SW1222 超短自己組織化ペプチドマトリックスにおける細胞株由来結腸直腸癌オルガノイド作製

まず、10マイクロリットルの2Xペプチド溶液の液滴を24ウェルプレートのウェルの中心にピペットで移します。インキュベーション後、10マイクロリットルの2X PBSを各ウェルにピペットで入れます。ピペットの先端を使用して溶液を穏やかに混合し、ゲル液滴を少なくとも20分間安定させ、液滴が無傷であることを確認します。

次に、2.5ミリリットルの0.0125%トリプシンEDTAを200万個のSW1222ヒト結腸直腸腺癌細胞を含むフラスコにピペットで移します。細胞をトリプシンと摂氏37度で5〜10分間インキュベートし、フラスコから分離します。トリプシンを不活性化するために、5ミリリットルの完全な培地を追加します。

次に、30μmのセルストレーナーを使用して細胞懸濁液をろ過します。10マイクロリットルのマイクロピペットを使用して、各ペプチド液滴に2マイクロリットルの細胞懸濁液を注入します。SW1222細胞株の800個の細胞を各ウェルに4日間播種します。

液滴を5%二酸化炭素の下で摂氏37度で30分間インキュベートします。次に、0.5ミリリットルの補充培地を各ウェルに加えます。コントロールを調製するには、基底膜マトリックスコントロールのストックを補充した培地で希釈します。

細胞懸濁液を希釈したメンブレン基底溶液にロードします。希釈した基底膜マトリックス20マイクロリットルを細胞の各ウェルにピペットで入れます。細胞を摂氏37度で20分間インキュベートします。

液滴が固まったら、0.5ミリリットルの完全培地を追加します。1日目、4日目、7日目に明視野顕微鏡を使用して細胞を画像化し、オルガノイドの成長を評価します。細胞の1週間の明視野イメージングは、小さな細胞クラスターがオルガノイドに集合していることを示しました。

ペプチドハイドロゲルで培養したSW1222由来オルガノイドは、丸い形態で、明るい外観をしていました。より暗い外観は、7日目のペプチドPのコロニーに見られるように、望ましくない高密度を示していました。