我々はバキュロウイルスのAcMNPVを提供するために、役立つ議論のためのデイビッドTheilmann（パシフィック農業食品研究センター、サマーランド、ブリティッシュコロンビア州）を感謝。 この作品は、健康研究（CIHR）、保健研究のためのマイケルスミス財団（MSFHR）、およびカナダ自然科学工学研究評議会（NSERC）のイノベーションカナダ財団（CFI）、カナダの協会からの補助金によって支えられて。

第1部：マイクロインジェクションのためのアフリカツメガエルの卵母細胞の調製<ol><li> 88 mMのNaCl、1mMのKClを、0.82 mMの：カルシウムを含まない修正バースの生理食塩水でコラゲナーゼ溶液（5 mg / mlのコラゲナーゼの20mlを含む50 mlのコニカルチューブにアフリカツメガエルの卵巣の小片（約2cm）を配置のMgSO 4、10mMのHepes緩衝液、pH7.5）。コラゲナーゼは、卵母細胞を囲む卵胞細胞を除去するために使用されます。 </li><li>シェーカーのプラットフォーム上にチューブを置き、一時間（100 RPMで）軽く揺らし。この時間は、コラゲナーゼの異なるロットによって異なります。こうして一時間後に、卵母細胞の小さなサンプルを取り、解剖顕微鏡下でそれらを調べる。適切にデfolliculated卵母細胞は、よく互いに分離されるべきであり、それは卵母細胞にガラス針を挿入する簡単なはずです。卵母細胞は、十分に脱folliculatedでない場合、それらはコラゲナーゼ溶液に残り、再び5分おきにチェックされます。 </li><li>修正されたバースの生理食塩水（MBS：88 mMのNaCl、1mMのKClを、0.82 mMのMgSO 4を用い 、0.33 mMのカルシウム（NO 3）2、0.41 mMのCaCl 2を 、10mMのHepes緩衝液、pH7.5）で卵母細胞を3回洗浄し、それらを転送するMBSプラス1％ペニシリン/ストレプトマイシンを含む100 mm径のシャーレに。卵母細胞は現在、微量注入する準備が整いました。マイクロインジェクションは、別の日に実行される場合、最大1週間までは4℃で卵母細胞を保存する。 </li><li>解剖顕微鏡を使って、マイクロインジェクションのための成熟期のVIの卵母細胞を選択する。これらの卵母細胞は、黒い動物半球とクリーミーな色の植物半球の間に良好なコントラストで、大規模です。 </li><li>マイクロウェルプレート（Nunc社製、10μlを加えボリューム）に成熟した段階のVIの卵母細胞を移す。これは、卵母細胞のundisrupted吸引を可能にするために最後にカットされているピペットの先端に200μlのピペッターを使用して、慎重に行う必要があります。 </li></ol>第2部： アフリカツメガエル卵母細胞のマイクロインジェクション<ol><li>マイクロインジェクションの可視化を支援するために、1％ブロモフェノールブルーを少量添加することにより微量注入するインポートの基板を準備します。例えば、我々は、基板を10μlにブロモフェノールブルーを1μl加える。 </li><li> 100 mm径のシャーレ上にパラフィルムの小さなストリップを配置し、パラフィルムストリップに注入する液の5μlのドロップを分注する。 </li><li>注入される溶液で以前に校正された注射針を（注入+マチックプラーと6.6μlのマイクロピペットドラモンドを引いて得られる）埋める。このため、インジェクターを吸引モードに設定されています。注射針を校正するには、針を50 NLのボリュームに対応するすべての0.5mmの、ドットマークを作る。 </li><li>細胞質注入の場合は、約45度の角度で、動物半球に非常に近い、植物半球の卵母細胞に針の先端を挿入する。顕微注入するために微量注入器の設定をオンにして、輸入材の50 NLで各卵母細胞を顕微注入する。針で、濁点が注入された基質の量を監視するために使用されています。 </li><li> NPCに関連付けられている輸入材の観察を可能にするように時間のポイントがそのように選択されているMBSで満たされた小さな（35mmの直径）ペトリ皿に注入した卵母細胞を移し、そして時間の所望の量（室温でインキュベートする、これが発生します。タンパク質のため、積極的にNPCに向かって輸送されるウイルスの10分から30分、この時間にも）注射の部位とタンパク質/ウィルスのサイズによって異なります。 </li><li>インキュベーションが完了すると、MBSで2％グルタルアルデヒドを含む4 mlのガラスバイアルに卵母細胞を移し、4℃で一晩固定し℃、 </li></ol>パート3： アフリカツメガエル卵母細胞の解剖<ol><li>次の日、MBSで卵母細胞を3回洗浄。 </li><li>低塩緩衝液（1 mMの塩化カリウム、0.5 mMのMgCl 2、10mMのHEPES、pH7.5のLSB）で満たされた小さなペトリ皿に卵母細胞を移す。解剖顕微鏡と解剖ピンセットを使用して、それぞれの卵母細胞から植物極を削除します。他のペアは、植物極を削除するには、はさみのように使用されている間は、ピンセットの一組で解剖されている卵母細胞を安定化するのに便利です。この時点では、細胞質ゾルで青みの存在によってマイクロインジェクションの成功を評価することが可能です。プロトコルは、成功微量注入した卵母細胞のために継続しています。サンプルはEMのために準備される場合に加えて、、この解剖のステップは、サンプルのトリミングとセクショニング時に核を見つけるのがかなり容易になります。 </li><li>室温で1時間のLSBの2％グルタルアルデヒドで再切除した卵母細胞を修正。 </li><li>固定後、LSBで解剖卵母細胞を3回洗浄する。 </li></ol>パート4：埋め込みとEMをシンセクショニングの注入した卵母細胞の調製<ol><li>うつ病のスライドに切除した卵母細胞を移す。 POSなどの液体をできるだけ多く吸引（彼らが乾燥しないように）すぐにその後ルヘ、および2％低融点アガロースで切除した卵母細胞をカバー。アガロースはまだ柔らかいですが、お互いから卵母細胞を分離するためにピペットチップを使用し、それぞれの卵母細胞が（ではない横）表向きにしているか停止していることを確認してください。 </li><li>アガロースは、約10分間固化することができます。アガロースが固化したら、それぞれ含むもの解剖卵母細胞、小さい部分にアガロースをカットするカミソリの刃を使用してください。 </li><li>室温で1時間、LSBの1％OSO 4でアガロース包埋の4ミリリットルガラスバイアルに卵母細胞、および後処理を修正して置きます。 </li><li>サンプルのLSBで3回洗浄する。必要に応じて、℃で一晩4℃でサンプルを保存し、翌日プロトコルを続ける。 </li><li>順次（20分毎に50、70、および90％エタノール）アルコールの昇順シリーズでサンプルを脱水する。これは、15分ごとに100％エタノールで2つの変化が続いている。最後に15分間、100％アセトンでサンプルを脱水する。 </li><li>少なくとも6時間、純粋なエポンで最終的に2時間エポンとアセトンの2:1混合物で浸潤が続く、一時間エポンの1:1混合物（フルカ）を有​​するサンプルとアセトンを浸透させる、と。 </li><li>新鮮な純粋なエポンで満たされた平らな埋め込み型の場所のサンプル。卵母細胞は、注射部位に近い核の側面のような方法で向いている - このケースで解剖された卵母細胞の側は、 - 最初の切片となる。このステップは、選択された基板の輸入を可視化するチャンスを最適化します。 </li><li>最後に、60℃で二日間エポンを重合℃に</li><li>サンプルを可視化するために、ブロックをトリミングしてから、ウルトラミクロトームを用いて区分されています。セクションは、EMグリッド上に移し、標準的な手順を用いて染色し、透過型電子顕微鏡で可視化されています。 それは標準的なEMの手続きであるとして、我々は、プロトコルのこの部分が表示されません 。 </li></ol>パート5：代表的な結果： プロトコルが成功している場合には、核膜（NE）とNPCはEM顕微鏡写真ではっきりと見えるはずです。注入材と注入と固定の間の時間の量に応じて、基板はNPCで、またはNPCの核顔で、NPCの細胞質面で見えるはずです。 図1は、4時間、4℃でインキュベートバキュロウイルスAcMNPVのキャプシドを注入されたアフリカツメガエル卵母細胞から隣接細胞質（C）と核（n）は、ある断面NE、および埋め込 ​​みと薄切片用に処理を示しています。 EMは、説明。矢じりは、NPCに指す。 NPCの細胞質面でのカプシドドッキングは、白い矢印で示されます。 対照的に、図2は、4時間室温でインキュベートしたマウスのパルボウイルスミニッツウイルス（MVM）、を注射されたアフリカツメガエル卵母細胞から隣接細胞質（C）と核（N）と断面NEを示し、埋め込みとEMは前述のように薄いセクションのために処理。このテクニックを使用して、我々は、MVMはNE（コーエンとPanté、2005年）の混乱を引き起こすことを発見した。括弧は、NEで休憩を示している。矢じりは、NPCに指す。 NEに関連付けられている推定上のMVMのキャプシドは、白い矢印で示されている。 <img src="/files/ftp_upload/1106/1106_fig1.png" alt="図1" width="600" height="459" /> 図1：4時間Cは4℃でインキュベートし、バキュロウイルスAC MNPVのキャプシドを注射し、用に処理されたアフリカツメガエル卵母細胞から北東に隣接する細胞質とのクロスセクション（c）と核（N）の電子顕微鏡写真埋め込みとEMは前述のように薄いセクション。矢じりは、NPCに指す。キャプシドは、白い矢印で示されている。スケールバー：100nmである。 <img src="/files/ftp_upload/1106/figure2.png" alt="図2" width="600" height="264" /> 図2：4時間室温でインキュベートしたマウスのパルボウイルスミニッツウイルス（MVM）、を注射されたアフリカツメガエル卵母細胞から隣接細胞質（C）と核（N）とNEの断面の電子顕微鏡写真、および埋め込みとEMは前述のように薄いセクションのために処理。矢じりは、NPCに指す。括弧は、NEで休憩を示している。 NEに関連付けられている推定上のMVMのキャプシドは、白い矢印で示されている。スケールバー：100nmである。

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	<li>Pant&#233;, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+intact+Xenopus+oocytes+in+nucleocytoplasmic+transport+studies.">Use of intact Xenopus oocytes in nucleocytoplasmic transport studies.</a> Methods Mol. Biol. 322, 301-314 (2006).</li><li>Pant&#233;, N., Kann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+pore+complex+is+able+to+transport+macromolecules+with+diameters+of+about+39+nm.">Nuclear pore complex is able to transport macromolecules with diameters of about 39 nm.</a> Mol. Biol. Cell. 13 (2), 425-434 (2002).</li><li>Rabe, B., Vlachou, A., Pant&#233;, N., Helenius, N., Kann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+import+of+hepatitis+B+virus+capsids+and+release+of+the+viral+genome.">Nuclear import of hepatitis B virus capsids and release of the viral genome.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100 (17), 9849-9854 (2003).</li><li>Cohen, S., Pant&#233;, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pushing+the+Envelope:+Microinjection+of+MVM+into+Xenopus+oocytes+causes+damage+to+the+nuclear+envelope.">Pushing the Envelope: Microinjection of MVM into Xenopus oocytes causes damage to the nuclear envelope.</a> J. Gen. Virol. 86 (12), 3243-3252 (2005).</li><li>Pant&#233;, N., Jarmolowski, A., Izaurralde, E., Sauder, U., Baschong, W., Mattaj, I. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+nuclear+export+of+different+classes+of+RNA+by+electron+microscopy.">Visualizing nuclear export of different classes of RNA by electron microscopy.</a> RNA. 3, 498-513 (1997).</li></ol>

薄切片EMと組み合わせ、アフリカツメガエル卵母細胞のマイクロインジェクションは、核-細胞質間輸送を研究するための非常に効果的なツールです。このシステムは、細胞質フィラメントおよび核バスケット（Panté、2006年までにレビューさ）のようなNPCの構造部品と核移入基板の例の作用については、NPCを通じて輸入の明確なステップをマッピングするために使用されています。また...

microinjection of xenopus laevis oocytes

薄切片電子顕微鏡（EM）に続いてアフリカツメガエルの卵母細胞のマイクロインジェクションは、核-細胞質間輸送を研究するための優れたシステムです。大きいため、大核と核膜孔複合体（NPCの）の高密度で、核輸送は、 アフリカツメガエル卵母細胞で容易に可視化することができます。核のインポートとエクスポートのメカニズムに多くの洞察は、このシステムの使用（Pantéによってレビュー、2006）によって得られている。さらに、我々は、ホストの核内で複製するいくつかのウイルスの核移入経路を分析するためにアフリカツメガエルの卵母細胞のマイクロインジェクションを使用している。 ここでは、核移入基板とアフリカツメガエルの卵母細胞の細胞質マイクロインジェクションを示しています。我々はまた、解剖、脱水、およびエポキシ包埋樹脂に卵母細胞の埋め込みを含めて、EMを薄切片による可視化のために注入した卵母細胞の準備を示しています。最後に、我々はバキュロウイルスオートグラファカリフォルニの核多角体ウイルス （AcMNPV）またはマウス（MVM）のパルボウイルスの分のウイルスのキャプシドにマイクロインジェクションされた卵母細胞の代表的な結果を提供し、技術の潜在的なアプリケーションについて説明します。

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Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

ここでは、の細胞質マイクロインジェクションを示しています<em&gt;アフリカツメガエル</em核移入基板だけでなく、薄切片の電子顕微鏡による可視化のための注入した卵母細胞の準備と&gt;卵母細胞。

アフリカツメガエル卵母細胞のマイクロインジェクション

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

Research

JoVE Journal

Biology

22.8K ビュー.  University of British Columbia - UBC. ここでは、の細胞質マイクロインジェクションを示していますアフリカツメガエル卵母細胞。

ビデオ: Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Plastic Embedding and Sectioning of Xenopus laevis Embryos

Plastic sections maintain true tissue morphology in thin sections of tissue that can be immunostained with fluorescent secondary antibodies, making this method more useful than paraffin-embedded or frozen sections for many types of tissue. The method for staining, plastic embedding, and sectioning is demonstrated in this video.

プラスチック製の埋め込みとアフリカツメガエル胚のセクショニング

生物学

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, collect and dejelly the eggs, and sort the eggs to remove any damaged eggs.

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, collect and dejelly the eggs, and sort the eggs to remove any damaged eggs.

アフリカツメガエル女性から卵子を入手

The eggs of Xenopus laevis intact, lysed, and/or fractionated are useful for a wide variety of experiments. This protocol shows how to induce egg laying, ...

Preparation and Fractionation of Xenopus laevis Egg Extracts

Crude and fractionated Xenopus egg extracts can be used to provide ingredients for reconstituting cellular processes for morphological and biochemical analysis. Egg lysis and differential centrifugation are used to prepare the crude extract which in turn in used to prepare fractionated extracts and light membrane preparations.

Crude and fractionated Xenopus egg extracts can be used to provide ingredients for reconstituting cellular processes for morphological and biochemical analysis. Egg lysis and differential centrifugation are used to prepare the crude extract which in turn in used to prepare fractionated extracts and light membrane preparations.

アフリカツメガエル卵抽出物の調製と分画

Crude and fractionated Xenopus egg extracts can be used to provide ingredients for reconstituting cellular processes for morphological and biochemical ...

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological measurement of single or multiple ion channels in cells. This technique can be applied to ion channels in both their native environment and expressed in heterologous cells, such as oocytes harvested from the African clawed frog, Xenopus laevis. Here, we describe the well-established technique of patch clamp recording from Xenopus oocytes. This technique is used to measure the properties of expressed ion channels either in populations (macropatch) or individually (single-channel recording). We focus on techniques to maximize the quality of oocyte preparation and seal generation. With all factors optimized, this technique gives a probability of successful seal generation over 90 percent. The process may be optimized differently by every researcher based on the factors he or she finds most important, and we present the approach that have lead to the greatest success in our hands.

This is intended as an introduction to patch clamp recording from Xenopus laevis oocytes. It covers vitelline membrane removal, formation of a gigaohm seal (gigaseal), and the optional conversion of the patch to the outside-out topology.

アフリカツメガエルの卵母細胞で発現イオンチャネルのパッチクランプ記録

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

RNA localization is a conserved mechanism of establishing cell polarity. Vg1 mRNA localizes to the vegetal pole of Xenopus laevis oocytes and acts to spatially restrict gene expression of Vg1 protein. Tight control of Vg1 distribution in this manner is required for proper germ layer specification in the developing embryo. RNA sequence elements in the 3' UTR of the mRNA, the Vg1 localization element (VLE) are required and sufficient to direct transport. To study the recognition and transport of Vg1 mRNA in vivo, we have developed an imaging technique that allows extensive analysis of trans-factor directed transport mechanisms via a simple visual readout. 
To visualize RNA localization, we synthesize fluorescently labeled VLE RNA and microinject this transcript into individual oocytes. After oocyte culture to allow transport of the injected RNA, oocytes are fixed and dehydrated prior to imaging by confocal microscopy. Visualization of mRNA localization patterns provides a readout for monitoring the complete pathway of RNA transport and for identifying roles in directing RNA transport for cis-acting elements within the transcript and trans-acting factors that bind to the VLE (Lewis et al., 2008, Messitt et al., 2008). We have extended this technique through co-localization with additional RNAs and proteins (Gagnon and Mowry, 2009, Messitt et al., 2008), and in combination with disruption of motor proteins and the cytoskeleton (Messitt et al., 2008) to probe mechanisms underlying mRNA localization.

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Visualization of in vivo RNA transport is accomplished by microinjection of fluorescently labeled RNA transcripts into Xenopus oocytes, followed by confocal microscopy.

可視化RNAの局在にアフリカツメガエル卵母細胞

RNA localization is a conserved mechanism of establishing cell polarity.  Vg1 mRNA localizes to the vegetal pole of Xenopus laevis oocytes and acts to ...

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Studying the contribution of maternally inherited molecules to vertebrate early development is often hampered by the time and expense necessary to generate maternal-effect mutant animals. Additionally, many of the techniques to overexpress or inhibit gene function in organisms such as Xenopus and zebrafish fail to sufficiently target critical maternal signaling pathways, such as Wnt signaling. In Xenopus, manipulating gene function in cultured oocytes and subsequently fertilizing them can ameliorate these problems to some extent. Oocytes are manually defolliculated from donor ovary tissue, injected or treated in culture as desired, and then stimulated with progesterone to induce maturation. Next, the oocytes are introduced into the body cavity of an ovulating host female frog, whereupon they will be translocated through the host's oviduct and acquire modifications and jelly coats necessary for fertilization. The resulting embryos can then be raised to the desired stage and analyzed for the effects of any experimental perturbations. This host-transfer method has been highly effective in uncovering basic mechanisms of early development and allows a wide range of experimental possibilities not available in any other vertebrate model organism.

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Procedure for fertilizing Xenopus oocytes by the host transfer method.

の受精アフリカツメガエル卵母細胞ホストの転送方式を使用して

Studying the contribution of maternally inherited molecules to vertebrate early development is often hampered by the time and expense necessary to ...

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant (ACT) Assay in Xenopus laevis

Many proteins play a dual role in embryonic development. Those that regulate cell fate determination in a specific tissue can also affect the development of a larger region of the embryo. This makes defining its role in a particular tissue difficult to analyze. For example, noggin overexpression in Xenopus laevis embryos causes the expansion of the entire anterior region, including the eye1,2. From this result, it is not known if Noggin plays a direct role in eye determination or that by causing an expansion of neural tissue, Noggin indirectly affects eye formation. Having this complex phenotype makes studying its eye-specific role in cell fate determination difficult to analyze. We have developed an assay that overcomes this problem. Taking advantage of the pluripotent nature of the Xenopus laevis animal cap 3, we have developed an assay to test the ability of gene product(s), like noggin or the eye field transcription factors (EFTFs), to transform caps into particular tissue or cell types by transplanting this tissue onto the side of the embryo 4. While we have found either Noggin protein treatment or a collection of transcription factors can determine retinal cell fate in animal caps, this procedure could be used to identify gene product(s) involved in specifying other tissues as well.

Tissue Determination Using the Animal Cap Transplant ACT Assay in Xenopus laevis

Animal caps overexpressing gene product(s) are transplanted to the flank of developing Xenopus laevis embryos in order to establish whether tissue is determined.

でアニマルキャップの移植（ACT）アッセイを用いて組織の決定アフリカツメガエル</em

Many proteins play a dual role in embryonic development. Those that regulate cell fate determination in a specific tissue can also affect the development ...

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes in cell surface area and cell height, and where cells undergo mitosis and migrate. Furthermore, epithelial cells can also regulate morphogenetic movements in adjacent tissues1. A traditional method to study epithelial cells and tissues involve chemical fixation and histological methods to determine cell morphology or localization of particular proteins of interest. These approaches continue to be useful and provide "snapshots" of cell shapes and tissue architecture, however, much remains to be understood about how cells acquire specific shapes, how various proteins move or localize to specific positions, and what paths cells follow toward their final differentiated fate. High resolution live imaging complements traditional methods and also allows more direct investigation into the dynamic cellular processes involved in the formation, maintenance, and morphogenesis of multicellular epithelial sheets. Here we demonstrate experimental methods from the isolation of animal cap tissues from Xenopus laevis embryos to confocal imaging of epithelial cells and simple measurement approaches that together can augment molecular and cellular studies of epithelial morphogenesis.

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Xenopus embryonic epithelia are an ideal model system to study cell behaviors such as polarity development and shape change during epithelial morphogenesis. Traditional histology of fixed samples is increasingly being complemented by live-cell confocal imaging. Here we demonstrate methods to isolate frog tissues and visualize live epithelial cells and their cytoskeleton using live-cell confocal microscopy.

生細胞イメージングとの胚上皮細胞の定量分析アフリカツメガエル</em

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. To identify where signaling pathways and tissues act during patterning of the developing face, a 'face transplant' technique has been developed in embryos of the frog Xenopus laevis. A region of presumptive facial tissue (the "Extreme Anterior Domain" (EAD)) is removed from a donor embryo at tailbud stage, and transplanted to a host embryo of the same stage, from which the equivalent region has been removed. This can be used to generate a chimeric face where the host or donor tissue has a loss or gain of function in a gene, and/or includes a lineage label. After healing, the outcome of development is monitored, and indicates roles of the signaling pathway within the donor or surrounding host tissues. Xenopus is a valuable model for face development, as the facial region is large and readily accessible for micromanipulation. Many embryos can be assayed, over a short time period since development occurs rapidly. Findings in the frog are relevant to human development, since craniofacial processes appear conserved between Xenopus and mammals.

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

A technique for transplanting "Extreme Anterior Domain" facial tissue between Xenopus laevis embryos has been developed. Tissue can be moved from one gene expression background into another, allowing the study of local requirements for craniofacial development and for signaling interactions between facial regions.

顔面移植<em&gt;アフリカツメガエル</em&gt;胚

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. ...

Using plusTipTracker Software to Measure Microtubule Dynamics in Xenopus laevis Growth Cones

Microtubule (MT) plus-end-tracking proteins (+TIPs) localize to the growing plus-ends of MTs and regulate MT dynamics1,2. One of the most well-known and widely-utilized +TIPs for analyzing MT dynamics is the End-Binding protein, EB1, which binds all growing MT plus-ends, and thus, is a marker for MT polymerization1. Many studies of EB1 behavior within growth cones have used time-consuming and biased computer-assisted, hand-tracking methods to analyze individual MTs1-3. Our approach is to quantify global parameters of MT dynamics using the software package, plusTipTracker4, following the acquisition of high-resolution, live images of tagged EB1 in cultured embryonic growth cones5. This software is a MATLAB-based, open-source, user-friendly package that combines automated detection, tracking, visualization, and analysis for movies of fluorescently-labeled +TIPs. Here, we present the protocol for using plusTipTracker for the analysis of fluorescently-labeled +TIP comets in cultured Xenopus laevis growth cones. However, this software can also be used to characterize MT dynamics in various cell types6-8.

Using plusTipTracker Software to Measure Microtubule Dynamics in Xenopus laevis Growth Cones

The MATLAB-based, open source software package, plusTipTracker, can be used to analyze image series of fluorescently-labeled +TIPs to quantify microtubule dynamics.

で微小管ダイナミクスを測定するためにplusTipTrackerソフトウェアを使用した<em&gt;アフリカツメガエル</em&gt;成長円錐

Microtubule (MT) plus-end-tracking proteins (+TIPs) localize to the growing plus-ends of MTs and regulate MT dynamics1,2. One of the most well-known and ...