ペプチドハイドロゲル中の大腸がん由来オルガノイドの免疫染色

まず、20マイクロリットルのペプチドハイドロゲル液滴を24ウェルプレートにピペットで移します。SW1222細胞株の800個の細胞を各ウェルに4日間播種します。4日目に、培地をピペットで取り出します。

PBSで各ウェルを2回洗います。次に、400マイクロリットルの4%ホルムアルデヒド溶液をウェルに加えます。インキュベーションが完了したら、P1000ピペットチップを使用してホルムアルデヒド溶液を吸引します。

次に、PBSでウェルをもう一度洗います。細胞を1ミリリットルの透過化緩衝液に室温で30分間インキュベートします。バッファーをピペで取り出し、PBSでウェルを洗浄した後、0.5ミリリットルのブロッキングバッファーを追加します。

次に、ブロッキングバッファーを取り除いた後、ウェルをPBSで洗浄します。次に、希釈した一次抗体200マイクロリットルをウェルにピペットで入れます。プレートを摂氏4度で一晩インキュベートします。

P200ピペットチップを使用して、溶液を取り出します。次に、PBS溶液でウェルを洗浄します。次に、希釈した二次抗体のバイアルにファロイジンコンジュゲートを1対40の比率で添加します。

この混合物をプレートのウェルにピペットで移します。その後、プレートを室温で暗所で3時間インキュベートします。溶液を吸引し、PBSでウェルを洗浄した後、300マイクロリットルのDAPI溶液を各ウェルにピペットで注入します。

インキュベーション後、溶液をピペッティングした後、ウェルをPBSで再度洗浄します。プレートを摂氏4度で最大7日間保管します。免疫染色により、非生物機能ペプチドP、生物官能性ペプチドP1、およびマトリゲルに見られるオルガノイドは、頂端膜および基底外側膜に局在していることが示されました。

非生体機能ペプチドPは、基底外側膜における細胞間結合発現を誘導した。