ロボット システムを使用して処理し、組織学的解析のため大腸マウス サンプルを埋め込む

この自動化されたプロトコルは、ヒトのサンプルの処理と埋め込みに日常的に使用されるロボットシステムを用いて、マウス組織の組織病理学的調製を可能にし、サンプルの品質を大幅に向上させます。この手法の主な利点は、方法論的変数の数を減らし、手続き手順の標準化を改善することです。手順を実証し、フランチェスカ・ボッジョになります。

フランチェスカ・ボッジョは私の研究室で働く病理学者です。小さなピンセットを使用して、固定されたマウス結腸組織サンプルを中性緩衝ホルマリンからペトリ皿の切断作業プレートに移すことから始めます。無菌メスを使用して結腸を0.2〜0.3センチメートルの断片に切断し、ピンセットを使用して、配向パラフィン埋め込みカセットの3つの隣接しないプラスチック突出先端のそれぞれに1つのセグメントを配置します。

慎重にカセットを閉じ、プラスチック支持フレームにグリッドを挿入するために慎重に4つのエッジを押します。次に、支持フレームにラベルを付け、サンプルを識別し、カセットをグリッドに移します。処理の 1 時間前に、自動プロセッサを回します。

パラフィンが溶けたことが計測器で示されたら、手動で金属バスケットを自動プロセッサに挿入します。カセットをすべて挿入したら、バスケットを閉じて、レトルトの蓋を開けます。バスケットをプロセッサの専用ハウジングに挿入し、レトルト蓋を閉じます。

計測器コンピュータのタッチスクリーンを使用して、テーブルに記載されているスキームに従って実装する一連のソリューション、タイミング、温度を選択する作業プロトコルを定義します。専用のコンピュータアイコンをクリックして、カセットバスケットを含むレトルトにプロトコルを割り当て、スタートボタンをクリックします。機器が専用のアイコンとアラーム音でプロトコルの終わりを確認したら、レトルトの蓋を開けて、バスケットをプロセッサから取り外します。

組織埋め込み前の1時間前に、自動埋め込み剤をオンにし、パラフィンが器具のパラフィンバス温度計で示すように完全に溶けるまで待ちます。処理されたカセットをプロセッサー・バスケットから埋め込み装置ラックに手動で転送し、メイン・埋め込み装置の蓋を開きます。タッチスクリーンを使用して、ラックが挿入されていることをロボットシステムに通知し、入口ハウジングの蓋を開けます。

入口ハウジングに最大4つのラックを挿入し、入口ハウジングの蓋を閉じます。次に、タッチスクリーンを使用して、表に示されているとおりに埋め込み手順を開始します。装置が専用のアイコンでプロトコルの終わりを確認したら、コンセントラックを取り外し、メインの埋め込みカバーを閉じます。

次に、組み込みブロックをラックからストレージボックスに転送します。大腸短調、およびプロ炎症性遺伝子の大腸発現は、デキストラン硫酸ナトリウムまたはDSS誘導炎症の存在をスコアリングするためのパラメータとして広く用いられている。腸内の炎症細胞の腸内層への浸潤は、DSS治療によっても大きく増強される。

実証されているように、自動化によって処理された未処理サンプルのH&E染色は、DSS処理動物のサンプルと比較して、炎症性細胞の浸潤、上皮変化、粘膜アーキテクチャの変化を少なく示しています。自動器具によって行われるマウス組織の調製および埋め込みの品質は、CD20およびマロリートリクローム染色のための免疫組織化学的染色によってさらに確認することができる。特に、自動サンプル処理は、手動法で処理されるサンプルよりも、一貫して組織学的パラメータの高い割合の評価を可能にする。

自動化されたプロセッサの準備が整うまで、組織をグリッドに正しく挿入し、パラフィンが完全に溶けるまで待つ必要があります。この方法は、人間の病理学者のマウスモデルで使用されるヒト組織学的サンプルの定性を用いて、任意のマウス組織の組織学的分析を行うために使用することができる。この技術は、炎症組織の炎症を研究するための研究に成功しており、大腸マウス癌のモデルを研究するのに役立ちます。

このプロトコルで使用されるいくつかの試薬は危険であるとして、この手順を実行する際には常に保護手袋、ゴーグルおよび実験室のコートを着用することを忘れないでください。