The authors would like to acknowledge contributions from the entire Gereau Lab for manuscript editing. This work is supported by NINDS funds 1F31NS078852 to DSB and NINDS fund NS42595 to RWG.

وكانت جميع البروتوكولات الماوس وفقا للمبادئ التوجيهية المعاهد الوطنية للصحة وتمت الموافقة من قبل لجنة الدراسات الحيوانية من كلية الطب بجامعة واشنطن (سانت لويس، MO). 1. إعداد لوحة اختبار واسوار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف قبالة سطح الزجاج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأمين T-نوع خيوط التحقيق الحرارية إلى السطح في منتصف لوحة من الزجاج مع الشريط المختبر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع مرفقات الحيوان على لوحة الزجاج في خط واحد على طول منتصف اللوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كاتب التحقيق الحرارية من خلال مركز الضميمة الحيوانية والاندماج في مسجل البيانات. تحويل مسجل بيانات على حين تفعيل هذا ميزة لصناعة السيارات في الاغلاق، وإرفاق مسجل بيانات إلى جهاز الكمبيوتر باستخدام كابل المقدمة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا تسجيل درجة الحرارة لوحة أثناء التجربة، افتح البرنامج مسجل بيانات لبدء تسجيل درجات الحرارة لوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا لزم الأمر، وضبط البرنامج لإعادةالحبل درجة الحرارة لوحة مرة واحدة كل ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء تسجيل درجات الحرارة باستخدام برنامج حزم مع مسجل بيانات الحراري. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل العلبة السوداء مع تدرج لمنع التفاعل البصري بين الفئران. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> موقف يعكس تحت الزجاج بحيث الجانب السفلي من العبوات مرئيا من وضع الجلوس المريح. </li></ol> 2. الاحتباس الحراري / تبريد لوحة زجاج <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء صناديق الألومنيوم مع المياه تحسنت، والجليد الرطب، أو الثلج الجاف والموقف منها بشكل مناسب على لوحة زجاجية (يمكن أيضا الحزم رقائق الألومنيوم مليئة الثلج الجاف أن تستخدم لتبريد الزجاج؛ الشكل 1) (2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للاختبار في 30 ° C، ضع صناديق الألومنيوم حوالي 0.25 &#39;&#39; بعيدا عن حظائر الحيوانات (الشكل 2B) 2. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد شكل دائري الماء الساخن على جانبي لوحة زجاجية. تعيين دائري إلى 45 - 60 درجة مئوية، ولناالبريد إلى ملء صناديق الألومنيوم مع وجود تدفق مستمر من الماء الساخن (الشكل 1C) 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع المروجون مثل أن الماء الساخن من صناديق الألومنيوم يستنزف مباشرة مرة أخرى في خزان للدائري على كل جانب (الشكل 1C) 2. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للاختبار في RT، وترك صناديق فارغة (الشكل 2) 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للاختبار في 17 ° C، ضع صناديق حوالي 0.25 &#39;&#39; بعيدا عن حظائر الحيوانات على جانبي وملء مع الثلج الرطب (الشكل 2) 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للاختبار في 12 ° C، ضع صناديق حوالي 1.25 &#39;&#39; بعيدا عن العبوات على جانبي وملء مع الثلج الجاف (الشكل 2) 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للاختبار في 5 ° C، ضع صناديق حوالي 0.25 &#39;&#39; بعيدا عن العبوات على جانبي وملء مع الثلج الجاف (الشكل 2) 2.<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما التبريد الزجاج مع الثلج الجاف، تأكد من وجود تهوية كافية لمنع CO 2 تراكم في الغرفة. </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الانتظار للزجاج للوصول إلى مجموعة ودرجة الحرارة المطلوبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الفئران لالمرفقات على لوحة. ملاحظة: يمكن استخدام مولد الضوضاء البيضاء لتقليل الاضطرابات الضوضاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انتظر الفئران ليتأقلم. ملاحظة: في منشأتنا هذا يستغرق ما يقرب من 2.5 ساعة، ولكن هذا قد تتفاوت تفاوتا كبيرا على أساس السكن الحيوانية وشروط التعامل معها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على الزجاج في نطاق درجات الحرارة المطلوبة عن طريق ضمان أن يتم الاحتفاظ صناديق كامل من الماء درجة حرارة والجليد الرطب، أو الثلج الجاف. ملاحظة: مع جهازنا في حاجة إلى صناديق ليتم تعبئتها مع الثلج تقريبا كل 90 دقيقة. ملاحظة: لC حالة 17 °، فإنه من المفيد لتفريغ معظم المياه من مربعات الألومنيوم من خلال فتحات التصريف قبل إعادة تعبئتها مع الثلج. وهذا الاستقرار في درجة الحرارة أفضل، والعلاقات العامةتجاوز الحدث ملاحظة: إن المبلغ المحدد من الثلج الجاف تختلف موسميا، ولكن بصفة عامة حفظ مربعات أكثر من ¼ الكاملة على طول من مربع سوف تبقي درجة حرارة ثابتة. </li></ol> 3. اختبار الفئران في درجات الحرارة الثابتة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خارج الغرفة السلوكية، وملء دلو الجليد حوالي نصف كامل من الثلج الجاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مطرقة أو مطرقة، سحق الثلج الجاف الى مسحوق ناعم. ملاحظة: سوف الملئ دلو تجعل من الصعب سحق تماما الثلج الجاف الى مسحوق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام شفرة حلاقة مستقيمة أو مقص، وقطع رأس قبالة حقنة 3 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام إبرة 21 G، كزة 3 الثقوب على طرفي نقيض من الحقنة (ما مجموعه 6 فتحات). ملاحظة: هذه الثقوب يقلل من الضغط الناتجة عن التسامي في حين ضغط الثلج الجاف. يمكن إعادة استخدام المحاقن قطع للتجارب متعددة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أخذ الحقنة، ومسحوق الثلج الجاف، وساعة توقيت باليد إلى غرفة السلوكية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء غرفة حقنة نصف كامل من مسحوق الثلج الجاف. عقد نهاية قطع من حقنة ضد كائن مسطح، وضغط بقوة مسحوق باستخدام المكبس. احذر؛ المكبس من البلاستيك قد ينحني أو كسر من الضغط. إذا حدث هذا، استبدال المكبس من حقنة جديدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمديد غيض من مضغوط بيليه الثلج الجاف الماضي حافة حقنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الفئران الاختبار التي هي تماما في بقية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في 30 ° C، 23 ° C و 17 ° C، والفئران التي لديها اختبار كل الكفوف 4 على الزجاج وليس تتحرك، ولكن ليس نائما تماما (19). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في 12 ° C و 5 ° C، الفئران الاختبار التي هي على الكفوف 2 أو 4 الكفوف وعدم التحرك أو القفز. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام المرايا الاستهداف، بلطف ولكن بحزم اضغط بيليه دافق شقة ضد سطح الزجاج تحت hindpaw الماوس (الشكل 1A) 2. بدء الموقت اليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إيقاف الموقت وإزالة بيليه عندما يتحرك الماوس بعيدا عن الزجاج يبرد. ملاحظة: إن الحركة الانسحاب يمكن أن يكون الرأسي أو الأفقي. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان الماوس يتحرك لفترة وجيزة جدا مخلب ثم يعود إلى السطح التبريد، ومواصلة توقيت وتحفيز حتى يجعل الماوس تحرك دائم بعيدا. ملاحظة: يستخدم مختبرنا وقت التحفيز الأقصى من 20 ثانية بالنسبة للفئران في معظم الحالات. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر هذا الإجراء الاختبار حتى يتم جمع لا يقل عن 3 القيم على كل مخلب من كل حيوان. محاكمات منفصلة اختبار الكفوف المعاكس على نفس الماوس بنسبة 7 دقيقة على الأقل، ومحاكمات منفصلة متتالية على أي مخلب واحد من قبل لا يقل عن 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا لزم الأمر، استخدم سمك مختلفة من الزجاج لتوليد معدلات مختلفة من التبريد (الشكل 3) 1. ملاحظة: ويرتبط معدل التبريد عكسيا مع سمك الزجاج. </li></ol> 4. اختبار الفئران خلال الباردة التكيف ملاحظة: هذا هو بروتوكول بديل الذي يسمح الاختبار وبلات الزجاجالبريد يبرد، بدلا من مرة واحدة قد استقر لوحة والفئران تكيفت تماما مع البيئة الباردة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتبع الإرشادات المذكورة في القسم 1 لإعداد الجهاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتبع الإرشادات الواردة في القسم 3 لأخذ القياسات الأساسية في RT (الشكل 7A) 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل صناديق تبريد الألومنيوم مع الثلج الجاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة وقد تم قياس الإختفاء انسحاب خط الأساس، وضع صناديق precooled على لوحة حوالي 1.25 &#39;&#39; بعيدا عن العبوات على جانبي (الشكل 7A، السهم المسمى &quot;وأضاف الجليد الجاف&quot;) 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتبع الإرشادات الواردة في القسم 3 لأخذ القياسات كما يبرد لوحة من الزجاج، أخذ القياسات كلما كان ذلك ممكنا. </li></ol>

<ol>
	<li>Brenner, D. S., Golden, J. P., Gereau, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Behavioral+Assay+for+Measuring+Cold+Sensation+in+Mice.">A Novel Behavioral Assay for Measuring Cold Sensation in Mice.</a> Plos ONE. 7 (6), 8 (2012).</li><li>Brenner, D. S., Vogt, S. K., Gereau, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+to+measure+cold+adaptation+in+freely+behaving+mice.">A technique to measure cold adaptation in freely behaving mice.</a> Journal of Neuroscience Methods. , (2014).</li><li>Choi, Y., Yoon, T. W., Na, H. S., Kim, S. H., Chung, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+signs+of+ongoing+pain+and+cold+allodynia+in+a+rat+model+of+neuropathic+pain.">Behavioral signs of ongoing pain and cold allodynia in a rat model of neuropathic pain.</a> Pain. 59 (3), 369-376 (1994).</li><li>Gauchan, P., Andoh, T., Kato, A., Kuraishi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+increased+expression+of+transient+receptor+potential+melastatin+8+in+oxaliplatin-induced+cold+allodynia+in+mice.">Involvement of increased expression of transient receptor potential melastatin 8 in oxaliplatin-induced cold allodynia in mice.</a> Neuroscience letters. 458 (2), 93-95 (2009).</li><li>Carlton, S. M., Lekan, H. A., Kim, S. H., Chung, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+manifestations+of+an+experimental+model+for+peripheral+neuropathy+produced+by+spinal+nerve+ligation+in+the+primate.">Behavioral manifestations of an experimental model for peripheral neuropathy produced by spinal nerve ligation in the primate.</a> Pain. 56 (2), 155-166 (1994).</li><li>Pizziketti, R. J., Pressman, N. S., Geller, E. B., Cowan, A., Adler, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+cold+water+tail-flick:+A+novel+analgesic+test+that+distinguishes+opioid+agonists+from+mixed+agonist-antagonists.">Rat cold water tail-flick: A novel analgesic test that distinguishes opioid agonists from mixed agonist-antagonists.</a> European Journal of Pharmacology. 119 (1-2), 23-29 (1985).</li><li>Pinto-Ribeiro, F., Almeida, A., Pego, J. M., Cerqueira, J., Sousa, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+unpredictable+stress+inhibits+nociception+in+male+rats.">Chronic unpredictable stress inhibits nociception in male rats.</a> Neuroscience letters. 359 (1-2), 73-76 (2004).</li><li>Karashima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPA1+acts+as+a+cold+sensor+in+vitro+and+in+vivo.">TRPA1 acts as a cold sensor in vitro and in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (4), 1273-1278 (2009).</li><li>Knowlton, W. M., Bifolck-Fisher, A., Bautista, D. M., McKemy, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPM8,+but+not+TRPA1,+is+required+for+neural+and+behavioral+responses+to+acute+noxious+cold+temperatures+and+cold-mimetics+in+vivo.">TRPM8, but not TRPA1, is required for neural and behavioral responses to acute noxious cold temperatures and cold-mimetics in vivo.</a> Pain. 150 (2), 340-350 (2010).</li><li>Allchorne, A. J., Broom, D. C., Woolf, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+cold+pain,+cold+allodynia+and+cold+hyperalgesia+in+freely+behaving+rats.">Detection of cold pain, cold allodynia and cold hyperalgesia in freely behaving rats.</a> Molecular pain. 1, 36 (2005).</li><li>Colburn, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attenuated+cold+sensitivity+in+TRPM8+null+mice.">Attenuated cold sensitivity in TRPM8 null mice.</a> Neuron. 54 (3), 379-386 (2007).</li><li>Dhaka, A., Murray, A. N., Mathur, J., Earley, T. J., Petrus, M. J., Patapoutian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPM8+is+required+for+cold+sensation+in+mice.">TRPM8 is required for cold sensation in mice.</a> Neuron. 54 (3), 371-378 (2007).</li><li>Bautista, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+menthol+receptor+TRPM8+is+the+principal+detector+of+environmental+cold.">The menthol receptor TRPM8 is the principal detector of environmental cold.</a> Nature. 448 (7150), 204-208 (2007).</li><li>Obata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TrpA1+induced+in+sensory+neurons+contributes+to+cold+hyperalgesia+after+inflammation+and+nerve+injury.">TrpA1 induced in sensory neurons contributes to cold hyperalgesia after inflammation and nerve injury.</a> The Journal of Clinical Investigation. 115 (9), 2393-2401 (2005).</li><li>Tang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pirt+functions+as+an+endogenous+regulator+of+TRPM8.">Pirt functions as an endogenous regulator of TRPM8.</a> Nature communications. 4, 2179 (2013).</li><li>Lee, H., Iida, T., Mizuno, A., Suzuki, M., Caterina, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+thermal+selection+behavior+in+mice+lacking+transient+receptor+potential+vanilloid+4.">Altered thermal selection behavior in mice lacking transient receptor potential vanilloid 4.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 25 (5), 1304-1310 (2005).</li><li>Pogorzala, L. A., Mishra, S. K., Hoon, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cellular+code+for+Mammalian+thermosensation.">The cellular code for Mammalian thermosensation.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 33 (13), 5533-5541 (2013).</li><li>Yalcin, I., Charlet, A., Freund-Mercier, M. -. J., Barrot, M., Poisbeau, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiating+thermal+allodynia+and+hyperalgesia+using+dynamic+hot+and+cold+plate+in+rodents.">Differentiating thermal allodynia and hyperalgesia using dynamic hot and cold plate in rodents.</a> The journal of pain official journal of the American Pain Society. 10 (7), 767-773 (2009).</li><li>Callahan, B. L., Gil, A. S., Levesque, A., Mogil, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+mechanical+and+thermal+nociceptive+sensitivity+in+the+laboratory+mouse+by+behavioral+state.">Modulation of mechanical and thermal nociceptive sensitivity in the laboratory mouse by behavioral state.</a> The journal of pain: official journal of the American Pain Society. 9 (2), 174-184 (2008).</li><li>Brenner, D. S., Golden, J. P., Vogt, S. K., Dhaka, A., Story, G. M., Gereau, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dynamic+set+point+for+thermal+adaptation+requires+phospholipase+C-mediated+regulation+of+TRPM8+in+vivo.">A dynamic set point for thermal adaptation requires phospholipase C-mediated regulation of TRPM8 in vivo.</a> Pain. , (2014).</li><li>Patwardhan, A. M., Scotland, P. E., Akopian, A. N., Hargreaves, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+TRPV1+in+the+spinal+cord+by+oxidized+linoleic+acid+metabolites+contributes+to+inflammatory+hyperalgesia.">Activation of TRPV1 in the spinal cord by oxidized linoleic acid metabolites contributes to inflammatory hyperalgesia.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (44), 18820-18824 (2009).</li><li>Fujita, F., Uchida, K., Takaishi, M., Sokabe, T., Tominaga, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ambient+Temperature+Affects+the+Temperature+Threshold+for+TRPM8+Activation+through+Interaction+of+Phosphatidylinositol+4,5-Bisphosphate.">Ambient Temperature Affects the Temperature Threshold for TRPM8 Activation through Interaction of Phosphatidylinositol 4,5-Bisphosphate.</a> Journal of Neuroscience. 33 (14), 6154-6159 (2013).</li><li>Rohacs, T., Lopes, C. M., Michailidis, I., Logothetis, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI(4,5)P2+regulates+the+activation+and+desensitization+of+TRPM8+channels+through+the+TRP+domain.">PI(4,5)P2 regulates the activation and desensitization of TRPM8 channels through the TRP domain.</a> Nature neuroscience. 8 (5), 626-634 (2005).</li><li>Daniels, R. L., Takashima, Y., McKemy, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity+of+the+neuronal+cold+sensor+TRPM8+is+regulated+by+phospholipase+C+via+the+phospholipid+phosphoinositol+4,5-bisphosphate.">Activity of the neuronal cold sensor TRPM8 is regulated by phospholipase C via the phospholipid phosphoinositol 4,5-bisphosphate.</a> The Journal of biological chemistry. 284 (3), 1570-1582 (2009).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurokinin-1+receptor+enhances+TRPV1+activity+in+primary+sensory+neurons+via+PKCepsilon:+a+novel+pathway+for+heat+hyperalgesia.">Neurokinin-1 receptor enhances TRPV1 activity in primary sensory neurons via PKCepsilon: a novel pathway for heat hyperalgesia.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (44), 12067-12077 (2007).</li><li>Wang, H., Zylka, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mrgprd-expressing+polymodal+nociceptive+neurons+innervate+most+known+classes+of+substantia+gelatinosa+neurons.">Mrgprd-expressing polymodal nociceptive neurons innervate most known classes of substantia gelatinosa neurons.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (42), 13202-13209 (2009).</li></ol>

The authors have nothing to disclose

The CPA can be used to assess cold sensitivity and cold adaptation in mice. It provides an affordable, efficient way to measure cold responses in unrestrained, acclimated animals at a wide variety of temperature ranges. It also provides an unambiguous behavioral response with an easily quantified and analyzed output variable. It has already been used to assess changes in cold sensitivity induced by inflammation1, neuropathic injury1, analgesics1, genetic knockouts20, and ge...

قياس الاستجابة الباردة في القوارض المهم لتحسين فهم الآليات المحتملة للحساسية الباردة في البشر في إطار كل من الظروف العادية والمرضية. والباردة أخمصي الفحص (CPA)، وضعت أصلا منذ عدة سنوات 1، يهدف إلى توليد استنساخه، لا لبس فيها الاستجابات السلوكية الفئران لحافز البارد ألقاها في RT. وقد أتاحت المزيد من التحسينات الأخيرة من هذا الاختبار قياس استنساخه من حساسية الباردة في مجموعة واسعة من درجات الحرارة 2. تم تصميم كلا الإصدارين أيضا أن يكون نسبيا عالية الإنتاجية، وغير مكلفة للاستخدام. أحرز قدر كبير من التقدم في فهم آليات حساسية الباردة باستخدام أساليب سلوكية أخرى. أسلوب واحد هو اختبار التبخر الأسيتون، والتي تنطوي على اللمس أو الرش الأسيتون على مخلب الماوس وقياس مقدار الوقت الذي تنفق الماوس عبها 3،4 مخلب. للأسف،خزينا الردود على الأسيتون التبخر التي كتبها الإحساس الرطب ورائحة الأسيتون. أيضا، والتحفيز الباردة التي يتم تطبيقها في اختبار الأسيتون التبخر يمكن أن تختلف على أساس كمية من الاسيتون التطبيقية، ويصعب قياسها كميا. وأخيرا، لم يصب الفئران لها ردود الحد الأدنى لالأسيتون في الأساس، مما يجعل من المستحيل قياس التسكين في غياب فرط الحساسية مع هذا الأسلوب. فحص الكلاسيكي آخر لردود الباردة هو فحص الذيل نفض الغبار، حيث يتم قياس زمن الوصول إلى الانسحاب بعد مغمورة الذيل في 5،6 الماء البارد. في حين أن الاستجابات السلوكية في هذا الاختبار هي لا لبس فيها ويقيس الفحص الردود على درجة حرارة معينة، لا بد من ضبط النفس الحيوانات أثناء الاختبار، والتي يمكن أن تغير الاستجابة الباردة من خلال موصوفة وصفا جيدا التوتر الناجم عن آليات مسكن 7. آخر أداة تستخدم عادة هي اختبار لوحة البارد، الذي يقيس السلوكيةردود الفئران بعد يتم وضعها على طبق من ذهب المبردة بلتيير 8-10. بينما توفر هذه الأداة المعلومات حول استجابات الحيوان في درجات حرارة معينة، فإنه كما استخدمت بشكل غير متسق. وتقاس مجموعات مختلفة أنواع مختلفة من الاستجابات بما في ذلك عدد من القفزات 8،11، الكمون لأول رد 8،11- 13، وعدد من مخلب يرفع 11،13،14 مع نتائج مختلفة جدا. لوحة فحص البارد هو أيضا منخفضة نسبيا الإنتاجية كما حيوان واحد فقط يمكن اختبارها في كل مرة، وأنه يتطلب وجود جهاز بلتيير مكلفة وهشة. 2-لوحة اختبار تفضيل درجة الحرارة هو مشتق تستخدم عادة للاختبار لوحة الباردة يقيس كمية النسبي من الوقت الذي تنفق الحيوانات في 2 وحات متصلة من درجات حرارة مختلفة 9،15- 17. آخر مماثل فحص شيوعا هو فحص التدرج الحراري، حيث مقدار الوقت الذي تنفق الفئران في مناطق مختلفة في درجة الحرارةتتراوح بين 5 ° C و 45 ° C على لوحة معدنية طويلة تقاس 16. في حين أن هذه المقايسات تسمح المقارنة بين درجات الحرارة، وأنه من غير الواضح ما إذا كان يمثل سلوك النفور درجة الحرارة أو لتفضيل درجة الحرارة. وأخيرا، تم استخدام لوحة الباردة الديناميكي فحص لقياس مدى الفئران تستجيب لتغير درجات الحرارة المحيطة 18. يتضمن هذا الأسلوب وضع الفئران على جهاز بلتيير RT والتعلية ذلك وصولا الى 1 درجة مئوية في حين قياس مدى تقفز الفئران أو لعق الكفوف في درجات حرارة لوحة مختلفة. في حين أن هذا اختبارات كيف الفئران على التكيف مع بيئة التبريد، وأنها لا توفر وسيلة لاختبار مدى الفئران تستجيب لحافز البارد في الإعداد لدرجة الحرارة المحيطة برودة. بالإضافة إلى ذلك، فإنه يتطلب معدات باهظة الثمن لأداء ولا توفر وسيلة لتأقلم الفئران لاختبار المعدات قبل قياس حساسيتها الباردة. واستكمالا لهذه المقايسات، وCPA يختبر acclimaردود تيد لحافز البارد واضحة المعالم في مجموعة متنوعة من تتراوح درجة الحرارة، أو أثناء عملية التكيف مع درجات الحرارة المحيطة الباردة. فإنه يمكن اختبار ما يصل الى 14 الفئران في وقت واحد مع الجهاز الحالي لدينا، مع إمكانية زيادتها غير مكلفة تصل لاختبار الإنتاجية العالية.

<table><tbody><tr><td>T-type thermocouple probe</td><td>Physitemp</td><td>IT-24p</td><td>Used to measure the surface temperature of the glass (http://www.physitemp.com/products/probesandwire/)</td></tr><tr><td>Glass plate</td><td>Local glass company (in St. Louis, Stemmerich Inc)</td><td></td><td>We use pyrex glass (borosilicate float). Our lab generally uses 1/4&#039;&#039;, but 3/16&#039;&#039; and 1/8&#039;&#039; are also useful</td></tr><tr><td>Thermal Data logger</td><td>Extech</td><td>EA15</td><td>Thermologger to keep track of glass temperature (http://www.extech.com/instruments/product.asp?catid=64&amp;amp;prodid=408)</td></tr><tr><td>3 ml Syringe</td><td>BD</td><td>309657</td><td>The top is cut off, and dry ice is compressed in the syringe to generate a cold probe</td></tr><tr><td>Computer</td><td>If using Extech logger, any Pcwill work</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aluminum boxes</td><td>Washington University in St. Louis machine shop</td><td></td><td>boxes are 3&#039; long, 4.5&#039;&#039; wide, and 3&#039;&#039; tall with a sealed lid.&amp;nbsp; There is a 1/2&#039;&#039; hole drilled into one short side of each box, near the bottom. These holes are filled with rubber stopcocks when the boxes are filled with wet ice or hot water.</td></tr><tr><td>Heated water circulator</td><td>VWR</td><td></td><td>Any water circulator model with a pump will work</td></tr><tr><td>21 G needle</td><td>BD</td><td>305165</td><td>The exact needle size is not important</td></tr><tr><td>Hand timer</td><td></td><td></td><td>Any hand timer will work</td></tr><tr><td>Mirror</td><td></td><td></td><td>Any flat mirror will work</td></tr></tbody></table>

a simple and inexpensive method for determining cold sensitivity and adaptation in mice

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life. The cold plantar assay allows the objective and inexpensive assessment of cold sensitivity in mice, and can quantify both analgesia and hypersensitivity. Mice are acclimated on a glass plate, and a compressed dry ice pellet is held against the glass surface underneath the hindpaw. The latency to withdrawal from the cooling glass is used as a measure of cold sensitivity.
Cold sensation is also important for survival in regions with seasonal temperature shifts, and in order to maintain sensitivity animals must be able to adjust their thermal response thresholds to match the ambient temperature. The Cold Plantar Assay (CPA) also allows the study of adaptation to changes in ambient temperature by testing the cold sensitivity of mice at temperatures ranging from 30 &#176;C to 5 &#176;C. Mice are acclimated as described above, but the glass plate is cooled to the desired starting temperature using aluminum boxes (or aluminum foil packets) filled with hot water, wet ice, or dry ice. The temperature of the plate is measured at the center using a filament T-type thermocouple probe. Once the plate has reached the desired starting temperature, the animals are tested as described above.
This assay allows testing of mice at temperatures ranging from innocuous to noxious. The CPA yields unambiguous and consistent behavioral responses in uninjured mice and can be used to quantify both hypersensitivity and analgesia. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

الاستجابات السلوكية انتزع من الفئران ابتداء من الساعة 30 ° C، 23 ° C، 17 ° C، و 12 ° C هي تكرار للغاية (الشكل 4A) 20. من أجل قياس التحفيز الباردة التي يتم توليدها تحت hindpaw، تم تخدير الفئران مع الكيتامين / زيلازين / آسيبرومازين الكوكتيل وتم تأمين الكفوف على الزجاج ع?...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice at JoVE.com

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

The Cold Plantar Assay (CPA) measures cold responsiveness between 30 &#176;C and 5 &#176;C, and can also measure cold adaptation. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

طريقة بسيطة وغير مكلفة لتحديد الباردة الحساسية والتكيف في الفئران

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

a-simple-inexpensive-method-for-determining-cold-sensitivity

Research

JoVE Journal

Neuroscience

14.7K Views.  Washington University in St. Louis. The Cold Plantar Assay (CPA) measures cold responsiveness between 30 °C and 5 °C, and can also measure cold adaptation. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

Video: A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Testing for Odor Discrimination and Habituation in Mice

This video demonstrates a technique to establish the presence of a normally functioning olfactory system in a mouse. The test helps determine whether the mouse can discriminate between non-social odors and social odors, whether the mouse habituates to a repeatedly presented odor, and whether the mouse demonstrates dishabituation when presented with a novel odor. Since many social behavior tests measure the experimental animal&#8217;s response to a familiar or novel mouse, false positives can be avoided by establishing that the animals can detect and discriminate between social odors. There are similar considerations in learning tests such as fear conditioning that use odor to create a novel environment or olfactory cues as an associative stimulus. Deficits in the olfactory system would impair the ability to distinguish between contexts and to form an association with an olfactory cue during fear conditioning. 
In the odor habitation/dishabituation test, the mouse is repeatedly presented with several odors. Each odor is presented three times for two minutes. The investigator records the sniffing time directed towards the odor as the measurement of olfactory responsiveness. A typical mouse shows a decrease in response to the odor over repeated presentations (habituation). The experimenter then presents a novel odor that elicits increased sniffing towards the new odor (dishabituation). After repeated presentation of the novel odor the animal again shows habituation. This protocol involves the presentation of water, two or more non-social odors, and two social odors. In addition to reducing experimental confounds, this test can provide information on the function of the olfactory systems of new knockout, knock-in, and conditional knockout mouse lines.

This manuscript describes a protocol to examine the olfactory system of rodents. The olfactory habituation/dishabituation test will allow investigators to determine whether a mouse habituates to a repeatedly presented odor and whether the mouse demonstrates dishabituation when presented a novel odor.

اختبار لرائحة التمييز والتعويد في الفئران

This video demonstrates a technique to establish the presence of a normally functioning olfactory system in a mouse. The test helps determine whether the ...

Behavior

Simple and Computer-assisted Olfactory Testing for Mice

Olfaction is highly conserved among species and is required for reproduction and survival.
In humans, olfaction is also one of the senses that is affected with aging and is a strong predictor of neurodegenerative diseases. Thus, olfaction testing is used as a non-invasive diagnostic method to detect neurological deficits early on. In order to understand the mechanisms underlying olfactory network susceptibility, olfactory research in rodents has gained momentum in the past decade.
Here, we present a very simple, time efficient and reproducible olfactory testing method of innate odor perception and sensitivity in mice without the need of any prior food or water restriction. The tests are performed in a familiar environment to the mice, require only the scents and a 2 min session of odorant exposure. The analysis is performed, post-hoc, using computer-assisted commands on ImageJ and can be, therefore, carried out from start to end by one researcher.
This protocol does not require any special hardware or setup and is indicated for any laboratory interested in testing olfactory perception and sensitivity.

We present a simple and unbiased olfactory test in mice. With this protocol olfactory discrimination, preference, avoidance and sensitivity to a novel odor as compared to water can be assessed in single behavioral sessions. This method is indicated for a single experimenter and analysis is based on computer-assisted video processing.

بسيطة والشم اختبار لالفئران بمساعدة الحاسوب

Olfaction is highly conserved among species and is required for reproduction and survival.
In humans, olfaction is also one of the senses that is affected ...

Measuring Local Anaphylaxis in Mice

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. Exposure to an allergen in a sensitized individual can result in clinical symptoms that vary from minor erythema to life threatening anaphylaxis. In the laboratory, various animal models have been developed to understand the mechanisms driving allergic responses. Herein, we describe a detailed method for measuring changes in vascular permeability to quantify localized allergic responses. The local anaphylaxis assay was first reported in the 1920s, and has been adapted from the technique published by Kojima et al. in 20071. In this assay, mice sensitized to OVA are challenged in the left ear with vehicle and in the right ear with OVA. This is followed by an intravenous injection of Evans Blue dye. Ten min after injecting Evans Blue, the animal is euthanized and the dye that has extravasated into the ears is extracted overnight in formamide. The absorbance of the extracted dye is then quantified with a spectrophotometer. This method reliably results in a visual and quantifiable manifestation of a local allergic response.

Allergic responses, characterized by the activation of mast cells and basophils, are driven by the cross-linking of IgE and release of proinflammatory mediators. A quantitative assessment of allergic responses can be achieved by using Evans Blue dye to monitor changes in vascular permeability after allergen challenge.

قياس الحساسية المفرطة المحلية في الفئران

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. ...

Immunology and Infection

Measuring Changes in Tactile Sensitivity in the Hind Paw of Mice Using an Electronic von Frey Apparatus

Measuring inflammation-induced changes in thresholds of hind paw withdrawal from mechanical pressure is a useful technique to assess changes in pain perception in rodents. Withdrawal thresholds can be measured first at baseline and then following drug, venom, injury, allergen,&#160;or otherwise evoked inflammation by applying an accurate force on very specific areas of the skin. An electronic von Frey apparatus allows precise assessment of mouse hind paw withdrawal thresholds that are not limited by the available filament sizes in contrast to classical von Frey measurements. The ease and rapidity of measurements allow for incorporation of assessment of tactile sensitivity outcomes in diverse models of rapid-onset inflammatory and neuropathic pain as multiple measurements can be taken within a short time period. Experimental measurements for individual rodent subjects can be internally controlled against individual baseline responses and exclusion criteria easily established to standardize baseline responses within and across experimental groups. Thus, measurements using an electronic von Frey apparatus represent a useful modification of the well-established classical von Frey filament-based assays for rodent mechanical allodynia that may also be applied to other nonhuman mammalian models.

Electronic von Frey measurements are an effective and improved alternative to classical von Frey filaments, as they allow rapid and precise measurement of changes in rodent mechanical withdrawal thresholds to continuously applied pressure stimuli before and after an inflammatory event.

Measuring inflammation-induced changes in thresholds of hind paw withdrawal from mechanical pressure is a useful technique to assess changes in pain ...

Measuring Skeletal Muscle Thermogenesis in Mice and Rats

Skeletal muscle thermogenesis provides a potential avenue for better understanding metabolic homeostasis and the mechanisms underlying energy expenditure. Surprisingly little evidence is available to link the neural, myocellular, and molecular mechanisms of thermogenesis directly to measurable changes in muscle temperature. This paper describes a method in which temperature transponders are utilized to retrieve direct measurements of mouse and rat skeletal muscle temperature.
Remote transponders are surgically implanted within the muscle of mice and rats, and the animals are given time to recover. Mice and rats must then be repeatedly habituated to the testing environment and procedure. Changes in muscle temperature are measured in response to pharmacological or contextual stimuli in the home cage. Muscle temperature can also be measured during prescribed physical activity (i.e., treadmill walking at a constant speed) to factor out changes in activity as contributors to the changes in muscle temperature induced by these stimuli.
This method has been successfully used to elucidate mechanisms underlying muscle thermogenic control at the level of the brain, sympathetic nervous system, and skeletal muscle. Provided are demonstrations of this success using predator odor (PO; ferret odor) as a contextual stimulus and injections of oxytocin (Oxt) as a pharmacological stimulus, where predator odor induces muscle thermogenesis, and Oxt suppresses muscle temperature. Thus, these datasets display the efficacy of this method in detecting rapid changes in muscle temperature.

Mice and rats are surgically implanted with remote temperature transponders and then habituated to the testing environment and procedure. Changes in muscle temperature are measured in response to pharmacological or contextual stimuli in the home cage or during prescribed physical activity (i.e., treadmill walking at a constant speed).

قياس توليد الحرارة للعضلات الهيكلية في الفئران والجرذان

Skeletal muscle thermogenesis provides a potential avenue for better understanding metabolic homeostasis and the mechanisms underlying energy expenditure. ...

Urokinase-type Plasminogen Activator-induced Mouse Back Pain Model

A model of persisting lower back pain can be induced in mice with the simple methodology described herein. Step-by-step methods for simple, rapid induction of a persisting back pain model in mice are provided here using an injection of urokinase-type plasminogen activator (urokinase), a serine protease present in humans and other animals. The methodology for induction of persisting lower back pain in mice involves a simple injection of urokinase along the ligamentous insertion region of the lumbar spine. The urokinase inflammatory agent activates plasminogen to plasmin. Typically, the model can be induced within 10 min and hypersensitivity persists for at least 8 weeks.
Hypersensitivity, gait disturbance, and other standard anxiety- and depression-like measures can be tested in the persisting model.&#160;Back pain is the most prevalent type of pain. To improve awareness of back pain, the International Association for the Study of Pain (IASP) named 2021 the &#34;Global Year about Back Pain&#34; and 2022 the &#34;Global Year for Translating Pain Knowledge to Practice.&#34; One limitation of the therapeutic advancement of pain therapeutics is the lack of suitable models for testing persistent and chronic pain. The&#160;features of this model&#160;are suitable for testing potential therapeutics aimed at the reduction of back pain and its ancillary characteristics, contributing to IASP&#39;s naming 2022 as the Global Year for Translating Pain Knowledge to Practice.

Methods for simple, rapid induction of a back pain model in mice are provided here using an intraligament injection of urinary plasminogen activator.

نموذج آلام ظهر الماوس الناجم عن منشط البلازمينوجين من نوع Urokinase

A model of persisting lower back pain can be induced in mice with the simple methodology described herein. Step-by-step methods for simple, rapid ...

Novel Assay for Cold Nociception in Drosophila Larvae

How organisms sense and respond to noxious temperatures is still poorly understood. Further, the mechanisms underlying sensitization of the sensory machinery, such as in patients experiencing peripheral neuropathy or injury-induced sensitization, are not well characterized. The genetically tractable Drosophila model has been used to study the cells and genes required for noxious heat detection, which has yielded multiple conserved genes of interest. Little is known however about the cells and receptors important for noxious cold sensing. Although, Drosophila does not survive prolonged exposure to cold temperatures (&#8804;10 &#186;C), and will avoid cool, preferring warmer temperatures in behavioral preference assays, how they sense and possibly avoid noxious cold stimuli has only recently been investigated.
Here we describe and characterize the first noxious cold (&#8804;10 &#186;C) behavioral assay in Drosophila. Using this tool and assay, we show an investigator how to qualitatively and quantitatively assess cold nociceptive behaviors. This can be done under normal/healthy culture conditions, or presumably in the context of disease, injury or sensitization. Further, this assay can be applied to larvae selected for desired genotypes, which might impact thermosensation, pain, or nociceptive sensitization. Given that pain is a highly conserved process, using this assay to further study&#160;thermal nociception will likely glean important understanding of pain processes in other species, including vertebrates.

Novel Assay for Cold Nociception in Drosophila Larvae

Here we demonstrate a novel assay to study cold nociception in Drosophila larvae. This assay utilizes a custom-built Peltier probe capable of applying a focal noxious cold stimulus and results in quantifiable cold-specific behaviors. This technique will allow further cellular and molecular dissection of cold nociception.

رواية الفحص لالباردة حس الألم في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; يرقات

How organisms sense and respond to noxious temperatures is still poorly understood. Further, the mechanisms underlying sensitization of the sensory ...

Mouse Body Temperature Measurement Using Infrared Thermometer During Passive Systemic Anaphylaxis and Food Allergy Evaluation

Mouse body temperature measurement is of paramount importance for investigating allergies and anaphylactic symptoms. Rectal probes for temperature readings is common, and they have been proven to be accurate and invaluable in this regard. However, this method of temperature measurement requires the mice to be anesthetized in order to insert the probe without injury to the animal. This limits the ability to observe other phenotypes of the mouse simultaneously. In order to investigate other phenotypes while measuring temperatures, rectal probes are not ideal, and another method is desired. Here, we introduce a noninvasive method of temperature measurement that foregoes the requirement for mouse anesthesia while maintaining equal reliability to rectal probes in measuring body temperature. We use an infrared thermometer that detects body surface temperatures at ranges between 2 and 150 mm. This method of body temperature measurement is successful in reliably replicating temperature change trends during passive system anaphylaxis experiments in mice. We show that body surface temperatures are about 2.0 &#176;C lower than rectal probe measurements, but the degree of temperature drop follows the same trend. Furthermore, we use the same technique to observe mice in a food allergy model to evaluate temperature and activity levels simultaneously.

Here we present a new method to accurately measure body temperature differences in passive systemic anaphylaxis (PSA) and food allergy mouse models using an infrared thermometer. This procedure has been accurately duplicated in previous PSA results.

قياس درجة حرارة الجسم الماوس استخدام الأشعة تحت الحمراء الحرارة خلال تاق الجهازية السلبي وتقييم الحساسية الغذائية

Mouse body temperature measurement is of paramount importance for investigating allergies and anaphylactic symptoms. Rectal probes for temperature ...

Development of Recombinant Proteins to Treat Chronic Pain

Chronic pain is difficult to treat and new approaches to resolve persistent pain are urgently needed. Anti-inflammatory cytokines are promising candidates for treating debilitating pain conditions due to their capacity to regulate aberrant neuro-immune interactions. However, physiologically they work in a network of various cytokines, and therefore their therapeutic effect may not be optimal when used as stand-alone drugs. To overcome this limitation, we developed a fusion protein of the anti-inflammatory cytokines IL4 and IL10. Here, we describe the methods for production and quality control of IL4-10 recombinant fusion protein and we test the effectiveness of the IL4-10 fusion protein to resolve pain in a mouse model of persistent inflammatory pain.

In this paper we provide details for the methods of production and quality control of an IL4-10 recombinant fusion protein. We also show how to test the effectiveness of this protein to resolve pain in a mouse model of inflammatory pain.

تنمية بروتينات المؤتلف لعلاج الألم المزمن

Chronic pain is difficult to treat and new approaches to resolve persistent pain are urgently needed. Anti-inflammatory cytokines are promising candidates ...

Medicine

Establishing A Mouse Model for Respiratory Tract Extreme Low-temperature Air Inhalation

Currently, constructing a mouse model for cold environmental stimulation employs cold-heat plates and wearable cooling devices. These methods can partially fulfill the requirements for studying the responses and regulatory effects of mouse skin or neural circuits to cold stimulation. Numerous clinical studies have substantiated the correlation between exposure to low-temperature environments and the development of various diseases. Recently, there has been a growing emphasis on the continuous exchange of information between organs and tissues, providing a novel perspective on addressing longstanding issues within the human body. However, existing installations are unable to construct a model for mice inhaling cold air. 
Although placing mice in a cold environment seems attractive, it has considerable limitations. While mice inhale cold air, their skin is also being stimulated by the cold environment, making it unclear whether resulting pathological changes are due to lung stimulation through the interaction of distant organs or due to the skin receptors and neural signal transmission. This creates considerable confusion in related research. This scheme presents a new approach for constructing a mouse model for extreme cold air inhalation stimulation. This device allows mice to inhale extremely low-temperature gases while their bodies remain at a normal temperature. It maximizes the simulation of the stimulating effects of extreme ambient temperatures on mice and meets the research needs for studying the relationship between extreme environmental temperatures and related diseases.

Cold environmental stimulation has been implicated in the development of various chronic diseases. Therefore, establishing animal models for preclinical research is crucial. This system addresses this need by offering a device that creates a stimulus model, meeting the requirements for basic research on pathogenic mechanisms.