The authors would like to acknowledge contributions from the entire Gereau Lab for manuscript editing. This work is supported by NINDS funds 1F31NS078852 to DSB and NINDS fund NS42595 to RWG.

すべてのマウスプロトコルは、健康のガイドラインの国立研究所に従ったとワシントン大学医学部の動物実験委員会（ミズーリ州セントルイス）によって承認された。 1.テストプレートとエンクロージャの準備<ol><li>ガラス表面をきれい。 </li><li>実験用テープでガラス板の中央に表面にT型フィラメント熱電対プローブを固定する。 </li><li>プレートの中央に沿って一列にガラス板上の動物のエンクロージャを置きます。 </li><li>中央動物囲いを通して熱電対プローブを通し、データロガーに接続します。自動シャットダウン機能を無効化しながら、上のデータロガーの電源を入れ、付属のケーブルでコンピュータにデータロガーを添付。 <ol><li>実験中のプレート温度を記録する場合は、プレート温度の記録を開始するために、データロガーソフトウェアを開きます。 </li><li>必要であれば、再ソフトウェアを調整コー​​ドプレート温度を一度毎秒。 </li><li>熱データロガーでパッケージソフトを使用して温度の記録を開始。 </li></ol></li><li>マウスとの間の視覚的相互作用を防止するために、黒挿入物を有する筐体を区切ります。 </li><li>位置は、エンクロージャの下面が快適着座位置から見えるようにガラスの下に反映しています。 </li></ol> 2.温暖化/ガラス板を冷却<ol><li>温め、水、湿潤氷またはドライアイスアルミニウムボックスを充填し、ガラス板上に適切に配置する（ドライアイスを充填したアルミ箔のパケットは、ガラスを冷却するために使用することができ、 図1）2。 <ol><li> 30℃でのテストでは、離れて、動物のエンクロージャ（ 図2B）2から「約0.25」アルミボックスを配置します。 <ol><li>ガラス板の両側に加熱された水循環器を設定する。 45にサーキュレータを設定 - 60°C、と私たちお湯（ 図1C）2の安定した流れでアルミボックスを埋めるために、それをメール。 </li><li>サーキュレータを配置し、アルミニウムボックスからお湯を直接戻ってそれぞれの側（ 図1C）上のサーキュレータの貯水池に排出すること2。 </li></ol></li><li> RTでのテストのために、（ 図2）2空のボックスを残す。 </li><li> 17℃でのテストでは、いずれかの側に離れて、動物のエンクロージャから&#39;&#39; 0.25約の箱を置き、湿った氷（ 図2）2で満たす。 </li><li> 12℃でのテストでは、離れて両側の筐体から&#39;&#39; 1.25約の箱を置き、ドライアイス（ 図2）2で満たす。 </li><li> （ 図2）5℃でのテストでは、約0.25 &#39;&#39;離れていずれかの側の筐体からのボックスを配置し、ドライアイスで埋める2。<ol><li>ドライアイスを用いてガラスを冷却すると、部屋中のCO 2の蓄積を防止するのに十分な換気があることを確認してください。 </li></ol></li></ol></li><li>所望の温度範囲に到達するためにガラスのを待ちます。 </li><li>プレート上のエンクロージャにマウスを追加します。 注記：白色雑音発生器は、ノイズ障害を減少させるために使用することができる。 </li><li>マウスが順応するのを待ちます。 注：私たちの施設では、これはおよそ2.5時間かかりますが、これは、動物の収容及び取扱い条件に基づいて大幅に異なる場合があります。 </li><li>ボックスは温め水、湿った氷、またはドライアイスの完全に保たれていることを確実にすることにより、所望の温度範囲でガラスを維持します。 注：私たちの装置では箱が氷おおよそすべての90分を再充填する必要がある。 注：17℃の条件では、それは氷でそれを再充填する前に排水孔を通じてアルミボックスからほとんどの水を空にしておくと便利です。これは、より良い温度を安定し、PRしますイベントのオーバーフロー 注：ドライアイスの正確な量は季節変化するが、一般に温度を一定に維持するボックスの全長に沿って完全以上のボックスを¼保ちます。 </li></ol> 3.固定温度でのマウスのテスト<ol><li>行動の部屋の外では、ドライアイスの完全な約半分のアイスバケツを埋める。 </li><li>ハンマーやマレットを使用して、微粉末にドライアイスを粉砕。 注：バケツを過剰充填することは、困難な完全に粉末にドライアイスを粉砕するようになります。 </li><li>ストレートカミソリの刃やはさみを使って、3ミリリットル注射器をトップを遮断。 </li><li> 21 G針を使用して、シリンジ（6穴の合計）の両側に3つの穴を突く。 注：これらの穴は、ドライアイスを圧縮しながら昇華により発生する圧力が減少します。カットオフ注射器は、複数の実験のために再利用することができる。 </li><li>注射器、ドライアイス粉末、および行動部屋に手持ち式ストップウォッチを取る。 </li><li>ドライアイス粉末の半分シリンジ室を埋める。フラットオブジェクトに対して注射器の切断端を持ち、しっかりとプランジャーを用いた粉末を圧縮する。注意してください;プラスチック製のプランジャーは、曲げや圧力から破損する可能性があります。このような場合は、新しい注射器からプランジャーを交換してください。 </li><li>注射器の端を超えて圧縮されたドライアイスペレットの先端を拡張します。 </li><li>安静時に完全にある試験マウス。 <ol><li> 30℃、23℃、17℃では、すべての4ガラス上の足としないを持って試験マウスは動くが、19完全に眠っていない。 </li><li> 12℃、5℃で、移動やジャンプ2足または4足としない上に試験マウス。 </li></ol></li><li>マウスの後肢（ 図1A）2の下にガラス面に対して平らペレットフラッシュを押して慎重にしっかり、ターゲティングのためにミラーを使用。手タイマーを起動します。 </li><li>タイマーを停止し、マウスが離れて冷却されたガラスから移動したときのペレットを削除します。 NOTE：撤退運動が垂直または水平であることができる。 <ol><li>マウスは非常に簡単に足を移動し、冷却面にそれを返す場合、マウスが離れて完全移籍するまで、タイミングと刺激を続ける。 注：私たちの研究室では、ほとんどの場合において、マウスのための20秒の最大刺激時間を使用しています。 </li></ol></li><li>各動物の各足に少なくとも3つの値が収集されるまで、このテスト手順を繰り返します。少なくとも15分までに、任意の単一の足に少なくとも7分であり、個別の連続した​​試験により、同じマウスの反対の足をテストする個別の試験。 </li><li>必要に応じて、（ 図3）1の冷却速度の違いを生成するために、ガラスの異なる厚さを使用する。 注：冷却速度が反比例ガラスの厚さと相関している。 </li></ol> 4.低温適応中にマウスのテスト注：これはガラスPLATとしてテストを可能にする別のプロトコルですeはむしろプレートが安定したとマウスが完全に寒冷環境に適応した後も、冷却される。 <ol><li>装置をセットアップするための第1節に記載されている指示に従ってください。 </li><li> RT（ 図7A）2でベースライン測定を行うためにセクション3に記載されている指示に従ってください。 </li><li>ドライアイス入りのアルミボックスを事前に冷却する。 </li><li>ベースライン引っ込め潜伏時間が測定された後、離れてエンクロージャから両側にプレート約1.25 &#39;&#39;に予め冷却ボックスを配置する（ 図7（a）は、矢印がラベル「ドライアイスを追加」）2。 </li><li>できるだけ頻繁に測定を行う、ガラス板を冷却するように測定を行う第3節に記載されている指示に従ってください。 </li></ol>

<ol>
	<li>Brenner, D. S., Golden, J. P., Gereau, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Behavioral+Assay+for+Measuring+Cold+Sensation+in+Mice.">A Novel Behavioral Assay for Measuring Cold Sensation in Mice.</a> Plos ONE. 7 (6), 8 (2012).</li><li>Brenner, D. S., Vogt, S. K., Gereau, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+to+measure+cold+adaptation+in+freely+behaving+mice.">A technique to measure cold adaptation in freely behaving mice.</a> Journal of Neuroscience Methods. , (2014).</li><li>Choi, Y., Yoon, T. W., Na, H. S., Kim, S. H., Chung, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+signs+of+ongoing+pain+and+cold+allodynia+in+a+rat+model+of+neuropathic+pain.">Behavioral signs of ongoing pain and cold allodynia in a rat model of neuropathic pain.</a> Pain. 59 (3), 369-376 (1994).</li><li>Gauchan, P., Andoh, T., Kato, A., Kuraishi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+increased+expression+of+transient+receptor+potential+melastatin+8+in+oxaliplatin-induced+cold+allodynia+in+mice.">Involvement of increased expression of transient receptor potential melastatin 8 in oxaliplatin-induced cold allodynia in mice.</a> Neuroscience letters. 458 (2), 93-95 (2009).</li><li>Carlton, S. M., Lekan, H. A., Kim, S. H., Chung, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+manifestations+of+an+experimental+model+for+peripheral+neuropathy+produced+by+spinal+nerve+ligation+in+the+primate.">Behavioral manifestations of an experimental model for peripheral neuropathy produced by spinal nerve ligation in the primate.</a> Pain. 56 (2), 155-166 (1994).</li><li>Pizziketti, R. J., Pressman, N. S., Geller, E. B., Cowan, A., Adler, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+cold+water+tail-flick:+A+novel+analgesic+test+that+distinguishes+opioid+agonists+from+mixed+agonist-antagonists.">Rat cold water tail-flick: A novel analgesic test that distinguishes opioid agonists from mixed agonist-antagonists.</a> European Journal of Pharmacology. 119 (1-2), 23-29 (1985).</li><li>Pinto-Ribeiro, F., Almeida, A., Pego, J. M., Cerqueira, J., Sousa, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+unpredictable+stress+inhibits+nociception+in+male+rats.">Chronic unpredictable stress inhibits nociception in male rats.</a> Neuroscience letters. 359 (1-2), 73-76 (2004).</li><li>Karashima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPA1+acts+as+a+cold+sensor+in+vitro+and+in+vivo.">TRPA1 acts as a cold sensor in vitro and in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (4), 1273-1278 (2009).</li><li>Knowlton, W. M., Bifolck-Fisher, A., Bautista, D. M., McKemy, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPM8,+but+not+TRPA1,+is+required+for+neural+and+behavioral+responses+to+acute+noxious+cold+temperatures+and+cold-mimetics+in+vivo.">TRPM8, but not TRPA1, is required for neural and behavioral responses to acute noxious cold temperatures and cold-mimetics in vivo.</a> Pain. 150 (2), 340-350 (2010).</li><li>Allchorne, A. J., Broom, D. C., Woolf, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+cold+pain,+cold+allodynia+and+cold+hyperalgesia+in+freely+behaving+rats.">Detection of cold pain, cold allodynia and cold hyperalgesia in freely behaving rats.</a> Molecular pain. 1, 36 (2005).</li><li>Colburn, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attenuated+cold+sensitivity+in+TRPM8+null+mice.">Attenuated cold sensitivity in TRPM8 null mice.</a> Neuron. 54 (3), 379-386 (2007).</li><li>Dhaka, A., Murray, A. N., Mathur, J., Earley, T. J., Petrus, M. J., Patapoutian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPM8+is+required+for+cold+sensation+in+mice.">TRPM8 is required for cold sensation in mice.</a> Neuron. 54 (3), 371-378 (2007).</li><li>Bautista, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+menthol+receptor+TRPM8+is+the+principal+detector+of+environmental+cold.">The menthol receptor TRPM8 is the principal detector of environmental cold.</a> Nature. 448 (7150), 204-208 (2007).</li><li>Obata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TrpA1+induced+in+sensory+neurons+contributes+to+cold+hyperalgesia+after+inflammation+and+nerve+injury.">TrpA1 induced in sensory neurons contributes to cold hyperalgesia after inflammation and nerve injury.</a> The Journal of Clinical Investigation. 115 (9), 2393-2401 (2005).</li><li>Tang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pirt+functions+as+an+endogenous+regulator+of+TRPM8.">Pirt functions as an endogenous regulator of TRPM8.</a> Nature communications. 4, 2179 (2013).</li><li>Lee, H., Iida, T., Mizuno, A., Suzuki, M., Caterina, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+thermal+selection+behavior+in+mice+lacking+transient+receptor+potential+vanilloid+4.">Altered thermal selection behavior in mice lacking transient receptor potential vanilloid 4.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 25 (5), 1304-1310 (2005).</li><li>Pogorzala, L. A., Mishra, S. K., Hoon, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cellular+code+for+Mammalian+thermosensation.">The cellular code for Mammalian thermosensation.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 33 (13), 5533-5541 (2013).</li><li>Yalcin, I., Charlet, A., Freund-Mercier, M. -. J., Barrot, M., Poisbeau, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiating+thermal+allodynia+and+hyperalgesia+using+dynamic+hot+and+cold+plate+in+rodents.">Differentiating thermal allodynia and hyperalgesia using dynamic hot and cold plate in rodents.</a> The journal of pain official journal of the American Pain Society. 10 (7), 767-773 (2009).</li><li>Callahan, B. L., Gil, A. S., Levesque, A., Mogil, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+mechanical+and+thermal+nociceptive+sensitivity+in+the+laboratory+mouse+by+behavioral+state.">Modulation of mechanical and thermal nociceptive sensitivity in the laboratory mouse by behavioral state.</a> The journal of pain: official journal of the American Pain Society. 9 (2), 174-184 (2008).</li><li>Brenner, D. S., Golden, J. P., Vogt, S. K., Dhaka, A., Story, G. M., Gereau, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dynamic+set+point+for+thermal+adaptation+requires+phospholipase+C-mediated+regulation+of+TRPM8+in+vivo.">A dynamic set point for thermal adaptation requires phospholipase C-mediated regulation of TRPM8 in vivo.</a> Pain. , (2014).</li><li>Patwardhan, A. M., Scotland, P. E., Akopian, A. N., Hargreaves, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+TRPV1+in+the+spinal+cord+by+oxidized+linoleic+acid+metabolites+contributes+to+inflammatory+hyperalgesia.">Activation of TRPV1 in the spinal cord by oxidized linoleic acid metabolites contributes to inflammatory hyperalgesia.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (44), 18820-18824 (2009).</li><li>Fujita, F., Uchida, K., Takaishi, M., Sokabe, T., Tominaga, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ambient+Temperature+Affects+the+Temperature+Threshold+for+TRPM8+Activation+through+Interaction+of+Phosphatidylinositol+4,5-Bisphosphate.">Ambient Temperature Affects the Temperature Threshold for TRPM8 Activation through Interaction of Phosphatidylinositol 4,5-Bisphosphate.</a> Journal of Neuroscience. 33 (14), 6154-6159 (2013).</li><li>Rohacs, T., Lopes, C. M., Michailidis, I., Logothetis, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI(4,5)P2+regulates+the+activation+and+desensitization+of+TRPM8+channels+through+the+TRP+domain.">PI(4,5)P2 regulates the activation and desensitization of TRPM8 channels through the TRP domain.</a> Nature neuroscience. 8 (5), 626-634 (2005).</li><li>Daniels, R. L., Takashima, Y., McKemy, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity+of+the+neuronal+cold+sensor+TRPM8+is+regulated+by+phospholipase+C+via+the+phospholipid+phosphoinositol+4,5-bisphosphate.">Activity of the neuronal cold sensor TRPM8 is regulated by phospholipase C via the phospholipid phosphoinositol 4,5-bisphosphate.</a> The Journal of biological chemistry. 284 (3), 1570-1582 (2009).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurokinin-1+receptor+enhances+TRPV1+activity+in+primary+sensory+neurons+via+PKCepsilon:+a+novel+pathway+for+heat+hyperalgesia.">Neurokinin-1 receptor enhances TRPV1 activity in primary sensory neurons via PKCepsilon: a novel pathway for heat hyperalgesia.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (44), 12067-12077 (2007).</li><li>Wang, H., Zylka, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mrgprd-expressing+polymodal+nociceptive+neurons+innervate+most+known+classes+of+substantia+gelatinosa+neurons.">Mrgprd-expressing polymodal nociceptive neurons innervate most known classes of substantia gelatinosa neurons.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (42), 13202-13209 (2009).</li></ol>

The authors have nothing to disclose

The CPA can be used to assess cold sensitivity and cold adaptation in mice. It provides an affordable, efficient way to measure cold responses in unrestrained, acclimated animals at a wide variety of temperature ranges. It also provides an unambiguous behavioral response with an easily quantified and analyzed output variable. It has already been used to assess changes in cold sensitivity induced by inflammation1, neuropathic injury1, analgesics1, genetic knockouts20, and ge...

げっ歯類で冷たい反応性を測定することは、正常および病的両方の条件下で、ヒトにおける低温感受性の潜在的なメカニズムの理解を改善するのに重要である。コールド足底アッセイ（CPA）、もともと数年前に1を開発し、RTで配信寒冷刺激に再現可能な、明確なネズミ行動反応を生成するように設計されています。このアッセイのより最近の強化は、温度が2の広い範囲での低温感受性の再現性のある測定を可能にしてきた。どちらのバージョンも、比較的高いスループット、および使用する安価であるように設計されている。 大きな進歩は、他の行動の方法を使用して低温感受性のメカニズムを理解する上でなされた。一つの方法は、軽くたたくまたは噴霧アセトンをマウスの足に、マウスが足3,4フリック費やす時間の量を測定することを含むアセトンの蒸発試験である。残念ながら、アセトンの蒸発に対する応答は、湿式感覚とアセトンの匂いによって混乱している。また、アセトンの蒸発試験に適用される冷熱刺激を印加アセトンの量に基づいて変化し、定量化が困難であることができる。最後に、無傷のマウスは、ベースライン時にアセトンに最小限の応答を持っていることは不可能この方法で過敏症が存在しない場合に鎮痛を測定すること。 冷応答のための別の古典的なアッセイは、テール冷水5,6に浸漬された後に撤退する待ち時間が測定されるテイルフリックアッセイである。このアッセイにおける行動応答があいまいであり、アッセイは、特定の温度に対する応答を測定している間、動物は、十分に記載ストレス誘発鎮痛メカニズム7を通じて冷たい応答性を変えることができ、試験中に拘束されなければならない。 もう一つの一般的に使用されるツールは、行動を測定コールドプレート試験であり、彼らはペルチェ冷却板8-10上に置かれた後のマウスの応答。このツールは、特定の温度での動物の応答に関する情報を提供していますが、それはまた、一貫性なく使用されてきた。別のグループは、ジャンプ8,11数、最初の応答8,11- 13に待ち時間を含む応答の異なるタイプを測定して、足の数は非常に異なる結果を11,13,14を持ち上げる。コー​​ルドプレートアッセイはまた、一度に試験することができる唯一の​​動物のような比較的低いスループットであり、それは高価で脆弱なペルチェ素子を必要とする。 2プレート温度嗜好試験は、動物が、異なる温度9,15- 17の2接続プレートに費やす時間の相対量を測定するコールドプレート試験の一般的に使用される誘導体である。別の類似の一般的に使用されるアッセイは、熱勾配アッセイ、マウスは、異なる温度帯で過ごす時間の量である長い金属板上に5°Cと45°Cの範囲では16を測定する。これらのアッセイは、温度の比較を可能にしながら、それは行動が温度嫌悪や温度の好みにを表すかどうかは不明である。 最後に、動的コールドプレートアッセイは、マウスは、周囲温度18の変化に対応するかを測定するために使用されてきた。この方法は、RTペルチェ素子にマウスを置き、マウスがジャンプしたり、異なるプレート温度で彼らの足をなめるどの程度測定しながら、1℃にそれをランプダウンが含まれます。これはマウスが冷却環境に適応する方法をテストが、それはマウスがクーラー周囲温度の設定で冷たい刺激に反応するかテストするための方法を提供していません。さらに、それは実行するために高価な設備を必要とし、その低温感受性を測定する前に検査機器にマウスを順応する方法を提供していません。 これらのアッセイを補完するために、CPAはacclimaをテストテッド温度範囲において、種々の明確に定義された冷刺激に対する応答、または冷たい周囲温度に適応する過程。これは、安価に高スループットテストのためにスケールアップされる可能性を、私たちの現在の装置との時間で14匹のマウスまでテストすることができます。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1209">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:233px;">Name</td>
			<td style="width:320px;">Company</td>
			<td style="width:353px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:303px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">T-type thermocouple probe</td>
			<td>Physitemp</td>
			<td>IT-24p</td>
			<td>Used to measure the surface temperature of the glass (http://www.physitemp.com/products/probesandwire/)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass plate</td>
			<td>Local glass company (in St. Louis, Stemmerich Inc)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>We use pyrex glass (borosilicate float). Our lab generally uses 1/4&#39;&#39;, but 3/16&#39;&#39; and 1/8&#39;&#39; are also useful</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thermal Data logger</td>
			<td>Extech</td>
			<td>EA15</td>
			<td>Thermologger to keep track of glass temperature (http://www.extech.com/instruments/product.asp?catid=64&#38;prodid=408)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td align="right">309657</td>
			<td>The top is cut off, and dry ice is compressed in the syringe to generate a cold probe</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Computer</td>
			<td>If using Extech logger, any Pcwill work</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Aluminum boxes</td>
			<td>Washington University in St. Louis machine shop</td>
			<td>N/A</td>
			<td>boxes are 3&#39; long, 4.5&#39;&#39; wide, and 3&#39;&#39; tall with a sealed lid.&#160; There is a 1/2&#39;&#39; hole drilled into one short side of each box, near the bottom. These holes are filled with rubber stopcocks when the boxes are filled with wet ice or hot water.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Heated water circulator</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
			<td>Any water circulator model with a pump will work</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">21 gauge needle</td>
			<td>BD</td>
			<td align="right">305165</td>
			<td>The exact needle size is not important</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hand timer</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
			<td>Any hand timer will work</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mirror</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
			<td>Any flat mirror will work</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple and inexpensive method for determining cold sensitivity and adaptation in mice

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life. The cold plantar assay allows the objective and inexpensive assessment of cold sensitivity in mice, and can quantify both analgesia and hypersensitivity. Mice are acclimated on a glass plate, and a compressed dry ice pellet is held against the glass surface underneath the hindpaw. The latency to withdrawal from the cooling glass is used as a measure of cold sensitivity.
Cold sensation is also important for survival in regions with seasonal temperature shifts, and in order to maintain sensitivity animals must be able to adjust their thermal response thresholds to match the ambient temperature. The Cold Plantar Assay (CPA) also allows the study of adaptation to changes in ambient temperature by testing the cold sensitivity of mice at temperatures ranging from 30 &#176;C to 5 &#176;C. Mice are acclimated as described above, but the glass plate is cooled to the desired starting temperature using aluminum boxes (or aluminum foil packets) filled with hot water, wet ice, or dry ice. The temperature of the plate is measured at the center using a filament T-type thermocouple probe. Once the plate has reached the desired starting temperature, the animals are tested as described above.
This assay allows testing of mice at temperatures ranging from innocuous to noxious. The CPA yields unambiguous and consistent behavioral responses in uninjured mice and can be used to quantify both hypersensitivity and analgesia. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

30°C、23°C、17°C、12°Cで開始されたマウスから誘発される行動反応は、再現性の高い（ 図4A）20である。後足の下に生成された冷熱刺激を測定するために、マウスをケタミン/キシラジン/アセプロマジンのカクテルで麻酔し、それらの足をT型フィラメントの熱電対（ 図4B）20の上にガラス上に固定した。ガラスは、所望の検査範囲に冷却または加温し?...

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A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

The Cold Plantar Assay (CPA) measures cold responsiveness between 30 &#176;C and 5 &#176;C, and can also measure cold adaptation. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

マウスにおける低温感受性と適応を決定するためのシンプルで安価な方法

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

14.6K ビュー.  Washington University in St. Louis. The Cold Plantar Assay (CPA) measures cold responsiveness between 30 °C and 5 °C, and can also measure cold adaptation. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.