Breanne Cuddington holds a fellowship from the Canadian Breast Cancer Foundation. This work was sponsored by operating grants from the Cancer Research Society and the Canadian Cancer Society Research Institute (formerly the Canadian Breast Cancer Research Alliance). We thank Ann Tollefson (Saint Louis University School of Medicine) for LCRT cells and Dr. Kathleen Delaney and Marion Corrick for technical assistance with cotton rat housing and sedation.

注：使用されるプロトコルは、動物ケアのガイドラインにカナダの評議会によるとマクマスター大学で私たちの施設内動物研究倫理委員会によって承認されている。実験は、マクマスター大学、中央動物施設で実施した。 1.培養LCRT細胞<ol><li>ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）中で培養LCRT細胞を、10％ウシ胎児血清（FBS）、2 mM L-グルタミン、100 U / mlペニシリンおよび100μg/ mlストレプトマイシンを補充した。 37℃でT-150組織培養フラスコ中で細胞を維持し、5％CO 2。継代細胞は90％コンフルエントな単層（2〜3日毎に、 図1）を形成する。 </li><li>前加温1×リン酸緩衝生理食塩水（PBS）、細胞を分割する前に10分間37℃の水浴中で1×トリプシンおよび培地。 </li><li>吸引除去フラスコから培地および1×5mlのPBSで細胞をすすいでください。 </li><li>すすいだ後、PBSを吸引し、インキュベート1Xトリプシンの2ミリリットルをもつ細胞の細胞がフラスコ（〜2分）から解離するまで。 </li><li>穏やかに（10ミリリットルの細胞懸濁液の合計）8ミリリットル培地中の細胞を再懸濁し、細胞の塊を破壊するために上下にピペット。 </li><li>左右に優しく側から、ロックフラスコ（T-150あたり25ミリリットルの合計）24ミリリットル培地に1ミリリットルの細胞懸濁液を播種することにより、T-150フラスコ中の細胞を維持する。次の分割まで37℃で、5％CO 2で細胞を維持する。 </li></ol> 2. LCRT細胞におけるウイルス複製と細胞毒性を評価する<ol><li>ウイルス複製 注：そのような内因性のウイルスプロモーターの制御下で緑色蛍光タンパク質（GFP）などの蛍光タグを発現するウイルス構築物は、ウイルス感染の可視化を容易にし、蛍光プレートリーダーを用いて広げた。 <ol><li>計数のために井戸を残して培養プレートにシードLCRT細胞。彼らは1日後に80〜90％コンフルエントになるようシード細胞。 10 5セル画の濃度を使用してくださいのls / mlの（ウェル当たり100μl）を96ウェル平底プレート中で一日後、所望の密集度を生成する。 </li><li>翌日、前加温1×PBS、1×トリプシン、事前実験を開始する10分間37℃の水浴中で完全な無血清培地。 </li><li>よく数え、ウェルの表面の上に揺動することによって1×PBS 5mlで細胞をリンスから培地を吸引。 </li><li>すすいだ後、吸引PBS、細胞がフラスコ（〜2分）から解離するまでの1xトリプシンの2ミリリットルで細胞を培養する。 </li><li>血球計数器を用いてカウント可能範囲内に細胞密度を得るために完全培地の適切な体積で細胞を再懸濁する。正確な細胞数を確保するために、前に十分ピペッティングにより血球計数器を接種する細胞懸濁液を混ぜる。 </li><li>感染の所望の多重度（MOI）で感染に必要ウイルスストックの量を決定します。 形成単位必要なコールパック（PFU）=播種した細胞の数* MOI（PFU /細胞） ウイルスストックのボリュームに必要=必要なPFU /ウイルスストックの力価（PFU / ml）を</li><li>チューブ内の無血清培地中でウイルス接種を準備します。細胞に接種材料を追加する前に、ボルテックスまたはピペッティングで完全に混合します。 </li><li> DMEM + 1％FBSのメンテナンスオーバーレイを適用した後、37℃で1時間、細胞に感染する。 </li><li>スキャンプレート1および2日後に感染（π）は、GFP蛍光を可視化した。 </li></ol></li><li>ウイルス細胞毒性 注：化合物が感光性であるように、低光条件下でレサズリン細胞毒性アッセイを実行します。ウェルを含有する培地は、バックグラウンド蛍光を補正するために含まれるべきである。 <ol><li> 1×PBS中レサズリンの5％（v / v）の溶液を調製する。ピペッティングにより溶液を混ぜる。 </li><li>吸引細胞からの培地、5％のレサズリン溶液を適用する。唯一のバックグラウンド蛍光を補正するためによく含む媒体を含む。 </li><li> 37℃で30分間細胞をインキュベート °C、後その蛍光プレートリーダー（励起530nmで、放射595 nm）を用いて蛍光をお読みください。 </li><li>バックグラウンド蛍光を補正する非感染対照と比較したデータを分析します。 </li></ol></li></ol> 3.住宅および取扱い<ol><li>住宅·ダイエット<ol><li>ハウスコットンラットを個別に-戦っげっ歯類寝具（1/8 &quot;トウモロコシの穂軸寝具）、もはや濃縮などの8インチとnestletsよりPVCチューブ（ 図2）のセクションを含むポリカーボネートラットケージに減少します。 </li><li>頭上ケージの座ると齧歯類食品や水のボトルを含むように固定可能なスチールバスケットを使用してください。 注：このケージのセットアップが最も重要のケージ幸福の終わりに対して濃縮管の配置を、動物の安全かつ容易なキャプチャが可能になります。 </li></ol></li><li>取り扱い<ol><li>前エキサイティングそれらを避けるために前に動物施設の技術者によるラウンドに、午前中にコットンラットを扱う手順。 </li><li>すべての手順の間、保護のための厚手の革手袋を着用してください。 </li><li>動物は主に濃縮管に残っているように、定期的な洗浄中に新しいケージにラットを転送するためにそれらを使用しています。代替的に、ハンドラがそれらの手に到達することを可能にするためにわずかにケージを開いて、動物は、ちょうど肩の上の皮膚をscruffingと押し下げて抑制することができる。動物として無理な力を加えないように練習ケアは彼らの舌をかむことがあります。 </li><li>我慢してと動物が強い飛行または戦いの応答があり、実行していると、ケージの外にジャンプして捕獲を避けるためにしようとするように着実に手を使用しています。 deglovingが発生するように重要なのは、テールにより動物を扱うことができません。 </li><li>トラップ直接取り扱い上の彼らの濃縮度管の動物。これは大幅に傷害を減少させ、脱出。 </li></ol></li></ol> 4.キャプチャと麻酔<ol><li>キャプチャー<ol><li>プロテクト用の厚手の革手袋を着用してくださいすべての手順の間にイオン。 </li><li>空気と蓋、容器及びガス出力ホース（ 図3）に取り付けられたノーズコーンに合わせて十分な大きさの麻酔導入室用の穴を持つ大規模な明確なプラスチック容器を使用してください。 </li><li>手順がより効率的にするとイソフルラン、吸入麻酔薬に動物の露光時間を減少させるためにペアで動作。 1研究者は、開口部を担当していることを確認し、ケージと誘導室（ハンドラ＃1）の蓋とその準にスチールカバーを交換すると誘導室にチューブ内の動物の捕獲や輸送を担当する（ハンドラ＃ 2）。 </li><li>平らな面にケージを置き、外蓋を取り外します。少しスチール給紙トレイを持ち上げて、ゆっくりとそれがケージの側面と、背面に対して平行になるように濃縮チューブを操縦。必要に応じて、動物を攪拌避けるためにケージを開かずに濃縮管を操縦するためにオブジェクトを使用（ハンドルR＃1）。 </li><li>動物が攪拌され、チューブを残しなった場合、動物はリラックスして再びチューブ（ハンドラ＃1）に定住するための十分な時間を確保。 </li><li>ゆっくりと意図的にケージに接触してもう一方の端を維持し、濃縮管から鋼カバー遠いの端を持ち上げます。プラスチック容器（ハンドラ＃2）のために十分な大きさのスペースを作る。 </li><li> 1なめらかな、クイックモーションでは、濃縮管の頭上プラスチック容器を押してください。チューブ内の動物を捕獲する、ケージの側面を有する容器の接触を維持する。可能な限り迅速に（ハンドラ＃2）のステップ4.1.6と4.1.7を実行します。 </li><li>鋼の給紙トレイを取り外し、＃2（ハンドラ＃1）ハンドラにプラスチック容器の蓋を与える。プロセスの中に閉じ込め、動物の付属に留意され、ケージの側面と容器との間プラスチックのふたをスライドさせます。これは（ハンドラ＃2）次のステップをより困難になりますように、容器を密封しないでください。 </li></ol></li><li> AnesthesIA <ol><li>容器は閉じたままと誘導室に動物を輸送することを確認してください。すばやく室で動物を配置し、一つの流体運動（ハンドラ＃2）に容器蓋を取り外します。開いて、すぐに誘導室蓋を交換する（ハンドラ＃1）。 </li><li>誘導室（5 L /分）にイソフルランの流れをオンにして、無気力の兆候動物を監視し、ガス循環を促進するために誘導室から両方取り外し、チューブおよびコンテナから動物をスライドさせてすぐに、その時点で。 </li><li>ラットが完全に麻酔されると、作業面に移動し、ノーズコーン（ 図3）内に、鼻と口を配置する。それは強力なつま先のピンチに反応しないときラットは完全に麻酔をかけている。 </li><li>乾燥や擦り傷を防ぐために、動物の目に獣医のワセリン眼軟膏を置きます。コットンラットは、傷害が発生した場合、感染しやすいことができ、大きな目を持っているので、これは必須のステップです。 </li> &lt;李は&gt;注意深く監視し、一定の呼吸速度を維持し、動物の鼻が手順を通してフィッティングノーズコーンに残ることを確認してください。適切にイソフルランの流量を調整します。各動物を麻酔するために必要なイソフルランの量が変化します。 </li><li>後手順は、そのケージに動物を返し、それは完全なモビリティと胸骨横臥を取り戻すことを確認してください。 </li></ol></li></ol>皮下腫瘍形成のためのLCRT細胞の5準備 NOTE：LCRT（90％コンフルエント）のOne T-150フラスコを約2×10 7個の細胞が得られる。基本必要な細胞の総数に必要なT-150フラスコの数。必要な細胞の総数を取得し、準備し、余分な注入のために必要なものの間に失われた細胞を収容するように保証するために余分なフラスコに播種する。細胞生存率を延長することが可能な限り氷上で細胞を保管してください。 <ol><li>収穫細胞、フラスコANから吸引媒体へ1×5mlのPBSで細胞をリンスdは。 </li><li>吸引しPBSおよび細胞がフラスコ（〜2分）から解離するまでの1xトリプシンの2ミリリットルで細胞を培養する。 </li><li>穏やかに（10ミリリットルの細胞懸濁液の合計）8ミリリットル培地中の細胞を再懸濁し、細胞の塊を破壊するために上下にピペット。追加のフラスコから細胞を回収し続ける。 </li><li> 1円錐管、50ミリリットルコニカルチューブあたり約4 T-150Sにすべての細胞懸濁液をプール。 </li><li>遠心機で4℃で10分間160×gでチューブ。 </li><li>培地を吸引し、血球計数器を用いてカウント可能な範囲内に細胞密度を得た（T-150当たり10 mlのPBS）、PBS適切な容量の細胞ペレットを再懸濁する。正確な細胞数を確保するために、前に十分ピペッティングにより血球計数器をロードする細胞懸濁液を混ぜる。 </li><li>細胞の総数を計算します。 =細胞数（細胞/ ml）を回収した細胞の総数は、再懸濁の体積（ミリリットル）× </li><li>決定するすべての注射に必要な細胞懸濁液の量。実験あたり2-3余分な用量を確認します。皮下注射し、5×10 5 LCRT細胞の合計は3〜4日以内に触知可能な腫瘍を形成することになる。 必要な細胞の総数= 5×10 5細胞xの用量の総数 必要な体積の細胞懸濁液（ミリリットル）=（注入量の*和に必要な総細胞）/（回収した細胞の総数） </li><li>ピペットは、PBSを含むコニカルチューブに細胞懸濁液の量を必要とし、完全に混合する。エッペンドルフチュー​​ブに小分けし、個々の注射（100μL）。注入手順の間、氷上にチューブを維持します。 </li></ol> 6.注射注：1はしばらく他のモニター動物の呼吸速度と全身状態ながら、麻酔下で注射を行うために、2人の研究者との手順を実行します。すべての注射との新たな針のためのインスリン注射器（29 G X 1/2」、0.3ミリリットル）を使用各動物。 <ol><li>皮下注射<ol><li>動物（セクション4）を取得し、麻酔。 </li><li>バリカンを使用した注射部位を剃る。コットンラットの毛皮は厚く、注射のために滑らかな表面を得るために、鋭いトリマーが必要です。綿棒を用いて70％エタノールで注射部位を清掃し、それが先に進む前に、完全に蒸発させる。 </li><li>ゆっくりと着実に描画することによって細胞を用いた負荷シリンジ（29 G xの1/2」、0.3ミリリットル）。気泡はいくつかの力で注射器明らかフリックしている場合。気泡が上部に表示されたら、液体が針の一番上になるまで、プランジャーを押してください。 </li><li> （皮膚テンティングと呼ばれる）、注射部位の皮膚を持ち上げて、針のベベル面を上にして挿入します。針が筋肉内注射を避けるために皮膚の下に自由に動くことを確認してください。 </li><li>均等にゆっくりと注射器の内容物を排出する。針ベベル側を下に撤回。 </li></ol></li><li>腫瘍内注射<ol><li>キャプチャ動物（セクション4）を麻酔dは。 </li><li>綿棒を用いて70％エタノールで注射部位を清掃し、それが先に進む前に、完全に蒸発させる。 </li><li>直立位置に針を保持しながら、ゆっくりと着実に描画することでウイルス接種による負荷シリンジ（29 Gは0.3ミリリットル、「1/2 X）。気泡はいくつかの力で注射器明らかフリックしている場合。液体は針の一番上になるまで、気泡は、プランジャーから、上部プッシュでたら。 </li><li>腫瘍に針のベベル側を挿入し、部分的に腫瘍の裂傷を防止するために、各移動前の針を引き抜く、ファン状に針を移動させながら均一にゆっくりと注射器の内容物を放出する。針ベベル側を下に撤回。 注：皮下LCRTの腫瘍は5-7日間で約100ミリメートル3に到達する、急速に成長している。さらに、壊死性および出血性センターは、多くの場合、数日以内に腫瘍の表面に形成し、CAが必要ですreful監視します（ 図4）。 </li></ol></li><li>腹腔内注射<ol><li>動物（セクション4）を取得し、麻酔。 </li><li>綿棒を用いて70％エタノールで注射部位を清掃し、それが先に進む前に、完全に蒸発させる。 </li><li>ゆっくりと着実に策定による薬物と負荷シリンジ（29 Gは0.3ミリリットル、「1/2 X）。気泡はいくつかの力で注射器明らかフリックしている場合。液体は針の一番上になるまで、気泡は、プランジャーから、上部プッシュでたら。 </li><li>腹部の右下腹部に針を挿入します。血液や糞を吸引していないことを確認するために戻ってプランジャーを引っ張る、これは針の不正確な配置を示している。この問題が発生した場合は、針を撤回し、新しい注射器を準備します。針が正確に置かれたとき、均一にゆっくりと注射器の内容物を放出する。 </li></ol></li></ol> 7.腫瘍切除および剖検<ol><li>アルを収集し、きれいに動物の安楽死の前に70％エタノールリットルツール。 </li><li>所望の方法によって、動物を安楽死させる、CO 2吸入（5〜10分間2リットル/分）が推奨されます。身体状態の異常のために動物を調べます。 </li><li>解剖ボードに背側横臥位で動物を置き、70％エタノールで動物を清掃してください。 </li><li>下腹部の皮膚を持ち上げるためにピンセットを使用してください。はさみを使って皮膚や筋肉を切断し、動物の長さ（あごに肛門）を実行して、内側切開する。 </li><li>心臓や肺を露出させるために2カット、1横方向に胸郭の側面までと胸骨全体の1にすることによって胸郭をカット。すべての転移27,29のために肺のローブを調べます。 </li><li>異常のためにすべての臓器を調べ、色、大きさ、および一貫性の変化を記録する。必要に応じて、内部組織を調べるためにメスで臓器を切開する。具体的には、肝臓、腎臓、脾臓、および消化管を検査。 </li><li>転移および拡大27,29のためのリンパ節を検査します。 </li><li>腫瘍を収集するには、脇腹切開の上に、皮膚がピンセットで身体から引き離さすることができるように、腫瘍の下に作る。しっかりとピンセットで皮膚を保持しながら、慎重に腫瘍及び真皮（ 図5）との間で切断することにより、腫瘍を除去するためにメスを使用しています。 </li><li>すぐに10％中性緩衝ホルマリンのラベル容器に腫瘍を配置。 </li><li>腫瘍の大きさに応じて、組織学的分析（ 図6）のために切片を作製する前に固定するための1~2日（≤2mmの小）または5-6日間（大&gt; 2mmの）を可能にする。 </li></ol>

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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+ICP0-Null+HSV-1+and+interferon+signaling+defects+in+the+effective+treatment+of+breast+adenocarcinoma.">The role of ICP0-Null HSV-1 and interferon signaling defects in the effective treatment of breast adenocarcinoma.</a> Mol Ther. 12 (6), 1101-1110 (2005).</li><li>Papp, Z., Middleton, D. M., Mittal, S. K., Babiuk, L. A., Baca-Estrada, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucosal+immunization+with+recombinant+adenoviruses:+induction+of+immunity+and+protection+of+cotton+rats+against+respiratory+bovine+herpesvirus+type+1+infection.">Mucosal immunization with recombinant adenoviruses: induction of immunity and protection of cotton rats against respiratory bovine herpesvirus type 1 infection.</a> J Gen Virol. 78 (11), 2933-2943 (1997).</li><li>Papp, Z., Babiuk, L. A., Baca-Estrada, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+pre-existing+adenovirus-specific+immunity+on+immune+responses+induced+by+recombinant+adenovirus+expressing+glycoprotein+D+of+bovine+herpesvirus+type+1.">The effect of pre-existing adenovirus-specific immunity on immune responses induced by recombinant adenovirus expressing glycoprotein D of bovine herpesvirus type 1.</a> Vaccine. 17 (7-8), 933-943 (1999).</li><li>Mittal, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+systemic+and+mucosal+immune+responses+in+cotton+rats+immunized+with+human+adenovirus+type+5+recombinants+expressing+the+full+and+truncated+forms+of+bovine+herpesvirus+type+1+glycoprotein+gD.">Induction of systemic and mucosal immune responses in cotton rats immunized with human adenovirus type 5 recombinants expressing the full and truncated forms of bovine herpesvirus type 1 glycoprotein gD.</a> Virology. 222 (2), 299-309 (1996).</li><li>Steel, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Syngeneic+Cotton+Rat+Cancer+Model+for+Replicating+Adenoviral+Vectors.">Syngeneic Cotton Rat Cancer Model for Replicating Adenoviral Vectors.</a> Molecular Therapy. 13 (1), 123 (2006).</li><li>Toth, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cotton+rat+tumor+model+for+the+evaluation+of+oncolytic+adenoviruses.">Cotton rat tumor model for the evaluation of oncolytic adenoviruses.</a> Hum Gene Ther. 16 (1), 139-146 (2005).</li><li>Toth, K., Spencer, J. F., Wold, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunocompetent,+semi-permissive+cotton+rat+tumor+model+for+the+evaluation+of+oncolytic+adenoviruses.">Immunocompetent, semi-permissive cotton rat tumor model for the evaluation of oncolytic adenoviruses.</a> Methods Mol Med. 130, 157-168 (2007).</li><li>Steel, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunocompetent+syngeneic+cotton+rat+tumor+models+for+the+assessment+of+replication-competent+oncolytic+adenovirus.">Immunocompetent syngeneic cotton rat tumor models for the assessment of replication-competent oncolytic adenovirus.</a> Virology. 369 (1), 131-142 (2007).</li><li>Workenhe, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunogenic+HSV-mediated+oncolysis+shapes+the+antitumor+immune+response+and+contributes+to+therapeutic+efficacy.">Immunogenic HSV-mediated oncolysis shapes the antitumor immune response and contributes to therapeutic efficacy.</a> Mol Ther. 22 (1), 123-131 (2014).</li><li>Sobol, P. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+antiviral+immunity+is+a+determinant+of+the+therapeutic+success+of+oncolytic+virotherapy.">Adaptive antiviral immunity is a determinant of the therapeutic success of oncolytic virotherapy.</a> Mol Ther. 19 (2), 335-344 (2011).</li><li>Prince, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Cotton+Rat+in+Biomedical+Research.">The Cotton Rat in Biomedical Research.</a> Animal Welfare Information Center Newsletter. 5 (2), (1994).</li></ol>

The authors acknowledge there are no financial conflicts of interest related to this research.

Cotton rats are highly excitable and have a strong flight response. Therefore, special care should be taken to minimize any undue stress on the animal. The cage setup described will allow for safe and easy capture of the animals, with the placement of the enrichment tube being of the utmost importance. When setting up cages, ensure that the enrichment tubes meet the size and shape requirements, and are placed in proper orientation in the cage. It is also important to ensure that any technicians who might be aiding in ani...

腫瘍溶解性ウイルス（OV）を選択的に、正常細胞と腫瘍細胞1,2間の生化学的相違を利用して、腫瘍細胞中で複製する。天然に存在する野生型ウイルスと呼ばれる選択的な腫瘍崩壊を達成するために、突然変異を必要としないもの、および選択的な腫瘍崩壊を達成するように操作されなければならないもの：OVSの2種類がある。所定の腫瘍タイプ内の変異のコレクションは、OV 2のために、正常な細胞上の選択的な増殖の利点の性質を決定する。 OVSを使用することの安全性および利点は、臨床試験3-7に実証されている。腫瘍溶解性ウイルス療法の分野における進歩にもかかわらず、より良いモデルはOVSの抗腫瘍効果を評価するために必要であることを示唆し、前臨床及び臨床結果との間に隙間が存在する。 ウシヘルペスウイルス1型（BHV-1）、 ヘルペスウイルス科ファミリーのメンバー、及びAlphaherpesviridaeサブファミリーである。 BHV-1のiniti悪い風邪に似た症状が8,9、多種多様な顕在牛のATEウシ呼吸器病、。 BHV-1は、ヘパラン硫酸とネクチン1 10として、HSV-1によって使用される添付ファイルとエントリの受容体と結合する。しかし、ネクチン2 10の代わりに、CD155に特異的に結合する。 BHV-1は、それが効率的に入力して、正常および形質転換マウス細胞-3,4,10-で複製を開始することができないような非常に狭い宿主範囲を有している。これは、従来のマウスモデルの使用には問題となる。 BHV-1の腫瘍崩壊能力は、 インビトロ 11,12 に実証されている。 BHV-1で複製を開始し、セル11,12を開始乳癌細胞および乳癌を含む組織学的起源の様々なヒト腫瘍細胞を死滅させることが示されている。しかし、BHV-1の抗腫瘍容量は、免疫担当ホストのコンテキスト内で、生体内で評価されなければならない。 のためのヒトアデノウイルス（AD）、57の血清型が同定された最も一般的にヒトにおける呼吸器疾患の原因がある。腫瘍溶解性Adベクターは、いくつかの臨床試験13-15に進出して、それらの抗腫瘍効果について評価されている。有望な前臨床データにもかかわらず、臨床結果は期待の短い下落している。それらはウイルス16,17に対する免疫応答を減衰さ呈するものの、ヒト腫瘍異種移植片モデルは、典型的には、Adベクターの抗腫瘍効果を研究するために使用される。さらに、同系マウスモデルは、広告感染に対する非許容である17,18非現実的なこれらのモデルを使用して、ホストの免疫応答の評価を行う。 宿主の免疫系は、腫瘍細胞死を誘発する19 OVSそれによって最も影響力のあるメカニズムとして同定されている。寛容および非寛容化腫瘍関連抗原（TAA）モデル間の抗腫瘍応答が異なると大幅にOV療法の成功に影響を与えることができる。 HSV-1 OV KM100（ICP0 N2121814 20 における VP16）20,21は、マウスポリオーマミドルT抗原乳癌モデル22における担癌マウスの80％において腫瘍退縮を誘発した。しかし、HER-2 / neuのモデルにおいて、KM100の抗腫瘍効果は、トランスジェニック同系マウス腫瘍静止状態で20％の完全な退行の間HER2寛容化マウスを変える。一緒にこれらのデータは、完全に最高の完全に治療の成功を決定する機能を理解するために、ヒトの免疫風景を再現動物モデルを用いてOVSを評価することの重要性を強調。 （5で検討される）南北アメリカ原産のコットンラット（Sigmodon紫檀 ） は 、最も一般的にRSウイルス感染症のモデルとして使用されます。それらは6,23複雑ウシ呼吸器疾患に関連する病理を再現するように、コットンラットは、抗BHV-1ワクチン接種の研究で使用されている。コットンラットのさらに、BHV-1感染持続的な粘膜および全身の免疫応答6,23-25 ​​を誘導する、免疫原性である。細胞株はそれぞれ26、自発的な線維肉腫および骨肉腫乳腺（LCRT）のと骨（CCRTとVCRT）に由来している。コットンラットは、それらが広告感染に対して感受性であり、ヒトの27-29と同様の病理を示すように腫瘍溶解性Adベクターのインビボでの有効性を評価するために使用されてきた。 OVSの前臨床評価のための免疫不全のモデルの使用だけでなく、治療に対する臨床反応の少ない指標であるが、彼 ​​らは考慮に腫瘍溶解性ウイルス療法30,31における免疫系の役割を取ることができない。したがって、同系および乳癌および骨肉腫の腫瘍寛容コットンラットモデルは、従来のマウスモデルを用いて研究することができないようなBHV-1とOVS、およびAdの前臨床効力を評価するの関連モデルである。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Material/Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog #</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965-092</td>
			<td>May use any brand&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X Phosphate Buffered Saline&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Can prepare in lab, filter to sterilize</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 mM L-glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030164</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100x Antibiotic-Antimycotic&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-062</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Quality Biological Inc.</td>
			<td>110-001-101HI</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-150cm2 tissue culture flask</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-80</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X TypLE Express</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12604-013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well cell culture plate, flat bottom</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772-29</td>
			<td>May use any brand, must be tissue culture treated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>alamarBlue</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>DAL1025</td>
			<td>May use an alternative reagent for determination of cell viability</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8640 Teklad 22/5 Rodent diet</td>
			<td>Harlan&#160;</td>
			<td>8640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/8&#8221; corncob rodent bedding</td>
			<td>Harlan</td>
			<td>7092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nestlets</td>
			<td>Ancare</td>
			<td>-</td>
			<td>Made of pulped virgin cotton fiber, dust-free and autoclavable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-432-22</td>
			<td>May use any brand, must be sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane USP, 99.9 %, inhalation anesthetic</td>
			<td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td>
			<td>M60302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Can prepare in lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 % Neutral Buffered Formalin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name of Material/Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog #</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NAPCO NapFlow 1200 Class II A/B3 Biosafety Microbiological Safety Cabinet (cell culture hood)</td>
			<td>NAPCO</td>
			<td>Model used not currently available</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Fisher Scientific Precision Heated Water Bath</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Model used not currently available&#160;</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reichert Bright-line Hemacytometer</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z359629</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Typhoon Trio BioAnalyzer&#160;</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>Model used not currently available&#160;</td>
			<td>May use any fluorescence plate reader</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tecan Safire2 Multi-detection Microplate Reader</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>Model used not currently available&#160;</td>
			<td>May use any fluorescence plate reader</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Allegra 6R benchtop centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>366816</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table Top Anaesthesia machine</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>Model used not currently available&#160;</td>
			<td>May use any brand, must be portable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wahl Peanut Mini Clippers</td>
			<td>Wahl</td>
			<td></td>
			<td>May use any brand of small clippers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringes 29 G x 1/2&#39;, 0.3 mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>329464</td>
			<td>May use any brand. Insulin syringes are recommended as they make injections easier through the rat&#8217;s tough skin.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>MedPro</td>
			<td>018-425</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>8940</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Tissue Forceps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-812-41</td>
			<td>May use any brand</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

handling of the cotton rat in studies for the pre-clinical evaluation of oncolytic viruses

Oncolytic viruses are a novel anticancer therapy with the ability to target tumor cells, while leaving healthy cells intact. For this strategy to be successful, recent studies have shown that involvement of the host immune system is essential. Therefore, oncolytic virotherapy should be evaluated within the context of an immunocompetent model. Furthermore, the study of antitumor therapies in tolerized animal models may better recapitulate results seen in clinical trials. Cotton rats, commonly used to study respiratory viruses, are an attractive model to study oncolytic virotherapy as syngeneic models of mammary carcinoma and osteosarcoma are well established. However, there is a lack of published information on the proper handling procedure for these highly excitable rodents. The handling and capture approach outlined minimizes animal stress to facilitate experimentation. This technique hinges upon the ability of the researcher to keep calm during handling and perform procedures in a timely fashion. Finally, we describe how to prepare cotton rat mammary tumor cells for consistent subcutaneous tumor formation, and how to perform intratumoral and intraperitoneal injections. These methods can be applied to a wide range of studies furthering the development of the cotton rat as a relevant pre-clinical model to study antitumor therapy.

によるコットンラットの非常に興奮性の性質を熟知していると、前臨床動物モデルとしての使用に容易になり、動物のストレスを低減するように最適化手順を利用する。適切な処理技術の使用はまた、研究者へのリスクを最小限にする。 コットンラットを使用したとき、それは穏やかな滞在することが不可欠です。ラットは非常に興奮性であり、それらのケージを脱出?...

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Handling of the Cotton Rat in Studies for the Pre-clinical Evaluation of Oncolytic Viruses

Cotton rats are extremely excitable and have a strong flight-or-fight response. A handling method optimized to reduce the stress of the animals is described which will make cotton rats more accessible as a preclinical model.

腫瘍溶解性ウイルスの前臨床評価のための研究のコットンラットの取扱い

Oncolytic viruses are a novel anticancer therapy with the ability to target tumor cells, while leaving healthy cells intact.  For this strategy to be ...

handling-cotton-rat-studies-for-pre-clinical-evaluation-oncolytic

Research

JoVE Journal

Medicine

9.2K ビュー.  McMaster University. Cotton rats are extremely excitable and have a strong flight-or-fight response. A handling method optimized to reduce the stress of the animals is described which will make cotton rats more accessible as a preclinical model. 

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Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness of a variety of oncolytic platforms including HSV, Reovirus, and Vaccinia OVs as treatment for cancer are currently underway2-5. One key characteristic of oncolytic viruses is that they can be genetically modified to express reporter transgenes which makes it possible to visualize the infection of tissues by microscopy or bio-luminescence imaging6,7. This offers a unique advantage since it is possible to infect tissues from patients ex vivo prior to therapy in order to ascertain the likelihood of successful oncolytic virotherapy8. To this end, it is critical to appropriately sample tissue to compensate for tissue heterogeneity and assess tissue viability, particularly prior to infection9. It is also important to follow viral replication using reporter transgenes if expressed by the oncolytic platform as well as by direct titration of tissues following homogenization in order to discriminate between abortive and productive infection. The object of this protocol is to address these issues and herein describes 1. The sampling and preparation of tumor tissue for cell culture 2. The assessment of tissue viability using the metabolic dye alamar blue 3. Ex vivo infection of cultured tissues with vaccinia virus expressing either GFP or firefly luciferase 4. Detection of transgene expression by fluorescence microscopy or using an In Vivo Imaging System (IVIS) 5. Quantification of virus by plaque assay. This comprehensive method presents several advantages including ease of tissue processing, compensation for tissue heterogeneity, control of tissue viability, and discrimination between abortive infection and bone fide viral replication.

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic viruses are promising for cancer therapeutics. The ability to ascertain the infectability of live tissue specimens obtained from patients prior to treatment is a unique advantage of this therapeutic approach. This protocol describes how to process tissues for ex vivo infection with oncolytic virus and subsequent viral quantification.

腫瘍溶解性ウイルスと生きている組織のex vivoでの感染

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness ...

医学

The Use of Pharmacological-challenge fMRI in Pre-clinical Research: Application to the 5-HT System

Pharmacological MRI (phMRI) is a new and promising method to study the effects of substances on brain function that can ultimately be used to unravel underlying neurobiological mechanisms behind drug action and neurotransmitter-related disorders, such as depression and ADHD. Like most of the imaging methods (PET, SPECT, CT) it represents a progress in the investigation of brain disorders and the related function of neurotransmitter pathways in a non-invasive way with respect of the overall neuronal connectivity. Moreover it also provides the ideal tool for translation to clinical investigations. MRI, while still behind in molecular imaging strategies compared to PET and SPECT, has the great advantage to have a high spatial resolution and no need for the injection of a contrast-agent or radio-labeled molecules, thereby avoiding the repetitive exposure to ionizing radiations. Functional MRI (fMRI) is extensively used in research and clinical setting, where it is generally combined with a psycho-motor task. phMRI is an adaptation of fMRI enabling the investigation of a specific neurotransmitter system, such as serotonin (5-HT), under physiological or pathological conditions following activation via administration of a specific challenging drug.
The aim of the method described here is to assess brain 5-HT function in free-breathing animals. By challenging the 5-HT system while simultaneously acquiring functional MR images over time, the response of the brain to this challenge can be visualized. Several studies in animals have already demonstrated that drug-induced increases in extracellular levels of e.g. 5-HT (releasing agents, selective re-uptake blockers, etc) evoke region-specific changes in blood oxygenation level dependent (BOLD) MRI signals (signal due to a change of the oxygenated/deoxygenated hemoglobin levels occurring during brain activation through an increase of the blood supply to supply the oxygen and glucose to the demanding neurons) providing an index of neurotransmitter function. It has also been shown that these effects can be reversed by treatments that decrease 5-HT availability16,13,18,7. In adult rats, BOLD signal changes following acute SSRI administration have been described in several 5-HT related brain regions, i.e. cortical areas, hippocampus, hypothalamus and thalamus9,16,15. Stimulation of the 5-HT system and its response to this challenge can be thus used as a measure of its function in both animals and humans2,11.

The goal of this technique is to assess serotonin (5-HT) neurotransmitter function in the live and free-breathing animal with pharmacological magnetic resonance imaging (phMRI) and an intravenous challenge with a selective serotonin reuptake inhibitor (SSRI), fluoxetine.

前臨床研究における薬理学的チャレンジのfMRIの利用：5-HTシステムへの応用

Pharmacological MRI (phMRI) is a new and promising method to study the effects of substances on brain function that can ultimately be used to unravel ...

Pre-clinical Evaluation of Tyrosine Kinase Inhibitors for Treatment of Acute Leukemia

Receptor tyrosine kinases have been implicated in the development and progression of many cancers, including both leukemia and solid tumors, and are attractive druggable therapeutic targets. Here we describe an efficient four-step strategy for pre-clinical evaluation of tyrosine kinase inhibitors (TKIs) in the treatment of acute leukemia. Initially, western blot analysis is used to confirm target inhibition in cultured leukemia cells. Functional activity is then evaluated using clonogenic assays in methylcellulose or soft agar cultures. Experimental compounds that demonstrate activity in cell culture assays are evaluated in vivo using NOD-SCID-gamma (NSG) mice transplanted orthotopically with human leukemia cell lines. Initial in vivo pharmacodynamic studies evaluate target inhibition in leukemic blasts isolated from the bone marrow. This approach is used to determine the dose and schedule of administration required for effective target inhibition. Subsequent studies evaluate the efficacy of the TKIs in vivo using luciferase expressing leukemia cells, thereby allowing for non-invasive bioluminescent monitoring of leukemia burden and assessment of therapeutic response using an in vivo bioluminescence imaging system. This strategy has been effective for evaluation of TKIs in vitro and in vivo and can be applied for identification of molecularly-targeted agents with therapeutic potential or for direct comparison and prioritization of multiple compounds.

Receptor tyrosine kinases are ectopically expressed in many cancers and have been identified as therapeutic targets in acute leukemia. This manuscript describes an efficient strategy for pre-clinical evaluation of tyrosine kinase inhibitors for the treatment of acute leukemia.

急性白血病の治療のためのチロシンキナーゼ阻害剤の前臨床評価

Receptor tyrosine kinases have been implicated in the development and progression of many cancers, including both leukemia and solid tumors, and are ...

Transarterial Administration of Oncolytic Viruses for Locoregional Therapy of Orthotopic HCC in Rats

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a disease with limited treatment options and poor prognosis. In recent years, oncolytic virotherapies have proven themselves to be potentially powerful tools to fight malignancy. Due to the unique dual blood supply in the liver, it is possible to apply therapies locally to orthotopic liver tumors, which are predominantly fed by arterial blood flow. We have previously demonstrated that hepatic arterial delivery of oncolytic viruses results in safe and efficient transduction efficiency of multifocal HCC lesions, resulting in significant prolongation of survival in immune competent rats. This procedure closely mimics the application of transarterial embolization in patients, which is the standard palliative care provided to many HCC patients. The ability to administer tumor therapies through the hepatic artery in rats allows for a highly sophisticated preclinical model for evaluating novel viral vectors under development. Here we describe the detailed protocol for microdissection of the hepatic artery for infusion of oncolytic virus vectors to treat orthotopic HCC.

Oncolytic virotherapies are under development as novel therapeutics for the treatment of hepatocellular carcinoma (HCC). Here we describe a method for locoregional therapy of HCC via hepatic arterial administration of oncolytic virus.

ラットにおける同所性肝細胞癌の局所領域治療のための腫瘍溶解性ウイルスのTransarterial管理

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a disease with limited treatment options and poor prognosis.  In recent years, oncolytic virotherapies have proven ...

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information about this disease. The human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model provides a useful alternative approach for understanding the specific interactions between genetically and molecularly altered tumor cells, their organ microenvironment, and for evaluation of efficacy of therapeutic regimens. This is a well characterized model designed to study the molecular events of primary tumor development and it recapitulates the early events in the metastatic cascade prior to embolism and entry of tumor cells into the circulation. Thus it allows elucidation of molecular mechanisms underlying the initial phase of metastatic disease. In addition, this model can annotate drug targets of clinical relevance and is a valuable tool to study prostate cancer progression. In this manuscript we describe a detailed procedure to establish a human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model.

Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

ヒト前立腺癌の前臨床同所性マウスモデル

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Use of a Low-flow Digital Anesthesia System for Mice and Rats

A traditional vaporizer depends on flowing gas and atmospheric pressure for passive anesthetic vaporization. Newly developed direct injection vaporizers utilize a syringe pump to directly administer volatile anesthetics into a gas stream. Unlike a traditional vaporizer, it can be used at very low flow rates, making it ideal for use on mice and rats. 
The equipment's capability to use low flow rates could result in a substantial cost savings due to the reduced need for anesthetic agents, compressed gas, and charcoal scavenging filters1. A lower flow rate means less waste of anesthetic gas and likely reduces the risk of anesthetic exposure to laboratory personnel. Thus, the high levels of precision and safety associated with direct injection vaporizers, along with a reduced need for anesthetic agents, compressed gas, and charcoal filters are beneficial for research requiring small animal anesthesia. 
The goal of this protocol is to demonstrate the use of a syringe-driven direct injection vaporizer as part of a digital, low-flow anesthesia system. The direct injection vaporizer is capable of accurately delivering anesthesia at very low flow rates compared to a traditional vaporizer, making it a promising alternative for controlled gas anesthetic delivery to rodents.

Here, we present a protocol to more safely and efficiently administer anesthetic gas to mice using a digital, low flow anesthesia system utilizing a syringe-driven direct injection vaporizer.

マウスやラットのための低フローデジタル麻酔システムの利用

A traditional vaporizer depends on flowing gas and atmospheric pressure for passive anesthetic vaporization. Newly developed direct injection vaporizers ...

Analyzing Beneficial Effects of Nutritional Supplements on Intestinal Epithelial Barrier Functions During Experimental Colitis

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause severe problems, such as abdominal cramping, bloody diarrhea, and weight loss, in affected individuals. Unfortunately, there is no cure yet, and treatments only aim to alleviate symptoms. Current treatments include anti-inflammatory and immunosuppressive drugs that may cause severe side effects. This warrants the search for alternative treatment options, such as nutritional supplements, that do not cause side effects. Before their application in clinical studies, such compounds must be rigorously tested for effectiveness and security in animal models. A reliable experimental model is the dextran sulfate sodium (DSS) colitis model in mice, which reproduces many of the clinical signs of ulcerative colitis in humans. We recently applied this model to test the beneficial effects of a nutritional supplement containing vitamins C and E, L-arginine, and &#969;3-polyunsaturated fatty acids (PUFA). We analyzed various disease parameters and found that this supplement was able to ameliorate edema formation, tissue damage, leukocyte infiltration, oxidative stress, and the production of pro-inflammatory cytokines, leading to an overall improvement in the disease activity index. In this article, we explain in detail the correct application of nutritional supplements using the DSS colitis model in C57Bl/6 mice, as well as how disease parameters such as histology, oxidative stress, and inflammation are assessed. Analyzing the beneficial effects of different diet supplements may then eventually open new avenues for the development of alternative treatment strategies that alleviate IBD symptoms and/or that prolong the phases of remission without causing severe side effects.

Current treatments of inflammatory bowel diseases (IBD) aim at alleviating disease symptoms but may cause severe side effects. Thus, alternative strategies are being investigated in animal colitis models. Here, we explain how the beneficial effects of diet supplements on clinical IBD signs are analyzed in such a colitis model.

実験的大腸炎の間、腸上皮バリア機能に栄養補助食品の有益な効果を分析

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause ...

In Vivo Evaluation of the Mechanical and Viscoelastic Properties of the Rat Tongue

The tongue is a highly innervated and vascularized muscle hydrostat on the floor of the mouth of most vertebrates. Its primary functions include supporting mastication and deglutition, as well as taste-sensing and phonetics. Accordingly, the strength and volume of the tongue can impact the ability of vertebrates to accomplish basic activities such as feeding, communicating, and breathing. Human patients with sleep apnea have enlarged tongues, characterized by reduced muscle tone and increased intramuscular fat that can be visualized and quantified by magnetic resonance imaging (MRI). The abilities to measure force generation and viscoelastic properties of the tongue constitute important tools for obtaining functional information to correlate with imaging data. Here, we present techniques for measuring tongue force production in anesthetized Zucker rats via electrical stimulation of the hypoglossal nerves and for determining the viscoelastic properties of the tongue by applying passive Lissajous force/deformation curves.

In Vivo Evaluation of the Mechanical and Viscoelastic Properties of the Rat Tongue

We describe a surgical procedure in an anesthetized rat model for determining the muscle tone and viscoelastic properties of the tongue. The procedure involves specific stimulation of the hypoglossal nerves and application of passive Lissajous force/deformation curves to the muscle.

ラット舌の機械的および粘弾性的特性のインビボ評価

The tongue is a highly innervated and vascularized muscle hydrostat on the floor of the mouth of most vertebrates. Its primary functions include ...

A Pre-Clinical Porcine Model of Orthotopic Heart Transplantation

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart failure. Multiple small-animal models of heart transplantation have been used to study the acute and long-term effects of novel therapies. However, few are tested and demonstrated success in clinical trials. It is of critical importance to evaluate new therapies in a clinically relevant large-animal model for efficient and reliable translation of basic studies&#39;&#160;findings. Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and previously used to investigate novel cardioprotective strategies. This procedure focuses on acute ischemia-reperfusion injury and is a reliable method to investigate novel interventions which have been tested and validated in smaller experimental models, such as the murine model. We demonstrate its usefulness in assessing cardiac performance during the early post-transplantation period and other potential possibilities enabled by the model.

Here, we describe a pre-clinical large-animal (porcine) model of orthotopic heart transplantation that has been firmly established and utilized to investigate novel cardioprotective strategies.

オルソトピック心臓移植の前臨床ブタモデル

Fifty-years following the first successful report, cardiac transplantation remains the gold-standard treatment for eligible patients with advanced heart ...

Pre-clinical Model of Cardiac Donation after Circulatory Death

Cardiac transplantation demand is on the rise; nevertheless, organ availability is limited due to a paucity of suitable donors. Organ donation after circulatory death (DCD) is a solution to address this limited availability, but due to a period of prolonged warm ischemia and the risk of tissue injury, its routine use in cardiac transplantation is seldom seen. In this manuscript we provide a detailed protocol closely mimicking current clinical practices in the context of DCD with continuous monitoring of heart function, allowing for the evaluation of novel cardioprotective strategies and interventions to decrease ischemia-reperfusion injury.
In this model, the DCD protocol is initiated in anesthetized Lewis rats by stopping ventilation to induce circulatory death. When systolic blood pressure drops below 30 mmHg, the warm ischemic time is initiated. After a pre-set warm ischemic period, hearts are flushed with a normothermic cardioplegic solution, procured, and mounted onto a Langendorff ex vivo heart perfusion system. Following 10 min of initial reperfusion and stabilization, cardiac reconditioning is continuously evaluated for 60 min using intraventricular pressure monitoring. A heart injury is assessed by measuring cardiac troponin T and the infarct size is quantified by histological staining. The warm ischemic time can be modulated and tailored to develop the desired amount of structural and functional damage. This simple protocol allows for the evaluation of different cardioprotective conditioning strategies introduced at the moment of cardioplegia, initial reperfusion and/or during ex vivo perfusion. Findings obtained from this protocol can be reproduced in large models, facilitating clinical translation.

This protocol shows a simple and flexible approach for the evaluation of new conditioning agents or strategies to increase the feasibility of cardiac donation after circulatory death.

循環死後の心臓寄付の前臨床モデル

Cardiac transplantation demand is on the rise; nevertheless, organ availability is limited due to a paucity of suitable donors. Organ donation after ...