생쥐의 대장염 암 모델 확립 및 한의학 치료 효과 평가

요약

이 프로토콜은 덱스트란 황산염 나트륨과 결합된 아조메탄에 의해 유발된 궤양성 결장직장염 관련 대장암의 마우스 모델을 제공합니다. 이 모델은 대장암의 예방 및 치료에서 한의학 화합물의 효능을 평가하는 데 사용되었습니다.

초록

대장암(CRC)은 소화계의 흔한 악성 종양으로 전 세계적으로 세 번째로 흔한 악성 종양이자 악성 종양 관련 사망의 두 번째 주요 원인이 되었습니다. 궤양성 대장막염(UC)은 전암성 병변이며, UC 관련 CRC(UC-CRC)는 CRC의 가장 흔한 하위 유형입니다. 따라서 합리적인 UC-CRC 모델은 신약개발의 초석이자 보장입니다. 중국 전통 의학(TCM)은 효능이 좋기 때문에 UC-CRC 치료에 널리 사용되었습니다. TCM의 고전적인 강장제 처방으로 Liujunzi 달인 (LJZD)은 UC-CRC 치료에 널리 사용되었습니다. 본 연구에서는 아조메탄과 덱스트란 황산나트륨을 혼합하여 UC-CRC 모델을 확립하고, LJZD를 투여하였다. 이 데이터는 LJZD가 생쥐의 체중, 대장 길이, 병리학적 및 염증 인자, 대장 장벽 기능 및 암 마커를 사용하여 UC-CRC에서 암 전이를 효과적으로 억제할 수 있음을 확인했습니다. 이 프로토콜은 UC-CRC의 예방 및 치료에서 TCM의 효능을 평가하기 위한 시스템을 제공합니다.

서문

대장암(CRC)은 흔한 위장관 악성 종양으로, 세계에서 세 번째로 흔한 악성 종양이자 두 번째로 흔한 사망 원인으로, 전 세계 암 발생률의 10%, 전체 암 관련 사망의 9.4%를 차지합니다 ^1,2. 유전적 요인, 만성 염증, 고지방 식단, 당뇨병 및 비정상적인 장내 세균총은 CRC ^3,4의 위험 요인입니다. 그 중에서도 염증성 장 질환, 특히 궤양성 대장막염(UC)은 CRC ^5,6의 명백한 위험 인자입니다. UC-associated CRC (UC-CRC)는 대장직장의 만성 염증을 기반으로 하는 염증, 비정형 증식증 및 암의 전이 과정으로, CRC ^7,8의 전형적인 선종-선암 발생 모델과는 다릅니다. CRC의 위험은 일반인에 비해 염증성 장질환 환자에서 약 10-40배 더 높다⁹.

현재....

프로토콜

동물 시술은 장춘 중의대학 윤리위원회의 승인을 받았습니다(기록 번호: 2021214). 특정 병원체가 없는 C57BL/6J 마우스(8-10주, 체중 18-22g), 수컷 및 암컷은 22°C 및 65% 상대 습도에서 독립적으로 환기되는 케이지에 수용되었습니다. 생쥐는 7 일 적응 먹이 후에 실험을 시작했으며, 그 동안 물과 식단에 자유롭게 접근 할 수있었습니다.

1. 약물 준비

1. LJZD의 제조
   참고: 사용된 한약은 장춘중의과대학 부속병원에서 구입한 것으로 정품으로 확인되었다( 표 1 참조).
   1. Dangshen (12g), Baizhu (12g), Gancao (6g), Chenpi (12g), Jiangbanxia (9g)를 특수 도자기 냄비에 넣습니다 ( 재료 표 참조). 증류수 1000mL를 넣고 실온에서 1시간 동안 담가둡니다( 그림 1A 참조).
   2. 분말 12g 그라인더로 미세한 분말에 풀링하고 실온에서 1시간 동안 다른 용기에 증류수 300mL를 담근다.
   3. 위의 한약을 특수 도자기 냄비에 섞습니다. 혼합물을 끓인 다음 달인 물....

토론

CRC는 전 세계적으로 가장 흔한 암 중 하나로, 매년 약 1,148,000명의 새로운 환자가 발생하고 576,000명 이상이 사망합니다. CRC는 유전성, 산발성 및 UC-CRC³¹을 포함한 다양한 원인에 따라 세 가지 유형으로 나눌 수 있습니다. UC와 같은 염증성 장 질환 환자에서 CRC의 발생률은 일반 인구보다 훨씬 높습니다. UC는 염증-암 경로를 통해 CRC의 발달을 자극하는데, 이는 전형적인 선종-선암 경?.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Azoxymethane	Sigma	A5486
5-amino salicylic acid	Kuihua Pharmaceuticals Group Jiamusi Luling Pharmaceutical Co., Ltd	3819413
C57BL/6J mice	Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd	NO 210726210100853716
Cover slip	Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd	10212432C
DAB color development kit	Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd	2005289
Dewatering machine	Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd	JJ-12J
Dextran sulfate sodium	Dalian Meilun Biotechnology Co., Ltd	MB5535
Embedding machine	Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd	JB-P5
Hematoxylin-eosin dye	Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd	B1000
IL-6	Jiangsu Meimian Industrial Co., Ltd	MM-0163M2
Isoflurane	RWD Life Science Co., Ltd	R510-22-10
KI67 primary antibody	Google Biotechnology Inc	GB121141
Neutral gum	Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd	10004160
Object slide	Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd	10212432A
Occludin primary antibody	Affnity	DF7504
Orthostatic optical microscope	Nikon	Nikon Eclipse CI
Pathological microtome	Shanghai Leica Instrument Co., Ltd	RM2016
ZO-1 primary antibody	Abcam	ab221547