マウスにおける大腸肛門炎モデルの設定と漢方薬の治療効果評価

要約

このプロトコルはデキストランの硫酸塩ナトリウムと結合されるアゾメタンによって引き起こされる潰瘍性coloproctitis準のcolorectal癌のマウス モデルを提供する。このモデルは、大腸がんの予防と治療における伝統的な漢方薬化合物の有効性を評価するために使用されました。

要約

大腸がん(CRC)は消化器系の一般的な悪性腫瘍であり、世界で3番目に多い悪性腫瘍であり、悪性腫瘍関連死因の第2位となっています。潰瘍性大腸炎(UC)は前癌性病変であり、UC関連CRC(UC-CRC)は大腸がんの最も一般的なサブタイプです。したがって、合理的なUC-CRCモデルは、新薬開発の基礎であり、保証です。漢方薬(TCM)は、その優れた有効性により、UC-CRCの治療に広く使用されています。中医学の古典的な強壮剤処方として、Liujunzi煎じ薬(LJZD)はUC-CRCの治療に広く使用されています。本研究では、アゾメタンとデキストラン硫酸ナトリウムを併用してUC-CRCモデルを確立し、LJZDを投与した。このデータから、LJZDは、マウスの体重、大腸の長さ、病理学的および炎症的因子、大腸バリア機能、およびがんマーカーを使用して、UC-CRCのがん転移を効果的に抑制できることが確認されました。このプロトコルは、UC-CRC の予防と治療における TCM の有効性を評価するためのシステムを提供します。

概要

大腸がん(CRC)は、一般的な消化器悪性腫瘍であり、世界で3番目に多い悪性腫瘍であり、世界で2番目に多い死因であり、世界のがん発生率の10%、がん関連死全体の9.4%を占めています^1,2。遺伝的要因、慢性炎症、高脂肪食、糖尿病、および異常な腸内細菌叢は、大腸がんの危険因子^です3,4。その中で、炎症性腸疾患、特に潰瘍性大腸炎(UC)は、CRC ^5,6の明らかな危険因子です。UC関連CRC(UC-CRC)は、大腸の慢性炎症に基づく炎症、非定型過形成、および癌の移行過程であり、CRC ^7,8の典型的な腺腫-腺癌発生モデルとは異なります。一般集団と比較して、炎症性腸疾患の患者では大腸がんのリスクが約10〜40倍高くなります⁹。

現在、大腸がんの標準治療は依然として手術であり、腫瘍の位置と病期に応じて、放射線療法、全身薬物療法、またはその両方の組み合わせが可能です

プロトコル

この動物実験は、長春中医薬大学倫理委員会によって承認されています(記録番号:2021214)。特異的病原体フリーC57BL/6Jマウス(8-10週、体重18-22g)の雌雄を、22°C、相対湿度65%の独立換気ケージに収容した。マウスは、水と食事を自由に利用できる適応摂食を7日行った後に実験を開始しました。

1. 薬剤の調製

1. LJZDの調製
   注:使用された漢方薬は長春中医薬大学付属病院から購入し、本物の漢方薬であることが確認されました( 表1参照)。
   1. 唐深(12g)、白珠(12g)、甘草(6g)、陳彡(12g)、江板霞(9g)を専用の陶器鍋に入れます( 材料表を参照)。1000 mLの蒸留水を加え、室温で1時間浸漬します( 図1Aを参照)。
   2. 粉末12gをグラインダーで微粉末にし、別の容器に蒸留水300mLを室温で1時間浸します。
   3. 専用の陶器鍋で上記の漢方薬を混ぜます。混合物を沸騰させ、300 mLの煎じ薬だけが残るまで中火で続けます。濾過には医療用ガーゼを使用し、濾液は室温で保存してください。
   4. 1000mLの蒸留水を加え、上記の煎じ薬操作をもう一度繰り返します。医療用ガーゼを使用して再度ろ過します。濾液を混ぜ合わ....

ディスカッション

大腸がんは世界で最も多いがんの1つであり、毎年約1,148,000人が新たに発症し、576,000人以上が死亡しています。大腸がんは、遺伝性、散発性、UC-CRC³¹など、さまざまな原因に応じて3つのタイプに分けることができます。UCなどの炎症性腸疾患患者における大腸がんの発生率は、一般集団のそれよりも有意に高い。UCは、典型的な腺腫-腺癌経路とは異なる炎症性-がん経路を介?.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Azoxymethane	Sigma	A5486
5-amino salicylic acid	Kuihua Pharmaceuticals Group Jiamusi Luling Pharmaceutical Co., Ltd	3819413
C57BL/6J mice	Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd	NO 210726210100853716
Cover slip	Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd	10212432C
DAB color development kit	Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd	2005289
Dewatering machine	Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd	JJ-12J
Dextran sulfate sodium	Dalian Meilun Biotechnology Co., Ltd	MB5535
Embedding machine	Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd	JB-P5
Hematoxylin-eosin dye	Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd	B1000
IL-6	Jiangsu Meimian Industrial Co., Ltd	MM-0163M2
Isoflurane	RWD Life Science Co., Ltd	R510-22-10
KI67 primary antibody	Google Biotechnology Inc	GB121141
Neutral gum	Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd	10004160
Object slide	Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd	10212432A
Occludin primary antibody	Affnity	DF7504
Orthostatic optical microscope	Nikon	Nikon Eclipse CI
Pathological microtome	Shanghai Leica Instrument Co., Ltd	RM2016
ZO-1 primary antibody	Abcam	ab221547