Name: handling of the cotton rat in studies for the pre-clinical evaluation of oncolytic viruses
Uploaded: 2014-11-24T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 13 s
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Breanne Cuddington holds a fellowship from the Canadian Breast Cancer Foundation. This work was sponsored by operating grants from the Cancer Research Society and the Canadian Cancer Society Research Institute (formerly the Canadian Breast Cancer Research Alliance). We thank Ann Tollefson (Saint Louis University School of Medicine) for LCRT cells and Dr. Kathleen Delaney and Marion Corrick for technical assistance with cotton rat housing and sedation.

注：使用されるプロトコルは、動物ケアのガイドラインにカナダの評議会によるとマクマスター大学で私たちの施設内動物研究倫理委員会によって承認されている。実験は、マクマスター大学、中央動物施設で実施した。 1.培養LCRT細胞<ol><li>ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）中で培養LCRT細胞を、10％ウシ胎児血清（FBS）、2 mM L-グルタミン、100 U / mlペニシリンおよび100μg/ mlストレプトマイシンを補充した。 37℃でT-150組織培養フラスコ中で細胞を維持し、5％CO 2。継代細胞は90％コンフルエントな単層（2〜3日毎に、 図1）を形成する。 </li><li>前加温1×リン酸緩衝生理食塩水（PBS）、細胞を分割する前に10分間37℃の水浴中で1×トリプシンおよび培地。 </li><li>吸引除去フラスコから培地および1×5mlのPBSで細胞をすすいでください。 </li><li>すすいだ後、PBSを吸引し、インキュベート1Xトリプシンの2ミリリットルをもつ細胞の細胞がフラスコ（〜2分）から解離するまで。 </li><li>穏やかに（10ミリリットルの細胞懸濁液の合計）8ミリリットル培地中の細胞を再懸濁し、細胞の塊を破壊するために上下にピペット。 </li><li>左右に優しく側から、ロックフラスコ（T-150あたり25ミリリットルの合計）24ミリリットル培地に1ミリリットルの細胞懸濁液を播種することにより、T-150フラスコ中の細胞を維持する。次の分割まで37℃で、5％CO 2で細胞を維持する。 </li></ol> 2. LCRT細胞におけるウイルス複製と細胞毒性を評価する<ol><li>ウイルス複製 注：そのような内因性のウイルスプロモーターの制御下で緑色蛍光タンパク質（GFP）などの蛍光タグを発現するウイルス構築物は、ウイルス感染の可視化を容易にし、蛍光プレートリーダーを用いて広げた。 <ol><li>計数のために井戸を残して培養プレートにシードLCRT細胞。彼らは1日後に80〜90％コンフルエントになるようシード細胞。 10 5セル画の濃度を使用してくださいのls / mlの（ウェル当たり100μl）を96ウェル平底プレート中で一日後、所望の密集度を生成する。 </li><li>翌日、前加温1×PBS、1×トリプシン、事前実験を開始する10分間37℃の水浴中で完全な無血清培地。 </li><li>よく数え、ウェルの表面の上に揺動することによって1×PBS 5mlで細胞をリンスから培地を吸引。 </li><li>すすいだ後、吸引PBS、細胞がフラスコ（〜2分）から解離するまでの1xトリプシンの2ミリリットルで細胞を培養する。 </li><li>血球計数器を用いてカウント可能範囲内に細胞密度を得るために完全培地の適切な体積で細胞を再懸濁する。正確な細胞数を確保するために、前に十分ピペッティングにより血球計数器を接種する細胞懸濁液を混ぜる。 </li><li>感染の所望の多重度（MOI）で感染に必要ウイルスストックの量を決定します。 形成単位必要なコールパック（PFU）=播種した細胞の数* MOI（PFU /細胞） ウイルスストックのボリュームに必要=必要なPFU /ウイルスストックの力価（PFU / ml）を</li><li>チューブ内の無血清培地中でウイルス接種を準備します。細胞に接種材料を追加する前に、ボルテックスまたはピペッティングで完全に混合します。 </li><li> DMEM + 1％FBSのメンテナンスオーバーレイを適用した後、37℃で1時間、細胞に感染する。 </li><li>スキャンプレート1および2日後に感染（π）は、GFP蛍光を可視化した。 </li></ol></li><li>ウイルス細胞毒性 注：化合物が感光性であるように、低光条件下でレサズリン細胞毒性アッセイを実行します。ウェルを含有する培地は、バックグラウンド蛍光を補正するために含まれるべきである。 <ol><li> 1×PBS中レサズリンの5％（v / v）の溶液を調製する。ピペッティングにより溶液を混ぜる。 </li><li>吸引細胞からの培地、5％のレサズリン溶液を適用する。唯一のバックグラウンド蛍光を補正するためによく含む媒体を含む。 </li><li> 37℃で30分間細胞をインキュベート °C、後その蛍光プレートリーダー（励起530nmで、放射595 nm）を用いて蛍光をお読みください。 </li><li>バックグラウンド蛍光を補正する非感染対照と比較したデータを分析します。 </li></ol></li></ol> 3.住宅および取扱い<ol><li>住宅·ダイエット<ol><li>ハウスコットンラットを個別に-戦っげっ歯類寝具（1/8 &quot;トウモロコシの穂軸寝具）、もはや濃縮などの8インチとnestletsよりPVCチューブ（ 図2）のセクションを含むポリカーボネートラットケージに減少します。 </li><li>頭上ケージの座ると齧歯類食品や水のボトルを含むように固定可能なスチールバスケットを使用してください。 注：このケージのセットアップが最も重要のケージ幸福の終わりに対して濃縮管の配置を、動物の安全かつ容易なキャプチャが可能になります。 </li></ol></li><li>取り扱い<ol><li>前エキサイティングそれらを避けるために前に動物施設の技術者によるラウンドに、午前中にコットンラットを扱う手順。 </li><li>すべての手順の間、保護のための厚手の革手袋を着用してください。 </li><li>動物は主に濃縮管に残っているように、定期的な洗浄中に新しいケージにラットを転送するためにそれらを使用しています。代替的に、ハンドラがそれらの手に到達することを可能にするためにわずかにケージを開いて、動物は、ちょうど肩の上の皮膚をscruffingと押し下げて抑制することができる。動物として無理な力を加えないように練習ケアは彼らの舌をかむことがあります。 </li><li>我慢してと動物が強い飛行または戦いの応答があり、実行していると、ケージの外にジャンプして捕獲を避けるためにしようとするように着実に手を使用しています。 deglovingが発生するように重要なのは、テールにより動物を扱うことができません。 </li><li>トラップ直接取り扱い上の彼らの濃縮度管の動物。これは大幅に傷害を減少させ、脱出。 </li></ol></li></ol> 4.キャプチャと麻酔<ol><li>キャプチャー<ol><li>プロテクト用の厚手の革手袋を着用してくださいすべての手順の間にイオン。 </li><li>空気と蓋、容器及びガス出力ホース（ 図3）に取り付けられたノーズコーンに合わせて十分な大きさの麻酔導入室用の穴を持つ大規模な明確なプラスチック容器を使用してください。 </li><li>手順がより効率的にするとイソフルラン、吸入麻酔薬に動物の露光時間を減少させるためにペアで動作。 1研究者は、開口部を担当していることを確認し、ケージと誘導室（ハンドラ＃1）の蓋とその準にスチールカバーを交換すると誘導室にチューブ内の動物の捕獲や輸送を担当する（ハンドラ＃ 2）。 </li><li>平らな面にケージを置き、外蓋を取り外します。少しスチール給紙トレイを持ち上げて、ゆっくりとそれがケージの側面と、背面に対して平行になるように濃縮チューブを操縦。必要に応じて、動物を攪拌避けるためにケージを開かずに濃縮管を操縦するためにオブジェクトを使用（ハンドルR＃1）。 </li><li>動物が攪拌され、チューブを残しなった場合、動物はリラックスして再びチューブ（ハンドラ＃1）に定住するための十分な時間を確保。 </li><li>ゆっくりと意図的にケージに接触してもう一方の端を維持し、濃縮管から鋼カバー遠いの端を持ち上げます。プラスチック容器（ハンドラ＃2）のために十分な大きさのスペースを作る。 </li><li> 1なめらかな、クイックモーションでは、濃縮管の頭上プラスチック容器を押してください。チューブ内の動物を捕獲する、ケージの側面を有する容器の接触を維持する。可能な限り迅速に（ハンドラ＃2）のステップ4.1.6と4.1.7を実行します。 </li><li>鋼の給紙トレイを取り外し、＃2（ハンドラ＃1）ハンドラにプラスチック容器の蓋を与える。プロセスの中に閉じ込め、動物の付属に留意され、ケージの側面と容器との間プラスチックのふたをスライドさせます。これは（ハンドラ＃2）次のステップをより困難になりますように、容器を密封しないでください。 </li></ol></li><li> AnesthesIA <ol><li>容器は閉じたままと誘導室に動物を輸送することを確認してください。すばやく室で動物を配置し、一つの流体運動（ハンドラ＃2）に容器蓋を取り外します。開いて、すぐに誘導室蓋を交換する（ハンドラ＃1）。 </li><li>誘導室（5 L /分）にイソフルランの流れをオンにして、無気力の兆候動物を監視し、ガス循環を促進するために誘導室から両方取り外し、チューブおよびコンテナから動物をスライドさせてすぐに、その時点で。 </li><li>ラットが完全に麻酔されると、作業面に移動し、ノーズコーン（ 図3）内に、鼻と口を配置する。それは強力なつま先のピンチに反応しないときラットは完全に麻酔をかけている。 </li><li>乾燥や擦り傷を防ぐために、動物の目に獣医のワセリン眼軟膏を置きます。コットンラットは、傷害が発生した場合、感染しやすいことができ、大きな目を持っているので、これは必須のステップです。 </li> &lt;李は&gt;注意深く監視し、一定の呼吸速度を維持し、動物の鼻が手順を通してフィッティングノーズコーンに残ることを確認してください。適切にイソフルランの流量を調整します。各動物を麻酔するために必要なイソフルランの量が変化します。 </li><li>後手順は、そのケージに動物を返し、それは完全なモビリティと胸骨横臥を取り戻すことを確認してください。 </li></ol></li></ol>皮下腫瘍形成のためのLCRT細胞の5準備 NOTE：LCRT（90％コンフルエント）のOne T-150フラスコを約2×10 7個の細胞が得られる。基本必要な細胞の総数に必要なT-150フラスコの数。必要な細胞の総数を取得し、準備し、余分な注入のために必要なものの間に失われた細胞を収容するように保証するために余分なフラスコに播種する。細胞生存率を延長することが可能な限り氷上で細胞を保管してください。 <ol><li>収穫細胞、フラスコANから吸引媒体へ1×5mlのPBSで細胞をリンスdは。 </li><li>吸引しPBSおよび細胞がフラスコ（〜2分）から解離するまでの1xトリプシンの2ミリリットルで細胞を培養する。 </li><li>穏やかに（10ミリリットルの細胞懸濁液の合計）8ミリリットル培地中の細胞を再懸濁し、細胞の塊を破壊するために上下にピペット。追加のフラスコから細胞を回収し続ける。 </li><li> 1円錐管、50ミリリットルコニカルチューブあたり約4 T-150Sにすべての細胞懸濁液をプール。 </li><li>遠心機で4℃で10分間160×gでチューブ。 </li><li>培地を吸引し、血球計数器を用いてカウント可能な範囲内に細胞密度を得た（T-150当たり10 mlのPBS）、PBS適切な容量の細胞ペレットを再懸濁する。正確な細胞数を確保するために、前に十分ピペッティングにより血球計数器をロードする細胞懸濁液を混ぜる。 </li><li>細胞の総数を計算します。 =細胞数（細胞/ ml）を回収した細胞の総数は、再懸濁の体積（ミリリットル）× </li><li>決定するすべての注射に必要な細胞懸濁液の量。実験あたり2-3余分な用量を確認します。皮下注射し、5×10 5 LCRT細胞の合計は3〜4日以内に触知可能な腫瘍を形成することになる。 必要な細胞の総数= 5×10 5細胞xの用量の総数 必要な体積の細胞懸濁液（ミリリットル）=（注入量の*和に必要な総細胞）/（回収した細胞の総数） </li><li>ピペットは、PBSを含むコニカルチューブに細胞懸濁液の量を必要とし、完全に混合する。エッペンドルフチュー​​ブに小分けし、個々の注射（100μL）。注入手順の間、氷上にチューブを維持します。 </li></ol> 6.注射注：1はしばらく他のモニター動物の呼吸速度と全身状態ながら、麻酔下で注射を行うために、2人の研究者との手順を実行します。すべての注射との新たな針のためのインスリン注射器（29 G X 1/2」、0.3ミリリットル）を使用各動物。 <ol><li>皮下注射<ol><li>動物（セクション4）を取得し、麻酔。 </li><li>バリカンを使用した注射部位を剃る。コットンラットの毛皮は厚く、注射のために滑らかな表面を得るために、鋭いトリマーが必要です。綿棒を用いて70％エタノールで注射部位を清掃し、それが先に進む前に、完全に蒸発させる。 </li><li>ゆっくりと着実に描画することによって細胞を用いた負荷シリンジ（29 G xの1/2」、0.3ミリリットル）。気泡はいくつかの力で注射器明らかフリックしている場合。気泡が上部に表示されたら、液体が針の一番上になるまで、プランジャーを押してください。 </li><li> （皮膚テンティングと呼ばれる）、注射部位の皮膚を持ち上げて、針のベベル面を上にして挿入します。針が筋肉内注射を避けるために皮膚の下に自由に動くことを確認してください。 </li><li>均等にゆっくりと注射器の内容物を排出する。針ベベル側を下に撤回。 </li></ol></li><li>腫瘍内注射<ol><li>キャプチャ動物（セクション4）を麻酔dは。 </li><li>綿棒を用いて70％エタノールで注射部位を清掃し、それが先に進む前に、完全に蒸発させる。 </li><li>直立位置に針を保持しながら、ゆっくりと着実に描画することでウイルス接種による負荷シリンジ（29 Gは0.3ミリリットル、「1/2 X）。気泡はいくつかの力で注射器明らかフリックしている場合。液体は針の一番上になるまで、気泡は、プランジャーから、上部プッシュでたら。 </li><li>腫瘍に針のベベル側を挿入し、部分的に腫瘍の裂傷を防止するために、各移動前の針を引き抜く、ファン状に針を移動させながら均一にゆっくりと注射器の内容物を放出する。針ベベル側を下に撤回。 注：皮下LCRTの腫瘍は5-7日間で約100ミリメートル3に到達する、急速に成長している。さらに、壊死性および出血性センターは、多くの場合、数日以内に腫瘍の表面に形成し、CAが必要ですreful監視します（ 図4）。 </li></ol></li><li>腹腔内注射<ol><li>動物（セクション4）を取得し、麻酔。 </li><li>綿棒を用いて70％エタノールで注射部位を清掃し、それが先に進む前に、完全に蒸発させる。 </li><li>ゆっくりと着実に策定による薬物と負荷シリンジ（29 Gは0.3ミリリットル、「1/2 X）。気泡はいくつかの力で注射器明らかフリックしている場合。液体は針の一番上になるまで、気泡は、プランジャーから、上部プッシュでたら。 </li><li>腹部の右下腹部に針を挿入します。血液や糞を吸引していないことを確認するために戻ってプランジャーを引っ張る、これは針の不正確な配置を示している。この問題が発生した場合は、針を撤回し、新しい注射器を準備します。針が正確に置かれたとき、均一にゆっくりと注射器の内容物を放出する。 </li></ol></li></ol> 7.腫瘍切除および剖検<ol><li>アルを収集し、きれいに動物の安楽死の前に70％エタノールリットルツール。 </li><li>所望の方法によって、動物を安楽死させる、CO 2吸入（5〜10分間2リットル/分）が推奨されます。身体状態の異常のために動物を調べます。 </li><li>解剖ボードに背側横臥位で動物を置き、70％エタノールで動物を清掃してください。 </li><li>下腹部の皮膚を持ち上げるためにピンセットを使用してください。はさみを使って皮膚や筋肉を切断し、動物の長さ（あごに肛門）を実行して、内側切開する。 </li><li>心臓や肺を露出させるために2カット、1横方向に胸郭の側面までと胸骨全体の1にすることによって胸郭をカット。すべての転移27,29のために肺のローブを調べます。 </li><li>異常のためにすべての臓器を調べ、色、大きさ、および一貫性の変化を記録する。必要に応じて、内部組織を調べるためにメスで臓器を切開する。具体的には、肝臓、腎臓、脾臓、および消化管を検査。 </li><li>転移および拡大27,29のためのリンパ節を検査します。 </li><li>腫瘍を収集するには、脇腹切開の上に、皮膚がピンセットで身体から引き離さすることができるように、腫瘍の下に作る。しっかりとピンセットで皮膚を保持しながら、慎重に腫瘍及び真皮（ 図5）との間で切断することにより、腫瘍を除去するためにメスを使用しています。 </li><li>すぐに10％中性緩衝ホルマリンのラベル容器に腫瘍を配置。 </li><li>腫瘍の大きさに応じて、組織学的分析（ 図6）のために切片を作製する前に固定するための1~2日（≤2mmの小）または5-6日間（大&gt; 2mmの）を可能にする。 </li></ol>

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The authors acknowledge there are no financial conflicts of interest related to this research.

Cotton rats are highly excitable and have a strong flight response. Therefore, special care should be taken to minimize any undue stress on the animal. The cage setup described will allow for safe and easy capture of the animals, with the placement of the enrichment tube being of the utmost importance. When setting up cages, ensure that the enrichment tubes meet the size and shape requirements, and are placed in proper orientation in the cage. It is also important to ensure that any technicians who might be aiding in animal maintenance are informed of the specific requirements for housing. Taking these precautions will reduce agitation of the animal prior to performing procedures. It is also advisable that procedures be performed in the morning, before any handling by technicians or animal facility staff. Commencing procedures with calm animals will aid in their capture and handling.
The use of nestlets is highly recommended. In the wild, these rodents make their nests out of cotton so they are more comfortable when given the option to build them in their cages. A nest can also aid in animal capture, such that the presence of the animal in the enrichment tube may no longer be required. In this case, the plastic container may be placed directly on top of the animal from above. This action is of particular use as an experiment progresses as the rats may adapt to avoid the traditional capture method.
When handling cotton rats it is of the utmost importance that the researcher remain calm and make deliberate movements. These animals can sense unease and will respond to the perceived emotional state of the handler. Wearing thick leather gloves, following the procedures as described and approaching them calmly and with confidence will protect from bite injuries.
There are conflicting reports in the literature regarding the response of cotton rats to anesthetics 26,32. Sedation of cotton rats for extended periods of time using isoflurane is not recommended 32. We have found that, with careful monitoring, animals can be sedated using isoflurane for approximately 15-20 minutes without adverse effects. In our experience the rats respond rapidly to isoflurane and are fully sedated within several minutes. Likewise, waking occurs in less than a minute in most cases. However, anesthetizing an animal under intense stress alters their response to isoflurane, such that during waking they experience a lack of hind limb motor control and will stumble around the cage. This effect does not appear to have any lasting impact as the animal can execute proper motor control within several minutes of recovery. 
When preparing the LCRT cells for tumor injections, it is imperative that the cells be kept on ice whenever possible to prolong viability. Mix the cells with a large bore pipet to avoid shearing the cells. Furthermore, to ensure that all tumors grow at a similar rate we recommend staggering the preparation of multiple cell suspensions when more than five animals are being injected. This will avoid slower growth of tumors in animals injected last due to decreased viability of the LCRT cells. 
Excising the tumor tissue from the skin using a scalpel better maintains the tumor architecture and vasculature for histology in comparison to using tweezers to pinch the tumor from the skin. Although perfusion with phenobarbital will best preserve tissues for histopathology, obtaining a license for barbiturates was a limiting factor and was not performed. Thus, necropsies were performed immediately following euthanasia to preserve tissues. In our experience, this allowed for an accurate assessment of the pathology associated with our treatment. 
Overall, the major limiting factor is the requirement for two researchers for handling procedures. Although the procedures can be performed by one handler, the process is greatly facilitated, and the stress of the animals significantly reduced, using two handlers. These procedures require practice and careful planning. Allow sufficient time to carry out methods calmly and deliberately. There exists significant stigma about the aggressive nature of these animals and the difficulty in their handling. This article serves to make these animals more accessible to researchers by detailing a simple, established handling method that effectively minimizes stress and injury to both the researcher and the animals. Using the methods we have described, cotton rats represent an excellent animal model for the study of many immune therapies, including oncolytic virotherapy.

腫瘍溶解性ウイルス（OV）を選択的に、正常細胞と腫瘍細胞1,2間の生化学的相違を利用して、腫瘍細胞中で複製する。天然に存在する野生型ウイルスと呼ばれる選択的な腫瘍崩壊を達成するために、突然変異を必要としないもの、および選択的な腫瘍崩壊を達成するように操作されなければならないもの：OVSの2種類がある。所定の腫瘍タイプ内の変異のコレクションは、OV 2のために、正常な細胞上の選択的な増殖の利点の性質を決定する。 OVSを使用することの安全性および利点は、臨床試験3-7に実証されている。腫瘍溶解性ウイルス療法の分野における進歩にもかかわらず、より良いモデルはOVSの抗腫瘍効果を評価するために必要であることを示唆し、前臨床及び臨床結果との間に隙間が存在する。 ウシヘルペスウイルス1型（BHV-1）、 ヘルペスウイルス科ファミリーのメンバー、及びAlphaherpesviridaeサブファミリーである。 BHV-1のiniti悪い風邪に似た症状が8,9、多種多様な顕在牛のATEウシ呼吸器病、。 BHV-1は、ヘパラン硫酸とネクチン1 10として、HSV-1によって使用される添付ファイルとエントリの受容体と結合する。しかし、ネクチン2 10の代わりに、CD155に特異的に結合する。 BHV-1は、それが効率的に入力して、正常および形質転換マウス細胞-3,4,10-で複製を開始することができないような非常に狭い宿主範囲を有している。これは、従来のマウスモデルの使用には問題となる。 BHV-1の腫瘍崩壊能力は、 インビトロ 11,12 に実証されている。 BHV-1で複製を開始し、セル11,12を開始乳癌細胞および乳癌を含む組織学的起源の様々なヒト腫瘍細胞を死滅させることが示されている。しかし、BHV-1の抗腫瘍容量は、免疫担当ホストのコンテキスト内で、生体内で評価されなければならない。 のためのヒトアデノウイルス（AD）、57の血清型が同定された最も一般的にヒトにおける呼吸器疾患の原因がある。腫瘍溶解性Adベクターは、いくつかの臨床試験13-15に進出して、それらの抗腫瘍効果について評価されている。有望な前臨床データにもかかわらず、臨床結果は期待の短い下落している。それらはウイルス16,17に対する免疫応答を減衰さ呈するものの、ヒト腫瘍異種移植片モデルは、典型的には、Adベクターの抗腫瘍効果を研究するために使用される。さらに、同系マウスモデルは、広告感染に対する非許容である17,18非現実的なこれらのモデルを使用して、ホストの免疫応答の評価を行う。 宿主の免疫系は、腫瘍細胞死を誘発する19 OVSそれによって最も影響力のあるメカニズムとして同定されている。寛容および非寛容化腫瘍関連抗原（TAA）モデル間の抗腫瘍応答が異なると大幅にOV療法の成功に影響を与えることができる。 HSV-1 OV KM100（ICP0 N2121814 20 における VP16）20,21は、マウスポリオーマミドルT抗原乳癌モデル22における担癌マウスの80％において腫瘍退縮を誘発した。しかし、HER-2 / neuのモデルにおいて、KM100の抗腫瘍効果は、トランスジェニック同系マウス腫瘍静止状態で20％の完全な退行の間HER2寛容化マウスを変える。一緒にこれらのデータは、完全に最高の完全に治療の成功を決定する機能を理解するために、ヒトの免疫風景を再現動物モデルを用いてOVSを評価することの重要性を強調。 （5で検討される）南北アメリカ原産のコットンラット（Sigmodon紫檀 ） は 、最も一般的にRSウイルス感染症のモデルとして使用されます。それらは6,23複雑ウシ呼吸器疾患に関連する病理を再現するように、コットンラットは、抗BHV-1ワクチン接種の研究で使用されている。コットンラットのさらに、BHV-1感染持続的な粘膜および全身の免疫応答6,23-25 ​​を誘導する、免疫原性である。細胞株はそれぞれ26、自発的な線維肉腫および骨肉腫乳腺（LCRT）のと骨（CCRTとVCRT）に由来している。コットンラットは、それらが広告感染に対して感受性であり、ヒトの27-29と同様の病理を示すように腫瘍溶解性Adベクターのインビボでの有効性を評価するために使用されてきた。 OVSの前臨床評価のための免疫不全のモデルの使用だけでなく、治療に対する臨床反応の少ない指標であるが、彼 ​​らは考慮に腫瘍溶解性ウイルス療法30,31における免疫系の役割を取ることができない。したがって、同系および乳癌および骨肉腫の腫瘍寛容コットンラットモデルは、従来のマウスモデルを用いて研究することができないようなBHV-1とOVS、およびAdの前臨床効力を評価するの関連モデルである。

<table><tbody><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s modified Eagle&amp;rsquo;s medium&amp;nbsp;</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td>May use any brand&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>1X Phosphate Buffered Saline&amp;nbsp;</td><td></td><td></td><td>Can prepare in lab, filter to sterilize</td></tr><tr><td>200 mM L-glutamine</td><td>Gibco</td><td>25030164</td><td>May use any brand</td></tr><tr><td>100x Antibiotic-Antimycotic&amp;nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td>May use any brand</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Quality Biological Inc.</td><td>110-001-101HI</td><td>May use any brand</td></tr><tr><td>T-150cm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt; tissue culture flask</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-80</td><td>May use any brand</td></tr><tr><td>1X TypLE Express</td><td>Life Technologies</td><td>12604-013</td><td></td></tr><tr><td>12-well cell culture plate, flat bottom</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-29</td><td>May use any brand, must be tissue culture treated</td></tr><tr><td>alamarBlue</td><td>Life Technologies</td><td>DAL1025</td><td>May use an alternative reagent for determination of cell viability</td></tr><tr><td>8640 Teklad 22/5 Rodent diet</td><td>Harlan&amp;nbsp;</td><td>8640</td><td></td></tr><tr><td>1/8&amp;rdquo; corncob rodent bedding</td><td>Harlan</td><td>7092</td><td></td></tr><tr><td>Nestlets</td><td>Ancare</td><td>-</td><td>Made of pulped virgin cotton fiber, dust-free and autoclavable</td></tr><tr><td>50 mL Conical tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-432-22</td><td>May use any brand, must be sterile</td></tr><tr><td>Isoflurane USP, 99.9 %, inhalation anesthetic</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td><td>M60302</td><td></td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td></td><td></td><td>Can prepare in lab</td></tr><tr><td>10 % Neutral Buffered Formalin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td>May use any brand</td></tr><tr><td>NAPCO NapFlow 1200 Class II A/B3 Biosafety Microbiological Safety Cabinet (cell culture hood)</td><td>NAPCO</td><td>Model used not currently available</td><td>May use any brand</td></tr><tr><td>Thermo Fisher Scientific Precision Heated Water Bath</td><td>Fisher Scientific</td><td>Model used not currently available&amp;nbsp;</td><td>May use any brand</td></tr><tr><td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td>Reichert Bright-line Hemacytometer</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z359629</td><td>May use any brand</td></tr><tr><td>Typhoon Trio BioAnalyzer&amp;nbsp;</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>Model used not currently available&amp;nbsp;</td><td>May use any fluorescence plate reader</td></tr><tr><td>Tecan Safire&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt; Multi-detection Microplate Reader</td><td>Tecan</td><td>Model used not currently available&amp;nbsp;</td><td>May use any fluorescence plate reader</td></tr><tr><td>Allegra 6R benchtop centrifuge</td><td>Beckman Coulter</td><td>366816</td><td>May use any brand</td></tr><tr><td>Table Top Anaesthesia machine</td><td>VetEquip</td><td>Model used not currently available&amp;nbsp;</td><td>May use any brand, must be portable</td></tr><tr><td>Wahl Peanut Mini Clippers</td><td>Wahl</td><td></td><td>May use any brand of small clippers</td></tr><tr><td>Insulin syringes 29 G x 1/2&#039;, 0.3 mL</td><td>BD</td><td>329464</td><td>May use any brand. Insulin syringes are recommended as they make injections easier through the rat&amp;rsquo;s tough skin.&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Cotton swabs</td><td>MedPro</td><td>018-425</td><td>May use any brand</td></tr><tr><td>Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td><td>Fisher Scientific</td><td>8940</td><td>May use any brand</td></tr><tr><td>Dissecting Tissue Forceps</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-812-41</td><td>May use any brand</td></tr></tbody></table>

handling of the cotton rat in studies for the pre-clinical evaluation of oncolytic viruses

Oncolytic viruses are a novel anticancer therapy with the ability to target tumor cells, while leaving healthy cells intact. For this strategy to be successful, recent studies have shown that involvement of the host immune system is essential. Therefore, oncolytic virotherapy should be evaluated within the context of an immunocompetent model. Furthermore, the study of antitumor therapies in tolerized animal models may better recapitulate results seen in clinical trials. Cotton rats, commonly used to study respiratory viruses, are an attractive model to study oncolytic virotherapy as syngeneic models of mammary carcinoma and osteosarcoma are well established. However, there is a lack of published information on the proper handling procedure for these highly excitable rodents. The handling and capture approach outlined minimizes animal stress to facilitate experimentation. This technique hinges upon the ability of the researcher to keep calm during handling and perform procedures in a timely fashion. Finally, we describe how to prepare cotton rat mammary tumor cells for consistent subcutaneous tumor formation, and how to perform intratumoral and intraperitoneal injections. These methods can be applied to a wide range of studies furthering the development of the cotton rat as a relevant pre-clinical model to study antitumor therapy.

によるコットンラットの非常に興奮性の性質を熟知していると、前臨床動物モデルとしての使用に容易になり、動物のストレスを低減するように最適化手順を利用する。適切な処理技術の使用はまた、研究者へのリスクを最小限にする。 コットンラットを使用したとき、それは穏やかな滞在することが不可欠です。ラットは非常に興奮性であり、それらのケージを脱出しようとします。濃縮管とnestletsの使用は、エスケープの試みを最小限に抑えることができます。 図2に、濃縮管の配置など、コットンラット、の捕獲を支援するために、最適なケージのセットアップを示しています。奪還を支援するために、可能な場合また、小さな部屋で働いています。エスケープが発生した場合は、無理な力を加えないように注意しながら、手袋をはめた手で明確なキャプチャコンテナまたはカバーでそれをカバーし、沈静化するために動物を待ち、静止している。 マウスとは対照的に、コットンラットは、細長いスナウトワットを有するHICHは、麻酔ガスを送達するようにフィッティング異なる鼻を必要とする。 図3は、適切にコットンラットにフィットし、イソフルランの送達を最大にするノーズコーンを示している。フィッティングのゴム膜を使用すると、ラットの鼻への外傷を生じ得る。 廃棄動物を得ることができた場合は、ラットにそれらを試みる前に注射技術を実践するために（それらは、そうでなければ、他の研究者、コットンラットまたはが必要としない）。これは研究者は、針とどのようにそれらを安全に処理する方法に精通して得ることができるようになります。彼らの皮膚は、マウスに比べて厚く、タフであるようにインスリン注射器は、コットンラットにおける注射のために提案されている。しかしながら、より大きな注射針（1×21 G &#39;）は、注入中に、セルのせん断に対する細胞生存率の低下を回避するために、腫瘍細胞の注射のために使用することができる。安全上のご注意は、このような鋭利物容器に針や適切な処分をさらいしないように、従うべき。 injec生存腫瘍細胞のる適切腫瘍形成に重要である。 図1Aは、コットンラットへの注入のために調製することができるLCRT細胞の健全な単層を示している。比較して、図1Bは、低い生存率を有し、注射のために使用されるべきではないLCRT細胞を示す。注射用の細胞を計数する際には、トリパンブルー染色などの方法を用いて腫瘍細胞の生存率を確認することが重要である。 LCRT細胞から形成された腫瘍は、急成長および壊死中心が頻繁に（ 図4A）を形成している。このように、腫瘍形成は、潰瘍（ 図4B）を避けるために注意深く監視されるべきである。潰瘍が発生した場合動物は敗血症から感染し、可能死を避けるために犠牲にする必要があります。 抗腫瘍治療の効果は、多くの場合、最高の組織学的分析を介して調べられる。これは、腫瘍の死後の切除が必要です。腫瘍組織の完全性を維持することがresはなりインビボでの腫瘍のより正確な表現であり、試料中のULT。 図5は、腫瘍を注意深くメス及びピンセットを用いて、周囲の組織から分離することにより、切除技術を示す。ピンセットを使って周囲の組織からの力によってそれを引っ張って腫瘍を除去すると、腫瘍を破壊または腫瘍組織の完全性を崩壊させる、適切な組織学的分析に影響を与えることがあります。腫瘍の緻密で高度に血管構造は、 図6に示すように、この切除技術によって維持される。多くのOVSの場合のように、これは、腫瘍血管系に影響を与える治療の分析において重要である。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/52232/52232fig1highres.jpg" /> 図1：健康のLCRT細胞の明視野顕微鏡画像（A）表現型（約90％生存）コットンラットへの注入の準備のための準備ができてLCRT細胞。（B）LCRT細胞の望ましくない表現型注入には向いていない。丸みを帯びた細胞は死んでいるか（矢印で示す）が死んでいる。画像は10倍の倍率で撮影された。スケールバー= 1ミリメートル。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/52232/52232fig2highres.jpg" /> 図2：コットンラットの取り込みを容易にするためにケージのセットアップの例ケージや動物の捕獲でnestlets助剤の含有物の端部に対して濃縮チューブの最適な配置。。 <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/52232/52232fig3highres.jpg" /> 図3：麻酔をコットンラットにイソフルランを送達するためのフィッティング麻酔ノーズコーンを購入ノーズコーンは、鼻に外傷なしにイソフルランガスの正確な配送を確保するために、コットンラットの細長い鼻にフィットします。 <iMG ALT =「図4「SRC = &quot;/ファイル/ ftp_upload / 52232 / 52232fig4highres.jpg&quot; /&gt; 図4：皮下LCRT腫瘍における壊死組織（A）腫瘍組織の壊死の初期段階。動物は、慎重に（B）全開潰瘍形成への進行を回避するために監視されるべきである。感染症や敗血症などの腫瘍潰瘍が結果ができれば動物を犠牲にする必要があります。 <img alt="図5" src="/files/ftp_upload/52232/52232fig5highres.jpg" /> 図5：組織学のために皮下LCRT腫瘍の切除コットンラットの側腹部に皮下腫瘍を注意深く従って、組織学的分析のために腫瘍構造のよりよい表現を提供する、腫瘍組織の完全性を維持するために、外科用メスを用いて皮膚から除去される。 <img alt="図6" src="/files/ftp_upload/52232/52232fig6highres.jpg"/&gt; 図6：皮下LCRT腫瘍の組織学的組織切片 LCRT腫瘍組織の形態は、ヘマトキシリンおよびエオシン（H＆E）で染色したパラフィン包埋切片を用いて調べた。画像は20Xの倍率で撮影した。スケールバー= 1ミリメートル。

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Handling of the Cotton Rat in Studies for the Pre-clinical Evaluation of Oncolytic Viruses

Cotton rats are extremely excitable and have a strong flight-or-fight response. A handling method optimized to reduce the stress of the animals is described which will make cotton rats more accessible as a preclinical model.

腫瘍溶解性ウイルスの前臨床評価のための研究のコットンラットの取扱い

Oncolytic viruses are a novel anticancer therapy with the ability to target tumor cells, while leaving healthy cells intact.  For this strategy to be ...

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Medicine

9.3K ビュー.  McMaster University. Cotton rats are extremely excitable and have a strong flight-or-fight response. A handling method optimized to reduce the stress of the animals is described which will make cotton rats more accessible as a preclinical model. 

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Genome-wide RNAi Screening to Identify Host Factors That Modulate Oncolytic Virus Therapy

High-throughput genome-wide RNAi (RNA interference) screening technology has been widely used for discovering host factors that impact&#160;virus replication. Here we present the application of this technology to uncovering host targets that specifically modulate the replication of Maraba virus, an oncolytic rhabdovirus, and vaccinia virus with the goal of enhancing therapy. While the protocol has been tested for use with oncolytic Maraba virus and oncolytic vaccinia virus, this approach is applicable to other oncolytic viruses and can also be utilized for identifying host targets that modulate virus replication in mammalian cells in general. This protocol describes the development and validation of an assay for high-throughput RNAi screening in mammalian cells, the key considerations and preparation steps important for conducting a primary high-throughput RNAi screen, and a step-by-step guide for conducting a primary high-throughput RNAi screen; in addition, it broadly outlines the methods for conducting secondary screen validation and tertiary validation studies. The benefit of high-throughput RNAi screening is that it allows one to catalogue, in an extensive and unbiased fashion, host factors that modulate any aspect of virus replication for which one can develop an in vitro assay such as infectivity, burst size, and cytotoxicity. It has the power to uncover biotherapeutic targets unforeseen based on current knowledge.

Here we describe a protocol for employing high-throughput RNAi screening to uncover host targets that can be manipulated to enhance oncolytic virus therapy, specifically rhabodvirus and vaccinia virus therapy, but it can be readily adapted to other oncolytic virus platforms or for discovering host genes that modulate virus replication generally.

腫瘍溶解性ウイルス治療を調節するホストの要因を識別するために全ゲノム RNAi スクリーニング

High-throughput genome-wide RNAi (RNA interference) screening technology has been widely used for discovering host factors that impact&#160;virus ...

がん研究

A Method for Remotely Silencing Neural Activity in Rodents During Discrete Phases of Learning

This protocol describes how to temporarily and remotely silence neuronal activity in discrete brain regions while animals are engaged in learning and memory tasks. The approach combines pharmacogenetics (Designer-Receptors-Exclusively-Activated-by-Designer-Drugs) with a behavioral paradigm (sensory preconditioning) that is designed to distinguish between different forms of learning. Specifically, viral-mediated delivery is used to express a genetically modified inhibitory G-protein coupled receptor (the Designer Receptor) into a discrete brain region in the rodent. Three weeks later, when designer receptor expression levels are high, a pharmacological agent (the Designer Drug) is administered systemically 30 min prior to a specific behavioral session. The drug has affinity for the designer receptor and thus results in inhibition of neurons that express the designer receptor, but is otherwise biologically inert. The brain region remains silenced for 2-5 hr (depending on the dose and route of administration). Upon completion of the behavioral paradigm, brain tissue is assessed for correct placement and receptor expression. This approach is particularly useful for determining the contribution of individual brain regions to specific components of behavior and can be used across any number of behavioral paradigms.

This protocol describes how to temporarily and remotely silence neuronal activity in discrete brain regions while rats are engaged in learning and memory tasks. The approach combines pharmacogenetics (Designer-Receptors-Exclusively-Activated-by-Designer-Drugs) with a behavioral paradigm (sensory preconditioning) that is designed to distinguish between different components of learning.

学習の離散段階中げっ歯類におけるリモートサイレン神経活動のための方法

This protocol describes how to temporarily and remotely silence neuronal activity in discrete brain regions while animals are engaged in learning and ...

行動学

Transarterial Administration of Oncolytic Viruses for Locoregional Therapy of Orthotopic HCC in Rats

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a disease with limited treatment options and poor prognosis. In recent years, oncolytic virotherapies have proven themselves to be potentially powerful tools to fight malignancy. Due to the unique dual blood supply in the liver, it is possible to apply therapies locally to orthotopic liver tumors, which are predominantly fed by arterial blood flow. We have previously demonstrated that hepatic arterial delivery of oncolytic viruses results in safe and efficient transduction efficiency of multifocal HCC lesions, resulting in significant prolongation of survival in immune competent rats. This procedure closely mimics the application of transarterial embolization in patients, which is the standard palliative care provided to many HCC patients. The ability to administer tumor therapies through the hepatic artery in rats allows for a highly sophisticated preclinical model for evaluating novel viral vectors under development. Here we describe the detailed protocol for microdissection of the hepatic artery for infusion of oncolytic virus vectors to treat orthotopic HCC.

Oncolytic virotherapies are under development as novel therapeutics for the treatment of hepatocellular carcinoma (HCC). Here we describe a method for locoregional therapy of HCC via hepatic arterial administration of oncolytic virus.

ラットにおける同所性肝細胞癌の局所領域治療のための腫瘍溶解性ウイルスのTransarterial管理

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a disease with limited treatment options and poor prognosis.  In recent years, oncolytic virotherapies have proven ...

医学

Generation of Transgenic Rats using a Lentiviral Vector Approach

Transgenic animal models are fundamentally important for modern biomedical research. The incorporation of foreign genes into early mouse or rat embryos is an invaluable tool for gene function analysis in living organisms. The standard transgenesis method is based on microinjecting foreign DNA fragments into a pronucleus of a fertilized oocyte. This technique is widely used in mice but remains relatively inefficient and technically demanding in other animal species. The transgene can also be introduced into one-cell-stage embryos via lentiviral infection, providing an effective alternative to standard pronuclear injections, especially in species or strains with a more challenging embryo structure. In this approach, a suspension that contains lentiviral vectors is injected into the perivitelline space of a fertilized rat embryo, which is technically less demanding and has a higher success rate. Lentiviral vectors were shown to efficiently incorporate the transgene into the genome to determine the generation of stable transgenic lines. Despite some limitations (e.g., Biosafety Level 2 requirements, DNA fragment size limits), lentiviral transgenesis is a rapid and efficient transgenesis method. Additionally, using female rats that are mated with a fertile male strain with a different dominant fur color is presented as an alternative to generate pseudopregnant foster mothers.

This article aims to provide the methodology for lentiviral transgenesis in rat embryos using multiple injections of a virus suspension into the zygote perivitelline space. Female rats that are mated with a fertile male strain with a different dominant fur color is used to generate pseudopregnant foster mothers.

レンチウイルスベクターアプローチによるトランスジェニックラットの生成

Transgenic animal models are fundamentally important for modern biomedical research. The incorporation of foreign genes into early mouse or rat embryos is ...

生物工学

Methods and Tips for Intravenous Administration of Adeno-associated Virus to Rats and Evaluation of Central Nervous System Transduction

Adeno-associated virus (AAV) vectors are a key reagent in the neurosciences for clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR), optogenetics, cre-lox targeting, etc. The purpose of this manuscript is to aid the investigator attempting expansive central nervous system (CNS) gene transfer in the rat via tail vein injection of AAV. Wide-scale expression is relevant for conditions with widespread pathology, and a rat model is significant due to its greater size and physiologic similarities to humans compared to mice. In this example application, a wide-scale neuronal transduction is used to mimic a neurodegenerative disease that affects the entire spinal cord, amyotrophic lateral sclerosis (ALS). The efficient wide-scale CNS transduction can also be used to deliver therapeutic protein factors in pre-clinical studies. After a post-injection expression interval of several weeks, the effects of the transduction are evaluated. For a green fluorescent protein (GFP) control vector, the amount of GFP in the cerebellum is estimated quickly and reliably by a basic imaging program. For motor disease phenotypes that are induced by the ALS related protein transactive response DNA-binding protein of 43 kDa (TDP-43), the deficits are scored by escape reflex and rotarod. Beyond disease modeling and gene therapy, there are diverse potential applications for the wide-scale gene targeting described here. The expanded use of this method will aid in expediting hypothesis testing in the neurosciences and neurogenetics.

Methods for a wide-scale central nervous system gene delivery in the rat are covered. In this example, the purpose is to mimic a disease that affects the entire spinal cord. The widespread transduction can be used to deliver a therapeutic protein to the CNS from a one-time, peripheral administration.

メソッドおよびアデノ随伴ウイルス ラットの静脈内投与と中枢神経系の伝達の評価のためのヒント

Adeno-associated virus (AAV) vectors are a key reagent in the neurosciences for clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR), ...

神経科学

A Rat Model of EcoHIV Brain Infection

It has been well studied that the EcoHIV infected mouse model is of significant utility in investigating HIV associated neurological complications. Establishment of the EcoHIV infected rat model for studies of drug abuse and neurocognitive disorders, would be beneficial in the study of neuroHIV and HIV-1 associated neurocognitive disorders (HAND). In the present study, we demonstrate the successful creation of a rat model of active HIV infection using chimeric HIV (EcoHIV). First, the lentiviral construct of EcoHIV was packaged in cultured 293 FT cells for 48 hours. Then, the conditional medium was concentrated and titered. Next, we performed bilateral stereotaxic injections of the EcoHIV-EGFP into F344/N rat brain tissue. One week after infection, EGFP fluorescence signals were detected in the infected brain tissue, indicating that EcoHIV successfully induces an active HIV infection in rats. In addition, immunostaining for the microglial cell marker, Iba1, was performed. The results indicated that microglia were the predominant cell type harboring EcoHIV. Furthermore, EcoHIV rats exhibited alterations in temporal processing, a potential underlying neurobehavioral mechanism of HAND as well as synaptic dysfunction eight weeks after infection. Collectively, the present study extends the EcoHIV model of HIV-1 infection to the rat offering a valuable biological system to study HIV-1 viral reservoirs in the brain as well as HAND and associated comorbidities such as drug abuse.

Here, we present a protocol to establish a new rat model of active HIV infection using chimeric HIV (EcoHIV), which is critical for enhancing our understanding of HIV-1 viral reservoirs in the brain and offering a system to study HIV-associated neurocognitive disorders and associated comorbidities (i.e., drug abuse).

エコHIV脳感染症のラットモデル

It has been well studied that the EcoHIV infected mouse model is of significant utility in investigating HIV associated neurological complications. ...

Monitoring Endoplasmic Reticulum Calcium Homeostasis Using a Gaussia Luciferase SERCaMP

The endoplasmic reticulum (ER) contains the highest level of intracellular calcium, with concentrations approximately 5,000-fold greater than cytoplasmic levels. Tight control over ER calcium is imperative for protein folding, modification and trafficking. Perturbations to ER calcium can result in the activation of the unfolded protein response, a three-prong ER stress response mechanism, and contribute to pathogenesis in a variety of diseases. The ability to monitor ER calcium alterations during disease onset and progression is important in principle, yet challenging in practice. Currently available methods for monitoring ER calcium, such as calcium-dependent fluorescent dyes and proteins, have provided insight into ER calcium dynamics in cells, however these tools are not well suited for in vivo studies. Our lab has demonstrated that a modification to the carboxy-terminus of Gaussia luciferase confers secretion of the reporter in response to ER calcium depletion. The methods for using a luciferase based, secreted ER calcium monitoring protein (SERCaMP) for in vitro and in vivo applications are described herein. This video highlights hepatic injections, pharmacological manipulation of GLuc-SERCaMP, blood collection and processing, and assay parameters for longitudinal monitoring of ER calcium.

Monitoring Endoplasmic Reticulum Calcium Homeostasis Using a Gaussia Luciferase SERCaMP

Endoplasmic reticulum calcium homeostasis is disrupted in diverse pathologies. A secreted ER calcium monitoring protein (SERCaMP) reporter can be used to detect disruptions in the ER calcium store. This protocol describes the use of a Gaussia luciferase SERCaMP to examine ER calcium homeostasis in vitro and in vivo.

使用して小胞体カルシウムの恒常性の監視<em&gt;ガウ</em&gt;ルシフェラーゼSERCaMP

The endoplasmic reticulum (ER) contains the highest level of intracellular calcium, with concentrations approximately 5,000-fold greater than cytoplasmic ...

生物学

Viral Transgene Expression in Rodent Hearts and the Assessment of Cardiac Arrhythmia Risk

Heart disease is the leading cause of morbidity and mortality worldwide. Due to the ease of handling&#160;and abundance of transgenic strains, rodents have become essential models for cardiovascular research. However, spontaneous lethal cardiac arrhythmias that often cause mortality in heart disease patients are rare in rodent models of heart disease. This is primarily due to the species differences in cardiac electrical properties between human&#160;and rodents and poses a challenge to the study of cardiac arrhythmias using rodents. This protocol describes an approach to enable efficient transgene expression in mouse and rat ventricular myocardium using echocardiography-guided intramuscular injections of recombinant virus (adenovirus and adeno-associated virus). This work also outlines a method to enable reliable assessment of cardiac susceptibility to arrhythmias using isolated, Langendorff-perfused mouse and rat hearts with both adrenergic and programmed electrical stimulations. These techniques are critical for studying heart rhythm disorders associated with adverse cardiac remodeling after injuries, such as myocardial infarction.

The present protocol describes methods for transgene expression in rat and mouse hearts by direct intramyocardial injection of the virus under echocardiography guidance. Methods for the assessment of the susceptibility of hearts to ventricular arrhythmias by the programmed electrical stimulation of isolated, Langendorff-perfused hearts are also explained here.

げっ歯類の心臓におけるウイルス導入遺伝子発現と心不整脈リスクの評価

Heart disease is the leading cause of morbidity and mortality worldwide. Due to the ease of handling&#160;and abundance of transgenic strains, rodents ...

Establishing an Active HIV Infection in a Rat Model

Source: Li, H., McLaurin, et al. <a href="https://app.jove.com/v/62137">A Rat Model of EcoHIV Brain Infection.</a> J. Vis. Exp. (2021).
This video demonstrates the procedure of injecting chimeric HIV viruses into the cortex of a rat&#39;s brain, where the virus RNA integrates into the host genome, replicates, and spreads to establish an active HIV infection in the experimental model.

ラットモデルにおける活動性HIV感染の確立

All procedures involving animal models have been reviewed by the local institutional animal care committee and the JoVE veterinary review board.
1. ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuropathology

Infectious Diseases

Targeting Liver Tumors with Oncolytic Viruses via the Hepatic Artery

Source: Altomonte, J. et al., <a href="https://app.jove.com/v/53757">Transarterial Administration of Oncolytic Viruses for Locoregional Therapy of Orthotopic HCC in Rats.</a>&#160;J. Vis. Exp. (2016)
The video demonstrates locoregional delivery of oncolytic viruses through hepatic arterial injection as a therapeutic approach for hepatocellular carcinoma. These viruses selectively replicate in tumor cells, inducing cell lysis and releasing tumor cell-associated antigens. This process triggers immunogenic cell death, inducing an anti-tumor response.

腫瘍溶解性ウイルスの前臨床評価のための研究のコットンラットの取扱い

要約

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この動画の章

腫瘍溶解性ウイルス治療を調節するホストの要因を識別するために全ゲノム RNAi スクリーニング

学習の離散段階中げっ歯類におけるリモートサイレン神経活動のための方法

ラットにおける同所性肝細胞癌の局所領域治療のための腫瘍溶解性ウイルスのTransarterial管理

レンチウイルスベクターアプローチによるトランスジェニックラットの生成

メソッドおよびアデノ随伴ウイルスラットの静脈内投与と中枢神経系の伝達の評価のためのヒント

エコHIV脳感染症のラットモデル

使用して小胞体カルシウムの恒常性の監視

げっ歯類の心臓におけるウイルス導入遺伝子発現と心不整脈リスクの評価

ラットモデルにおける活動性HIV感染の確立

肝動脈を介した腫瘍溶解性ウイルスによる肝腫瘍の標的化

腫瘍溶解性ウイルスの前臨床評価のための研究のコットンラットの取扱い

要約

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腫瘍溶解性ウイルス治療を調節するホストの要因を識別するために全ゲノム RNAi スクリーニング

学習の離散段階中げっ歯類におけるリモートサイレン神経活動のための方法

ラットにおける同所性肝細胞癌の局所領域治療のための腫瘍溶解性ウイルスのTransarterial管理

レンチウイルスベクターアプローチによるトランスジェニックラットの生成

メソッドおよびアデノ随伴ウイルス ラットの静脈内投与と中枢神経系の伝達の評価のためのヒント

エコHIV脳感染症のラットモデル

使用して小胞体カルシウムの恒常性の監視

げっ歯類の心臓におけるウイルス導入遺伝子発現と心不整脈リスクの評価

ラットモデルにおける活動性HIV感染の確立

肝動脈を介した腫瘍溶解性ウイルスによる肝腫瘍の標的化

メソッドおよびアデノ随伴ウイルスラットの静脈内投与と中枢神経系の伝達の評価のためのヒント