilizzare ratti Sprague Dawley maschi del peso di 250-280 g. Ospitare i ratti in stanze con temperatura e umidità controllate e fornire loro cibo e acqua ad libitum, tranne che per il digiuno prima dell'intervento chirurgico.</li>
	<li>Iniettare per via sottocutanea buprenorfina (0,05 ml/kg) come analgesico 1 ora prima dell'operazione. Anestetizzare il ratto mediante inalazione di isoflurano. Utilizzare una portata di 1,5 L/min di isoflurano al 5% per l'anestesia di induzione in una scatola di plexiglass e mantenere l'anestesia con una portata di 0,6-0,8 L/min di isoflurano al 2% attraverso una maschera. Conferma la profondità dell'anestesia pizzicando le dita dei piedi.</li>
	<li>Usa un rasoio elettrico per radere la pelle su tutto l'addome. Fissare il ratto in posizione supina sul tavolo operatorio. Iniettare 2 ml di soluzione salina eparinizzata (1.000 U di eparina) attraverso la vena dorsale del pene per ottenere l'anticoagulazione sistemica. Disinfettare la pelle rasata con una soluzione di iodio povidone e coprire con un panno sterile drappeggiato.</li>
	<li>Praticare un'incisione cruciforme con le forbici chirurgiche nell'addome, esporre la cavità addominale allungando con la pinza emostatica e capovolgere il fegato verso il diaframma. Esteriorizzare il tratto gastrointestinale sul lato destro dell'addome e coprirlo con una garza umida.</li>
	<li>Separare e tagliare con cura il legamento splenogastrico per esporre l'ilo splenico. NOTA: La milza, che appare come una struttura allungata rossastra, di circa 3,0 cm x 0,6 cm x 0,6 cm, può essere identificata nell'addome sinistro.</li>
	<li>Separare ed esporre gradualmente l'arteria epatica comune, l'arteria gastroduodenale e l'arteria splenica sezionando lungo l'ilo splenico. Legare e tagliare l'arteria gastroduodenale e l'arteria epatica comune dissociando progressivamente il tessuto circostante.</li>
	<li>Capovolgere la milza verso il lato destro per esporre l'aorta addominale. Eseguire delicatamente la dissezione smussata ed esporre l'aorta addominale e il tronco celiaco utilizzando tamponi di cotone. Posizionare una sutura di seta 3-0, di circa 3 cm di lunghezza, sopra e sotto i rami del tronco celiaco, e posizionare una sutura di seta 6-0, di circa 10 cm di lunghezza, in corrispondenza del ramo del tronco celiaco.</li>
	<li>Legatura dell'aorta addominale sotto e sopra i rami del tronco celiaco. Fai una piccola incisione sul ramo arterioso. Sollevare delicatamente la sutura di seta 6-0, inserire un catetere venoso da 24 G nell'arteria splenica lungo il tronco celiaco, legarlo e fissarlo.</li>
	<li>Utilizzando una pompa a siringa a una velocità di 4 ml/min, infondere soluzione fisiologica normale eparinizzata (25 U/mL) a un volume di 50 ml. Allo stesso tempo, recidere la vena porta come canale di deflusso per consentire al fluido infuso di defluire dalla milza. L'animale viene soppresso per dissanguamento.</li>
	<li>Sezionare con cura il tessuto circostante della milza, evitando danni al pancreas, preservando i principali vasi accessori.</li>
	<li>Verificare la presenza di eventuali perdite intorno alla milza, quindi rimuovere la milza e il pancreas e sciacquarli con soluzione fisiologica. NOTA: La milza e il pancreas dei ratti sono strettamente collegati, con il pancreas che avvolge l'arteria splenica. Se la milza viene rimossa separatamente, può essere difficile legare numerosi piccoli vasi sanguigni. In questa procedura, la milza viene rimossa insieme al pancreas. Dopo la decellularizzazione, la milza e il pancreas diventano trasparenti ed è visibile la microvascolarizzazione, il che facilita la conservazione della milza con vasi sanguigni intatti.</li>
	<li>Trasferire la milza in una provetta da centrifuga da 50 ml riempita con soluzione fisiologica normale e conservarla in congelatore a -80 °C. NOTA: La milza e il catetere venoso inseriti nell'arteria splenica saranno crioconservati insieme per una comoda connessione durante gli esperimenti di perfusione.</li>
</ol>2. Decellularizzazione della milza
<ol><li>Ripetere il ciclo di congelamento-scongelamento 3 volte in un contenitore sterile per lisare le cellule della milza. NOTA: Il ciclo di congelamento-disgelo è un metodo fisico utilizzato per la decellularizzazione dello scaffold. Il tessuto della milza viene posto in un congelatore a -80 °C per una notte per il congelamento, quindi rimosso dall'ambiente a bassa temperatura e posto in un bagno d'acqua a temperatura ambiente o a 37 °C per lo scongelamento. Questo processo di congelamento e scongelamento viene ripetuto 3-6 volte, il che interrompe le membrane cellulari e porta alla lisi cellulare.</li>
	<li>Installare un sistema di perfusione all'interno di un banco pulito comprendente una pompa peristaltica, un serbatoio da 2 L, un tubo in silicone con un diametro interno di 2,4 mm e una trappola per bolle (Figura 1).</li>
	<li>Riempire il sistema di perfusione con acqua deionizzata (ddH2O) e mantenerlo in funzione per 10 min.</li>
	<li>Trasferire con cautela la milza raccolta nel contenitore riempito di O ddH2.</li>
	<li>Collegare il tubo di silicone al catetere venoso che è stato inserito nell'arteria splenica.</li>
	<li>Iniziare la perfusione con ddH2O a una velocità di 2 mL/min per 30 min.</li>
	<li>Continuare la perfusione con ddH2O a una velocità di 4 mL/min per 30 min.</li>
	<li>Perfondere con soluzione SDS allo 0,1% (p/v) per 4 ore.</li>
	<li>Perfondere con la soluzione di Triton X-100 all'1% (v/v) per 2 ore.</li>
	<li>Perfondere con PBS a una velocità di 4 ml/min per 4 ore per lavare il DSM. NOTA: Utilizzo della pompa peristaltica per la perfusione unidirezionale di tutti i liquidi.</li>
	<li>Al termine della perfusione, legare e sezionare i rami vascolari tra il pancreas e la milza, quindi rimuovere il pancreas. Conservare il DSM in una provetta da centrifuga da 50 ml pulita e sigillata imbevuta di PBS contenente il 10% di penicillina-streptomicina a -20 °C fino al momento dell'uso per esperimenti futuri.</li>
</ol>

Preparazione decellularizzata della matrice della milza di ratto per l'ingegneria del tessuto epatico

<ol>
	<li>Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=State+of+the+art+and+perspectives+in+liver+transplantation.">State of the art and perspectives in liver transplantation.</a> Hepatobiliary Pancreat Dis Int. 22 (1), 1-3 (2023).</li><li>Hautz, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cell+dynamics+deconvoluted+by+single-cell+RNA+sequencing+in+normothermic+machine+perfusion+of+the+liver.">Immune cell dynamics deconvoluted by single-cell RNA sequencing in normothermic machine perfusion of the liver.</a> Nat Commun. 14 (1), 2285 (2023).</li><li>Cardini, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+confocal+imaging+as+a+novel+tool+to+assess+liver+quality:+insights+from+a+murine+model.">Live confocal imaging as a novel tool to assess liver quality: insights from a murine model.</a> Transplantation. 104 (12), 2528-2537 (2020).</li><li>Ding, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cell-derived+exosomes:+a+promising+therapeutic+agent+for+the+treatment+of+liver+diseases.">Mesenchymal stem cell-derived exosomes: a promising therapeutic agent for the treatment of liver diseases.</a> Int J Mol Sci. 23 (18), 10972 (2022).</li><li>Yaghoubi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prednisolone+and+mesenchymal+stem+cell+preloading+protect+liver+cell+migration+and+mitigate+extracellular+matrix+modification+in+transplanted+decellularized+rat+liver.">Prednisolone and mesenchymal stem cell preloading protect liver cell migration and mitigate extracellular matrix modification in transplanted decellularized rat liver.</a> Stem Cell Res Ther. 13 (1), 36 (2022).</li><li>Uygun, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+reengineering+through+development+of+a+transplantable+recellularized+liver+graft+using+decellularized+liver+matrix.">Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix.</a> Nat Med. 16 (7), 814-820 (2010).</li><li>Xiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+riboflavin/UVA+cross-linking+on+anti-degeneration+and+promoting+angiogenic+capability+of+decellularized+liver+matrix.">The effect of riboflavin/UVA cross-linking on anti-degeneration and promoting angiogenic capability of decellularized liver matrix.</a> J Biomed Mater Res A. 105 (10), 2662-2669 (2017).</li><li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implantation+strategy+of+tissue-engineered+liver+based+on+decellularized+spleen+matrix+in+rats.">Implantation strategy of tissue-engineered liver based on decellularized spleen matrix in rats.</a> J South Med Univ. 38 (6), 698-703 (2018).</li><li>Xiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+spleen+matrix+for+reengineering+functional+hepatic-like+tissue+based+on+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells.">Decellularized spleen matrix for reengineering functional hepatic-like tissue based on bone marrow mesenchymal stem cells.</a> Organogenesis. 12 (3), 128-142 (2016).</li><li>Gao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocyte+culture+in+autologous+decellularized+spleen+matrix.">Hepatocyte culture in autologous decellularized spleen matrix.</a> Organogenesis. 11 (1), 16-29 (2015).</li><li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemocompatibility+improvement+of+decellularized+spleen+matrix+for+constructing+transplantable+bioartificial+liver.">Hemocompatibility improvement of decellularized spleen matrix for constructing transplantable bioartificial liver.</a> Biomed Mater. 14 (2), 25003 (2019).</li><li>Somuncu, &. #. 2. 1. 4. ;. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularization+concept+in+regenerative+medicine.">Decellularization concept in regenerative medicine.</a> Adv Exp Med Biol. 1212, 71-85 (2020).</li><li>Neishabouri, A., Soltani, K. A., Daghigh, F., Kajbafzadeh, A. M., Majidi, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularization+in+tissue+engineering+and+regenerative+medicine:+evaluation,+modification,+and+application+methods.">Decellularization in tissue engineering and regenerative medicine: evaluation, modification, and application methods.</a> Front Bioeng Biotech. 10, 805299 (2022).</li><li>Brown, M., Li, J., Moraes, C., Tabrizian, M., Li-Jessen, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+extracellular+matrix:+New+promising+and+challenging+biomaterials+for+regenerative+medicine.">Decellularized extracellular matrix: New promising and challenging biomaterials for regenerative medicine.</a> Biomaterials. 289, 121786 (2022).</li><li>Gui, L., Muto, A., Chan, S. A., Breuer, C. K., Niklason, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+decellularized+human+umbilical+arteries+as+small-diameter+vascular+grafts.">Development of decellularized human umbilical arteries as small-diameter vascular grafts.</a> Tissue Eng Pt A. 15 (9), 2665-2676 (2009).</li><li>Li, T., Javed, R., Ao, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenogeneic+decellularized+extracellular+matrix-based+biomaterials+For+peripheral+nerve+repair+and+regeneration.">Xenogeneic decellularized extracellular matrix-based biomaterials For peripheral nerve repair and regeneration.</a> Curr Neuropharmacol. 19 (12), 2152-2163 (2021).</li><li>Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+tissue+and+whole+organ+decellularization+processes.">An overview of tissue and whole organ decellularization processes.</a> Biomaterials. 32 (12), 3233-3243 (2011).</li></ol>

Gli autori non hanno dichiarato conflitti di interesse.

I BAL rappresentano un approccio efficace per il trattamento della malattia epatica allo stadio terminale, in particolare nei casi in cui il trapianto di fegato è ostacolato dall'attuale carenza di organi da donatore6. Un'opzione promettente per la creazione di BAL è l'utilizzo del DLM, che preserva la MEC naturale e la struttura vascolare del fegato nativo. Tuttavia, la scarsità di DLM umano e i potenziali rischi di infezione e immunogenicità associati al DLM animale pongono limitazioni signi...

Il trapianto di fegato rimane l'unico trattamento definitivo per la malattia epatica allo stadio terminale 1,2,3. Tuttavia, la carenza critica e il declino della qualità degli organi dei donatori hanno aumentato la necessità di trattamenti alternativi4. Nel regno della medicina rigenerativa, i fegati bioartificiali (BAL) che utilizzano la matrice epatica decellularizzata (DLM) sono emersi come soluzioni promettenti 5,6,7. Il DLM preserva la struttura epatica originale, compresa la sua intricata rete microvascolare e i componenti della MEC, offrendo un'impalcatura per la creazione di BAL trapiantabili che potrebbero potenzialmente alleviare le malattie del fegato.
Nonostante le promesse, l'adozione di questa tecnologia deve affrontare delle sfide, in particolare nell'approvvigionamento di DLM adatti. I DLM di origine umana scarseggiano, mentre quelli di origine animale comportano rischi di trasmissione di malattie e rigetto immunitario. In un approccio innovativo, la nostra ricerca ha esplorato l'uso di una matrice milza decellularizzata (DSM) come base per i BAL 8,9,10,11. La milza è più facilmente disponibile in varie situazioni mediche, come l'ipertensione portale, la rottura traumatica, la porpora trombocitopenica idiopatica e la donazione dopo morte cardiaca. Pertanto, le milze sono più ampiamente disponibili dei fegati per scopi di ricerca. I pazienti che hanno subito splenectomie non soffrono di condizioni gravi, confermando ulteriormente la dispensabilità della milza. Il microambiente della milza, in particolare la matrice extracellulare e le sinusoidi, è simile a quello del fegato. Ciò rende la milza un organo adatto per l'adesione e la proliferazione cellulare nella ricerca sul trapianto di epatociti. Sulla base di questi risultati, le nostre precedenti indagini hanno dimostrato che i DSM condividono microstrutture e componenti comparabili con i DLM e possono supportare la sopravvivenza e la funzione degli epatociti, inclusa la produzione di albumina e urea. Inoltre, è stato dimostrato che i DSM migliorano la differenziazione epatica delle cellule staminali mesenchimali del midollo osseo, portando a una funzionalità migliore e coerente.
Utilizzando DSM trattati con eparina, abbiamo ingegnerizzato BAL funzionali in grado di dimostrare un'efficace anticoagulazione a breve termine e una parziale compensazione della funzionalità epatica11. Di conseguenza, questo DSM tridimensionale è una promessa significativa per il progresso dell'ingegneria del tessuto epatico e della terapia cellulare. In questo lavoro, presentiamo i metodi dettagliati di raccolta della milza di ratto e preparazione del DSM che preservano le microstrutture e i componenti dell'ECM.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anesthesia Machine</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>tabletop</td>
			<td>animal anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bubble trap</td>
			<td>Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd.</td>
			<td>pore diameter: 5 &#956;m</td>
			<td>prevent air bubbles</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>TIPR Pharmaceutical Responsible Co.,Ltd</td>
			<td></td>
			<td>an analgesic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic Forceps</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments&#160; Co., Ltd</td>
			<td>J31020</td>
			<td>surgical tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparinized Saline</td>
			<td>SPH No.1 Biochemical &#38; Pharmaceutical Co., LTD&#160;</td>
			<td></td>
			<td>prevent the formation of thrombosis&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD life Science Co.</td>
			<td></td>
			<td>anesthetic:for the induction and maintenanceof anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin&#160;</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>C0222</td>
			<td>antibiotics in vitro to prevent microbial contamination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump</td>
			<td>Baoding Longer Precision Pump Co., Ltd.</td>
			<td>BT100-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.</td>
			<td>4481228</td>
			<td>phosphoric acid buffer salt solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone Tube</td>
			<td>Baoding Longer Precision Pump Co., Ltd.</td>
			<td>2.4&#215;0.8mm</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk Suture</td>
			<td>Yangzhou Jinhuan Medical Instrument Factory</td>
			<td>6-0 and 3-0</td>
			<td>ligate blood vessels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Dodecyl Sulfate</td>
			<td>Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.</td>
			<td>151-21-3</td>
			<td>ionic detergent, dissolves both cell and nuclear membranes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Pump</td>
			<td>Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd</td>
			<td>BeneFusion SP5</td>
			<td>intravenous infusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td>non-ionic detergent, disrupts lipid-lipid, lipid-protein, and DNA-protein interactions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Venous Catheter</td>
			<td>B. Braun Company</td>
			<td>24G</td>
			<td>inserting the spleen artery</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fabrication of decellularized spleen matrix derived from rats

Il trapianto di fegato è il trattamento principale per la malattia epatica allo stadio terminale. Tuttavia, la carenza e l'inadeguata qualità degli organi dei donatori richiedono lo sviluppo di terapie alternative. I fegati bioartificiali (BAL) che utilizzano la matrice epatica decellularizzata (DLM) sono emersi come soluzioni promettenti. Tuttavia, l'approvvigionamento di DLM adatti rimane impegnativo. L'uso di una matrice di milza decellularizzata (DSM) è stato esplorato come base per i BAL, offrendo un'alternativa prontamente disponibile. In questo studio, la milza di ratto è stata raccolta e decellularizzata utilizzando una combinazione di cicli di congelamento-disgelo e perfusione con reagenti di decellularizzazione. Il protocollo ha preservato le microstrutture e i componenti della matrice extracellulare (ECM) all'interno del DSM. Il processo completo di decellularizzazione ha richiesto circa 11 ore, risultando in una ECM intatta all'interno del DSM. L'analisi istologica ha confermato la rimozione dei componenti cellulari mantenendo la struttura e la composizione della MEC. Il protocollo presentato fornisce un metodo completo per ottenere il DSM, offrendo potenziali applicazioni nell'ingegneria dei tessuti epatici e nella terapia cellulare. Questi risultati contribuiscono allo sviluppo di approcci alternativi per il trattamento della malattia epatica allo stadio terminale.

Liver transplantation remains the only definitive treatment for end-stage liver disease1,2,3. However, the critical shortage and declining quality of donor organs have heightened the need for alternative treatments4. In the realm of regenerative medicine, bioartificial livers (BALs) utilizing decellularized liver matrix (DLM) have emerged as promising solutions5,6,7. The DLM preserves the original liver structure, including its intricate microvascular network and components of the ECM, offering a scaffold for creating transplantable BALs that could potentially alleviate liver diseases.
Despite the promise, the adoption of this technology faces challenges, particularly in sourcing suitable DLMs. Human-derived DLMs are in short supply, while those from animal sources carry the risks of disease transmission and immune rejection. In an innovative approach, our research has explored the use of a decellularized spleen matrix (DSM) as a foundation for BALs8,9,10,11. Spleens are more readily available in various medical situations, such as portal hypertension, traumatic rupture, idiopathic thrombocytopenic purpura, and donation after cardiac death. Therefore, spleens are more widely available than livers for research purposes. Patients who have undergone splenectomies do not suffer from severe conditions, further confirming the dispensability of the spleen. The microenvironment of the spleen, particularly the extracellular matrix and sinusoids, is similar to that of the liver. This makes the spleen a suitable organ for cell adhesion and proliferation in hepatocyte transplantation research. Based on these findings, our previous investigations have demonstrated that DSMs share comparable microstructures and components with DLMs and can support the survival and function of hepatocytes, including albumin and urea production. Furthermore, DSMs have been shown to enhance the hepatic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells, leading to improved and consistent functionality.
By employing DSMs treated with heparin, we have engineered functional BALs capable of demonstrating effective short-term anticoagulation and partial liver function compensation11. Consequently, this three-dimensional DSM holds significant promise for the advancement of liver tissue engineering and cell therapy. In this work, we present the detailed methods of harvesting rat spleens and preparing DSM that preserve the microstructures and components of the ECM.

Autore in primo piano: Utilizzo della matrice decellularizzata della milza per fegati bioartificiali

Fabbricazione di matrice di milza decellularizzata derivata da ratti

We purpose a novel strategy that involves employing a decellularized spleen matrix as an alternative scaffold to bioartificial livers. We showed the detailed procedure of harvesting rat spleen and preparing decellularized spleen matrix that preserves the macrostructures and the components of the extracellular matrix. Our protocol provides a readily available spleen matrix as an alternative to scarce donor livers.Our protocol present a method for the preparation of decellularized spleen matrices. Demonstrating efficiency, stability, and minimal invasiveness, this method maintains the spleen inherent architecture, composition, and the natural vascular network. It offers the scaffold for cell implantation and three-dimensional dynamic culture, thereby establishing a basis for advancing investigations in tissue-engineered liver.

Questo protocollo utilizzava una combinazione di ripetuti cicli di congelamento-disgelo e perfusione con reagenti di decellularizzazione per la decellularizzazione della milza di ratto. La completa decellularizzazione della milza è stata raggiunta in circa 11 ore (Figura 2A). Durante il processo di decellularizzazione, il colore della milza è gradualmente passato dal rosso intenso a un rosso chiaro screziato e, infine, a un aspetto bianco traslucido (Figura 2B...

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La matrice decellularizzata della milza (DSM) ha applicazioni promettenti nel campo dell'ingegneria del tessuto epatico. Questo protocollo delinea la procedura per la preparazione del DSM di ratto, che include la raccolta della milza di ratto, la loro decellularizzazione attraverso la perfusione e la valutazione del DSM risultante per confermarne le caratteristiche.

Liver transplantation is the primary treatment for end-stage liver disease. However, the shortage and inadequate quality of donor organs necessitate the ...

Ci proponiamo una nuova strategia che prevede l'impiego di una matrice di milza decellularizzata come impalcatura alternativa ai fegati bioartificiali. Abbiamo mostrato la procedura dettagliata di raccolta della milza di ratto e preparazione della matrice di milza decellularizzata che preserva le macrostrutture e i componenti della matrice extracellulare. Il nostro protocollo fornisce una matrice della milza prontamente disponibile come alternativa ai rari fegati dei donatori.Il nostro protocollo presenta un metodo per la preparazione di matrici di milza decellularizzata. Dimostrando efficienza, stabilità e minima invasività, questo metodo mantiene l'architettura, la composizione e la rete vascolare naturale intrinseche della milza. Offre l'impalcatura per l'impianto cellulare e la coltura dinamica tridimensionale, stabilendo così una base per l'avanzamento delle indagini nel fegato di ingegneria tissutale.

fabrication-of-decellularized-spleen-matrix-derived-from-rats

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Fabrication of Decellularized Spleen Matrix Derived from Rats

449 Views.  The First Affiliated Hospital of Xi'an Jiaotong University. Ci proponiamo una nuova strategia che prevede l'impiego di una matrice di milza decellularizzata come impalcatura alternativa ai fegati bioartificiali. Abbiamo mostrato la procedura dettagliata di raccolta della milza di ratto e preparazione della matrice di milza decellularizzata che preserva le macrostrutture e i componenti della matrice extracellulare. Il nostro protocollo fornisce una matrice della milza prontamente disponibile come alternativa ai rari fegati dei donatori.Il nostro...

Video: Autore in primo piano: Utilizzo della matrice decellularizzata della milza per fegati bioartificiali

Liver transplantation is the primary treatment for end-stage liver disease. However, the shortage and inadequate quality of donor organs necessitate the development of alternative therapies. Bioartificial livers (BALs) utilizing decellularized liver matrix (DLM) have emerged as promising solutions. However, sourcing suitable DLMs remains challenging. The use of a decellularized spleen matrix (DSM) has been explored as a foundation for BALs, offering a readily available alternative. In this study, rat spleens were harvested and decellularized using a combination of freeze-thaw cycles and perfusion with decellularization reagents. The protocol preserved the microstructures and components of the extracellular matrix (ECM) within the DSM. The complete decellularization process took approximately 11 h, resulting in an intact ECM within the DSM. Histological analysis confirmed the removal of cellular components while retaining the ECM's structure and composition. The presented protocol provides a comprehensive method for obtaining DSM, offering potential applications in liver tissue engineering and cell therapy. These findings contribute to the development of alternative approaches for the treatment of end-stage liver disease.

The decellularized spleen matrix (DSM) holds promising applications in the field of liver tissue engineering. This protocol outlines the procedure for preparing rat DSM, which includes harvesting rat spleens, decellularizing them through perfusion, and evaluating the resulting DSM to confirm its characteristics.