3D多文化のための全層皮膚当量物の調製

まず、水、10倍濃縮PBS、および1モルの水酸化ナトリウムをチューブに混合します。次に、適切に密度の高い真皮細胞溶液500マイクロリットルを2ミリリットルのチューブにピペットで移します。溶液を300gで室温で3分間遠心分離します。

遠心分離が完了したら、上清をピペットで取り出し、水、PBS、水酸化ナトリウムの混合物に細胞を穏やかに再懸濁します。次に、200マイクロリットルのコラーゲン溶液を混合物に加えます。サスペンションをピペットで動かしてよく混ぜます。

次に、調製した混合物の500マイクロリットルを24ウェルプレートのインサートにピペットで移します。角質層のないモデルの場合は、インサートのないウェルに500マイクロリットルの混合物をピペットで移します。プレートを室温で10分間インキュベートした後、インキュベーターに30分間移します。

ピペットで500マイクロリットルのPBSを各ウェルに緩衝し、ヒドロゲル表面をすすぎます。次に、200マイクロリットルのケラチノサイト懸濁液を、補充したDMEM培地に等量のメラノサイト懸濁液と混合します。全細胞懸濁液の500マイクロリットルを各ウェルに静かにピペットで移します。

プレートを摂氏37度で2〜5日間インキュベートします。培地は48時間ごとに交換し、光学顕微鏡を使用して細胞増殖をモニターします。真皮と表皮を区別できる同等の3Dモデルが作成され、リアルタイムで監視できるようになりました。

細胞増殖の異なる段階のケラチノサイトが観察されましたが、これは生体同等物の指標です。認識可能な顆粒を有する肥満細胞も見られた。