<p class="jove_content">著者は、原稿の重要な読書のためにヒューストンの研究室のメンバーに感謝したいと思います。研究は、DWHに与え国立衛生研究所（GM083999）によってサポートされています</p>

<ol>
	<li>Brun, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte+maturation+in+vitro:+contribution+of+the+oviduct+to+total+maturation+in+Xenopus+laevis.">Oocyte maturation in vitro: contribution of the oviduct to total maturation in Xenopus laevis.</a> <em style='font-style: italic'>Experientia</em>. <b>31</b>, 1275-1276 (1975).</li><li>Elinson, R. P., Pasceri, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+UV-sensitive+targets+in+dorsoanterior+specification+of+frog+embryos.">Two UV-sensitive targets in dorsoanterior specification of frog embryos.</a> <em style='font-style: italic'>Development</em>. <b>106</b>, 511-518 (1989).</li><li>Heasman, J., Holwill, S., Wylie, C. C., C, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fertilization+of+cultured+Xenopus+oocytes+and+use+in+studies+of+maternally+inherited+molecules.">Fertilization of cultured Xenopus oocytes and use in studies of maternally inherited molecules.</a> <em style='font-style: italic'>Methods Cell Biol</em>. <b>36</b>, 213-230 (1991).</li><li>Holwill, S., Heasman, J., Crawley, C., Wylie, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axis+and+germ+line+deficiencies+caused+by+u.v+irradiation+of+Xenopus+oocytes+cultured+in+vitro.">Axis and germ line deficiencies caused by u.v irradiation of Xenopus oocytes cultured in vitro.</a> <em style='font-style: italic'>Development</em>. <b>100</b>, 735-743 (1987).</li><li>Houston, D. W., King, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+role+for+Xdazl,+a+germ+plasm-localized+RNA,+in+the+differentiation+of+primordial+germ+cells+in+Xenopus.">A critical role for Xdazl, a germ plasm-localized RNA, in the differentiation of primordial germ cells in Xenopus.</a> <em style='font-style: italic'>Development</em>. <b>127</b>, 447-456 (2000).</li><li>Mir, A., Heasman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+the+mother+can+help:+studying+maternal+Wnt+signaling+by+anti-sense-mediated+depletion+of+maternal+mRNAs+and+the+host+transfer+technique.">How the mother can help: studying maternal Wnt signaling by anti-sense-mediated depletion of maternal mRNAs and the host transfer technique.</a> <em style='font-style: italic'>Methods Mol Biol</em>. <b>469</b>, 417-429 (2008).</li><li>Rugh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Experimental Embryology: Techniques and procedures</em>. , (1962).</li><li>Smith, L. D., Ecker, R. E., Subtelny, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+induction+of+physiological+maturation+in+Rana+pipiens+oocytes+removed+from+their+ovarian+follicles.">In vitro induction of physiological maturation in Rana pipiens oocytes removed from their ovarian follicles.</a> <em style='font-style: italic'>Dev Biol</em>. <b>17</b>, 627-643 (1968).</li><li>Smith, L. D., Xu, W., Varnold, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oogenesis+and+oocyte+isolation.">Oogenesis and oocyte isolation.</a> <em style='font-style: italic'>Methods Cell Biol</em>. <b>36</b>, 45-60 (1991).</li><li>Woolf, T. M., Jennings, C. G., Rebagliati, M., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stability,+toxicity+and+effectiveness+of+unmodified+and+phosphorothioate+antisense+oligodeoxynucleotides+in+Xenopus+oocytes+and+embryos.">The stability, toxicity and effectiveness of unmodified and phosphorothioate antisense oligodeoxynucleotides in Xenopus oocytes and embryos.</a> <em style='font-style: italic'>Nucleic Acids Res</em>. <b>18</b>, 1763-1769 (1990).</li><li>Wylie, C., Kofron, M., Payne, C., Anderson, R., Hosobuchi, M., Joseph, E., Heasman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+beta-catenin+establishes+a+'dorsal+signal'+in+early+Xenopus+embryos.">Maternal beta-catenin establishes a 'dorsal signal' in early Xenopus embryos.</a> <em style='font-style: italic'>Development</em>. <b>122</b>, 2987-2996 (1996).</li><li>Zhang, J., Houston, D. W., King, M. L., Payne, C., Wylie, C., Heasman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+maternal+VegT+in+establishing+the+primary+germ+layers+in+Xenopus+embryos.">The role of maternal VegT in establishing the primary germ layers in Xenopus embryos.</a> <em style='font-style: italic'>Cell</em>. <b>94</b>, 515-524 (1998).</li><li>Zuck, M. V., Wylie, C. C., Heasman, J., Richter, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+mRNAs+in+Xenopus+embryos:+an+antisense+approach..">Maternal mRNAs in Xenopus embryos: an antisense approach..</a> <em style='font-style: italic'>A comparative methods approach to the study of oocytes and embryos</em>. , 341-354 (1998).</li></ol>

動物実験は、アイオワIACUC委員会の大学が定めるガイドラインおよび規則に従って行った。

<p class="jove_content">転送が成功するには、受精し、卵母細胞の&gt; 50％（図3）の正常な切断になります。一般的に転送卵母細胞の間に30〜60パーセントは、神経胚の段階を過ぎても存続します。我々は通常、表現型を視覚化するだけでなく、分析のいくつかのタイプ（その場で、RT - PCR）のための十分な胚が得られる実験群あたり75から150卵母細胞を、転送する。実質的により多くの卵母細胞を注入すると、大幅に...

<p class="jove_title">ソリューションとレシピ： </p><p class="jove_step"> OCM（卵母細胞の培養液、ワイリー<em>ら</em>から変更、1996。） </p><table border="0"><tbody><tr><td> 70パーセントリーボビッツのL - 15培地（L -グルタミンを含む） </td><td> （インビトロジェン11415〜064） </td></tr><tr><td> 0.4 mg / mlのウシ血清アルブミン（BSA、フラクションV） </td><td> （シグマA - 9418〜50グラム） </td></tr><tr><td> 1Xペニシリン - ストレプトマイシン</td><td> （シグマP - 0781） </td></tr><tr><td colspan="2"> 5N NaOHでpHを7.6から7.8に調整する</td></tr><tr><td colspan="2"> 18℃で新鮮毎週、ストアを行う</td></tr></tbody></table><p class="jove_step"> 10X MMR（Marcの改変リンゲル液;。ズック<em>ら</em> 、1998） </p><table border="0"><tbody><tr><td> 1MのNaCl </td></tr><tr><td> 20mMのKClを</td></tr><tr><td> 20mMのCaCl <sub>2を</sub> </td></tr><tr><td> 10mMのMgCl <sub>2</sub> </td></tr><tr><td> 150mMのHEPES </td></tr><tr><td> pHが7.6から7.8に調整する</td></tr><tr><td> 4℃で</td></tr></tbody></table><p class="jove_step">麻酔液</p><table border="0"><tbody><tr><td>を1g / L 3 - アミノ安息香酸エチルエステル（MS222） </td><td> （シグマA - 5040） </td></tr><tr><td colspan="2"> 0.7グラム/ L重炭酸ナトリウム</td></tr><tr><td colspan="2"> Amquel処理水に溶かす</td></tr><tr><td colspan="2">毎週新鮮な確認</td></tr></tbody></table><p class="jove_step">プロゲステロンの株式</p><table border="0"><tbody><tr><td> 100％エタノール、10 mMのプロゲステロン（シグマP - 0130） </td></tr><tr><td> 500分の1株式/実用的なソリューションのための100％エタノールで1 mMに希釈する</td></tr><tr><td> -20℃で保存</td></tr></tbody></table><p class="jove_step">バイタル色素（ヒースマン<em>ら</em> 、1991から改変） </p><table border="0"><tbody><tr><td>青：0.1％ナイルブルー</td><td> （アルドリッチ121479 - 5G）、 </td></tr><tr><td>赤：0.25％ニュートラルレッド</td><td> （シグマN - 6634）、 </td></tr><tr><td>ブラウン：1％ビスマルクブラウン</td><td> （シグマB - 2759）、 </td></tr><tr><td colspan="2">グリーン（80μlの青+80μlの茶色）、 </td></tr><tr><td colspan="2">モーブ（80μlの青+80μlの赤）。 </td></tr><tr><td colspan="2">第六色、オレンジ色は（赤、80μlの+80μlの茶色）、また使用されるが、茶色と区別することは困難ですできます。 </td></tr></tbody></table><p class="jove_content">ブルー、レッドとブラウンの株式は、50 mLチューブに、脱イオン水で作ら振盪しながら20分間インキュベートし、臨床遠心機でスピンされています。上清をマイクロチューブに小分けして-20℃で保存されています</p>

fertilization of <em>xenopus oocytes</em> using the host transfer method

<p class="jove_content">初期の開発を脊椎動物に母性遺伝の分子の寄与を研究することは、しばしば時間と母性効果変異動物を生成するために必要な費用によって妨げられている。さらに、例えば、 <em>アフリカツメガエル</em>やゼブラフィッシュなどの生物の遺伝子機能を過剰発現または抑制する手法の多くは、十分にそのようなWntシグナル伝達などの重要な母体のシグナル伝達経路を標的に失敗する。 <em>アフリカツメガエル</em>では、培養卵母細胞での遺伝子機能を操作し、その後それらを肥やすことはある程度までこれらの問題を改善することができます。卵母細胞は、手動で、ドナーの卵巣の組織からdefolliculated必要に応じて注射したり、文化の中で処理し、成熟を誘導するためにプロゲステロンによって刺激されています。それらはホストの卵管を通じて転と変更し、受精に必要なゼリーのコートを取得される、すると次に、卵母細胞は、排卵ホスト女性のカエルの体腔内に導入されています。結果として得られる胚は、その後、目的のステージに上げ、あらゆる実験的摂動の影響について分析することができる。このホストベースの転送方式は、初期の開発の基本的なメカニズムを暴くのに非常に有効であったと他の脊椎動物のモデル生物では利用できない実験的な幅広い可能性を可能にしました。 </p>

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Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

<p class="jove_content">施肥のための手順<em&gt;アフリカツメガエル卵母細胞</em&gt;ホストの転送方法によって。</p>

の受精<em>アフリカツメガエル卵母細胞</em>ホストの転送方式を使用して

Studying the contribution of maternally inherited molecules to vertebrate early development is often hampered by the time and expense necessary to ...

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Research

JoVE Journal

Biology

Fertilization of <em>Xenopus oocytes</em> using the Host Transfer Method

14.4K ビュー.  University of Iowa. 施肥のための手順アフリカツメガエル卵母細胞ホストの転送方法によって。

の受精アフリカツメガエル卵母細胞ホストの転送方式を使用して