著者が確認するあります。

すべてのプロシージャは、動物ケア委員会の華中大学の科学と技術 (武漢、中国) に同済医学大学評議会によって承認されました。原稿が到着に従って準備された (動物資源研究領域: In Vivo実験のレポート) のガイドライン6。
1. 畜産
<ol><li>Sprague-dawley (SD) ラットを使用 (n = 20、男性 10 例、8 週齢、261 に 291 g の重量を量ることを意味 = 272.85 ±9.07 g) 実験動物センターの華中科学技術大学から、ケアとの使用のためのガイドに従いラットを維持実験動物、米国国立衛生研究所 (NIH 文書 No.85-23, 1996 改訂) 刊</li>
	<li>ハウス食品や飲料水への無料アクセスと標準的な条件の下で。保つ木シェービング 530 cm2ケージでラットは寝具します。各ケージに 2 匹のラットを家します。部屋の環境 (マイクロ分離または換気ケージング) にすべてのケージを開けてください。</li>
	<li>実験的プロトコルに携わるスタッフは定期的にラットを扱うことを確認します。</li>
	<li>部屋の温度 21 ° C と 23 ° c. の間を維持します。通常塩の食事料金を与える (0.3 %nacl) 研究中。</li>
</ol>2. 採血手順
注: 真空の血のコレクション システム二重先の尖った針 [22 G (0.7 mm × 25 mm)] のプラスチック製のホルダーとゴム栓 (図 1) と真空管 (2 mL) のシリーズで構成されます。
<ol><li>プラスチック製の拘束ホルダーでラットを置き、目に見える汚れや糞便を除去する (20-30 ° C) ぬるま湯で尻尾を洗います。アシスタントは、拡張の位置に尻尾を保持している、70% エタノール、尾を拭き、オフに静脈にガーゼで拭き取ります。</li>
	<li>22 G 蝶針の先端を挿入位置外側尾静脈 (5 mm 程度) のいずれか (図 2) 約 20 ° の角度で尾の先端から約 2-3 cm。真空の血のコレクションの管 (図 3) に蝶針のゴムの端を挿入することによって真空のコレクションの管に血液を収集します。 注: 最大コレクション血液量は 1.2 mL7です。</li>
	<li>血のコレクションの後針を除去し、血液の流れを停止する 15 30 s のガーゼで穿刺部位を軽く押さえます。プラスチック製の拘束ホルダーからラットをリリースし、そのケージにラットを返します。</li>
	<li>血血しょうを収集するために抗凝固剤として EDTA を含むチューブを使用します。優しく血液抗凝固剤を混合し、氷の上、サンプルに縦置きに数回チューブを反転します。</li>
	<li>血漿または血清を分離する 10 分間 2,000 x g で冷却遠心分離機の血液サンプル コレクション チューブを遠心します。</li>
	<li>血漿/血清、赤と白の血液細胞層を邪魔しないように世話を抽出します。血清を収集するには、抗凝固剤なしのチューブを使用します。サンプルの両方のタイプは、すぐに使用または 1 年間-80 ° C で保存できます。 注: 成功した血のコレクションは、毎回 1.2 mL の血液を得ることとして定義されました。最大穿刺時間が設定された 3 つの試験に第 3 穿刺後総血液量は 1.2 mL より低いそれを定義した場合失敗した血のコレクションとして。サンプリング期間は、尾静脈穿刺から採血後蝶針の除去を開始します。</li>
	<li>
72 週間以内に 2 回血を収集します。
	<ol>
<li>テストし、この手法の有効性を確認この血液コレクション プロトコルを実行する前に 2 h の 2 つの医学生 (初心者) を訓練します。20 ラットを使用し、10 ラット 2 経験豊富な仲間 (実験群) と 2 の医学生 (初心者グループ) によって 10 のラットから採血します。</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 統計解析
<ol><li>平均値 ± 標準偏差としてデータを表現し、SPSS 統計 17 で分析します。Α 値 0.05 選ばれた、したがって p < 0.05 は、統計的に有意と考えられていた。</li>
</ol>

<ol>
	<li>Brown, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+collection+from+the+tail+of+a+rat.">Blood collection from the tail of a rat.</a> Lab Anim (NY). 35 (8), 24-25 (2006).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Staszyk, C., Bohnet, W., Gasse, H., Hackbarth, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+vessels+of+the+rat+tail:+a+histological+re-examination+with+respect+to+blood+vessel+puncture+methods.">Blood vessels of the rat tail: a histological re-examination with respect to blood vessel puncture methods.</a> Lab Anim. 37 (2), 121-125 (2003).</li><li>Lee, G., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sampling+blood+from+the+lateral+tail+vein+of+the+rat.">Sampling blood from the lateral tail vein of the rat.</a> J. Vis. Exp. (99), (2015).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> WHO Guidelines on Drawing Blood: Best Practices in Phlebotomy WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee. , (2010).</li><li>Kilkenny, C., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+bioscience+research+reporting:+ARRIVE-ing+at+a+solution.">Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution.</a> Lab Anim. 44 (4), 377-378 (2010).</li><li>Diehl, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood,+including+routes+and+volumes.">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).</li><li>Eder, J. M., Cutter, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+device+for+collecting+cord+blood.">A new device for collecting cord blood.</a> Obstet Gynecol. 86 (5), 850-852 (1995).</li><li>Reynolds, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+new+device+for+blood+sampling+in+cats+with+a+vacuum+tube+collection+system+-+plasma+biochemistry,+haematology+and+practical+usage+assessment.">Comparison of a new device for blood sampling in cats with a vacuum tube collection system - plasma biochemistry, haematology and practical usage assessment.</a> J Feline Med Surg. 9 (5), 382-386 (2007).</li><li>Wiwanitkit, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+blood+specimens+from+plain+and+gel+vacuum+blood+collection+tubes.">Comparison of blood specimens from plain and gel vacuum blood collection tubes.</a> J Med Assoc Thai. 84 (5), 723-726 (2001).</li><li>Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+butterfly+needles+to+draw+blood+is+independently+associated+with+marked+reduction+in+hemolysis+compared+to+intravenous+catheter.">Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter.</a> Acad Emerg Med. 20 (11), 1151-1155 (2013).</li></ol>

著者がある何も開示するには

本報告では、ラットに学ぶ簡単血液収集方法について説明します。私たちの結果は、このメソッドが繰り返しラットから大量の血液を収集するために可能であります。また、短期的な学習曲線を持つこのメソッドを容易に習得できます。この手順は、非麻酔のラットにおいて実行することができます、だけ動物に最小限のストレスの原因します。
血液は、ラットのさまざまな場所から収集できます。尾静脈血サンプリング4の真向かいにあります。しかし、それは常にラットの薄いと低血流尾静脈から十分な血液量を得ることは容易。真空の血のコレクションのシステムは、日常臨床で患者から血液サンプルを収集するため通常用いられます。この真空の血のコレクション システムは長い時間8,9,10の患者および研究の動物の使用されています。このシステムは、シリコン コーティングされたインナー チューブ壁と蝶針、真空採血管で構成されます。真空負圧の原理に基づいていたでき、血液汚染と溶血11のチャンスを減らす効果もある血を収集、リスクなしの連続的に描画できます。カテーテル内の血液サンプルの体積は約 0.3 mL です。尾静脈から針を撤回した後真空による収集の真空管にカテーテルでブロックされて血液が流れます。このメソッドも小さい穿刺針の使用で 100 g 以下の重量を量るラットから採血のため可能です。
この血の収集方法には、いくつかの利点があります。この手順だけのラットに最小限の損傷の原因、血のコレクションには、麻酔薬を使用せず実行できる従って血液サンプルに及ぼすストレス応答と麻酔薬の影響を避けることができます。我々 の観察はラットはプロシージャの間にプラスチック製の拘束ホルダーで静かだったこれらの実験中に死亡がなかったことを示した。第二に、繰り返し採血ごとに 1 つまたは 2 日間は、様々 な研究目的のため適切なボリュームとは、血液の頻繁にサンプリングができます。最後に、このメソッドは、簡単に学ぶことは、簡単に習得された初心者によるショート (2 h) 学習期間の後と同様の成功率と本報告では実験と初心者のためのグループ間の穿刺時間によって示されるように。以前のレポートは、李らはラット4の外側尾静脈からの血液をサンプリングする同様の方法を示した。本手法は、李らによって報告されたより簡単4我々 は直接尾静脈とチューブのもう一方の端に穿刺針を挿入に直結真空管採血、余分な注射器の使用と血の手動の吸引との必要なしの ' ミルクing' 静脈血流を促進します。このクローズド システム採血血液汚染の可能性が減ります。プラスチック拘束ホルダーの使用はまたラットにストレスを軽減、尾の固定が容易になります。
次の 2 つの手順は、このメソッドの成功のアプリケーションのため重要です。1) 延長尾と尾輪の動きを避けるため2) ゆっくり静脈穿刺を避けるために、穿刺針を静脈において 20 ° の角度で静脈を穿刺します。
結論としては、ラットで採用された真空採血コレクション メソッドは、実行可能な安全で簡単に実践です。このメソッドは、非麻酔のラットから得られた十分な血液量と血の頻繁なサンプリングをできます。

ラットから採血は、さまざまな実験的研究に必要です。ラットから採血の技術、心、レトロ軌道神経叢、頚静脈、伏在静脈、尻尾の血管、頚動脈、腹部大動脈と上大静脈の穿刺があります。麻酔1,2(大伏在静脈と尻尾の血管穿刺) を除くほとんどのテクニックが必要です。ラットの尾の静脈は定期的に採血、血管注射の穴を開けます。暖かい水でテールを治療後血管は拡張そして操作に適したラットが麻酔3時でさえ。
実験小動物2の血液サンプルを取得する新しい、改良された技術の開発、にもかかわらず常に小動物からサンプリングするときに十分な血液を得やすくないです。ラットの尾静脈血サンプリング4の真向かいにあります。ただし、尾静脈が薄く、従ってそれを穴をあけることは難しい、その低血流による十分な血液を得るため長い時間がかかるでしょう。採血吸引チューブ システムを介して、日常臨床で典型的な方法です。このクローズド システムにより採血の血への直接暴露のリスクを低減し、単一の穿刺5から複数のサンプルを容易にしました。本報告では、吸引チューブを用いた非麻酔下ラットにおける単純な尾静脈採血法について説明します。この方法は簡単にマスターし、大量のラットにおける繰り返し血液を取得する使用できます。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="634">
	<tbody>
		<tr height="71">
			<td height="71" style="height:71px;width:192px;">a double-pointed needle</td>
			<td style="width:244px;">Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">22G&#160;</td>
			<td style="width:79px;">(0.7&#215;25mm)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:192px;">vacuum tubes</td>
			<td style="width:244px;">Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">2 ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:192px;">rat restraining holder&#160;</td>
			<td style="width:244px;">Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">250g rat hoder model</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="140">
			<td height="140" style="height:140px;width:192px;">normal salt diet for rats</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:79px;">Rats received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:192px;">SPSS software for statistical analysis</td>
			<td>SPSS Inc,&#160; Chicago; USA&#160;</td>
			<td style="width:120px;">Version 17.0.&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

repeated blood collection from tail vein of non-anesthetized rats with a vacuum blood collection system

血液は、サンプリング場所の数のラットから収集できます。例えば、尾静脈採血の真向かいにあります。ただし、尾静脈薄いは穿刺するは難しいことがあります。さらに、尾静脈低血流には、十分な血液を取得するサンプリング間隔の長い時間が必要です。本報告では、単純な血液サンプリング法、真空採血の収集方法、通常非麻酔のラットに使用ここで、患者から血液サンプルを取得するために使用について説明します。22 G 蝶針の先端が約 20 °、および血の角度で尻尾の先端から約 2-3 cm は va に蝶針のゴムの端を挿入して真空チューブで収集された外側尾静脈のいずれかに挿入されました。cuum 採血管。現在の実験では、実験群は 95% と 90% 初心者グループの成功率であったことを示します。成功率穿刺時間が 2 つのグループ間で類似し。サンプリング期間であった初心者グループと比較実験群で有意に短かった。結論としては、この真空採血方法非麻酔下ラットの尾静脈からの連続採血が可能かつ簡単に学ぶこと、他の信頼性の高い代替従来使用血液サンプリング技術となる可能性があります。ラット。

サンプリング期間、体の質量、および 2 つのグループの採血量 血は、各グループで 2 週間以内に 2 回 10 ラット (男性 5) から採取しました。両方のグループの平均体重が似ていた (272.00 ±9.66 g と 273.70 ±8.87 g)。サンプリング時間は初心者グループと比較実験群で有意に短かった (3.28 ±0.83 分、p 対 2.77 ±0.53 分 < 0.05) (表 1)。
成功率し、2 つのグループの回の穿刺 成功率は 95% (19/20) 実験群と 90% (18/20) 初心者のためのグループ (p > 0.05)。穿刺時間は大幅に異なる 2 つのグループの間なかった (1.85 ± 0.75 分、p 対 1.50 ±0.61 分 > 0.05) (表 2)。この方法は簡単に学ぶこと、そしてトレーニング 2 時間後技術を習得できることが示唆されました。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig1.jpg"> 図 1:2 mL 真空採血管 (左); 22 G 蝶針 (センター) プラスチック製の拘束ホルダー (右).<a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig2.jpg"> 図 2:位置に外側尾静脈 (5 mm 程度) に針の先端が挿入されたおおよそ 20 ° の角度で尾の先端から約 2-3 cm 。<a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig3.jpg"> 図 3:成功した穿刺します。<a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="5">実験群</td>
			<td></td>
			<td colspan="5">初心者のためのグループ</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>性別</td>
			<td>体重 (g)</td>
			<td>収集した血液量 (mL)</td>
			<td>サンプリング時間 (分)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>性別</td>
			<td>体重 (g)</td>
			<td>収集した血液量 (mL)</td>
			<td>サンプリング時間 (分)</td>
		</tr>
<tr>
<td>E1 1</td>
			<td>男性</td>
			<td>291</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.12</td>
			<td></td>
			<td>B1 1</td>
			<td>男性</td>
			<td>282</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.18</td>
		</tr>
<tr>
<td>E1 2</td>
			<td>男性</td>
			<td>291</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.73</td>
			<td></td>
			<td>B1 2</td>
			<td>男性</td>
			<td>282</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.18</td>
		</tr>
<tr>
<td>E2-1</td>
			<td>男性</td>
			<td>276</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.3</td>
			<td></td>
			<td>B2 1</td>
			<td>男性</td>
			<td>264</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.73</td>
		</tr>
<tr>
<td>E2 2</td>
			<td>男性</td>
			<td>276</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.37</td>
			<td></td>
			<td>B2 2</td>
			<td>男性</td>
			<td>264</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.47</td>
		</tr>
<tr>
<td>E3-1</td>
			<td>男性</td>
			<td>267</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.73</td>
			<td></td>
			<td>B3 1</td>
			<td>男性</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.52</td>
		</tr>
<tr>
<td>E3 2</td>
			<td>男性</td>
			<td>267</td>
			<td>1.0</td>
			<td>3.88</td>
			<td></td>
			<td>B3 2</td>
			<td>男性</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.53</td>
		</tr>
<tr>
<td>E4-1</td>
			<td>男性</td>
			<td>263</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.41</td>
			<td></td>
			<td>B4 1</td>
			<td>男性</td>
			<td>289</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.32</td>
		</tr>
<tr>
<td>E4 2</td>
			<td>男性</td>
			<td>263</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.52</td>
			<td></td>
			<td>B4 2</td>
			<td>男性</td>
			<td>289</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.62</td>
		</tr>
<tr>
<td>E5-1</td>
			<td>男性</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.61</td>
			<td></td>
			<td>B5 1</td>
			<td>男性</td>
			<td>277</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.48</td>
		</tr>
<tr>
<td>E5 2</td>
			<td>男性</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.42</td>
			<td></td>
			<td>B5 2</td>
			<td>男性</td>
			<td>277</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.12</td>
		</tr>
<tr>
<td>E6-1</td>
			<td>女性</td>
			<td>285</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.33</td>
			<td></td>
			<td>B6 1</td>
			<td>女性</td>
			<td>274</td>
			<td>0.9</td>
			<td>4.87</td>
		</tr>
<tr>
<td>E6-2</td>
			<td>女性</td>
			<td>285</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.03</td>
			<td></td>
			<td>B6 2</td>
			<td>女性</td>
			<td>274</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.37</td>
		</tr>
<tr>
<td>E7-1</td>
			<td>女性</td>
			<td>271</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.82</td>
			<td></td>
			<td>B7 1</td>
			<td>女性</td>
			<td>268</td>
			<td>1.0</td>
			<td>3.93</td>
		</tr>
<tr>
<td>E7-2</td>
			<td>女性</td>
			<td>271</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.42</td>
			<td></td>
			<td>B7 2</td>
			<td>女性</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.82</td>
		</tr>
<tr>
<td>E8-1</td>
			<td>女性</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>1.93</td>
			<td></td>
			<td>B8-1</td>
			<td>女性</td>
			<td>262</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.07</td>
		</tr>
<tr>
<td>E8-2</td>
			<td>女性</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.05</td>
			<td></td>
			<td>B8 2</td>
			<td>女性</td>
			<td>262</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.67</td>
		</tr>
<tr>
<td>E9-1</td>
			<td>女性</td>
			<td>273</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.52</td>
			<td></td>
			<td>B9 1</td>
			<td>女性</td>
			<td>281</td>
			<td>1.2</td>
			<td>4.38</td>
		</tr>
<tr>
<td>E9-2</td>
			<td>女性</td>
			<td>273</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.17</td>
			<td></td>
			<td>B9-2</td>
			<td>女性</td>
			<td>281</td>
			<td>1.2</td>
			<td>4.57</td>
		</tr>
<tr>
<td>E10 1</td>
			<td>女性</td>
			<td>261</td>
			<td>1.2</td>
			<td>1.82</td>
			<td></td>
			<td>B10 1</td>
			<td>女性</td>
			<td>275</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.53</td>
		</tr>
<tr>
<td>E10 2</td>
			<td>女性</td>
			<td>261</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.25</td>
			<td></td>
			<td>B10 2</td>
			<td>女性</td>
			<td>275</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.28</td>
		</tr>
<tr>
<td>平均</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>2.77</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>3.28</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">最初の血のコレクションの実験群ラットの en-1: シリアル番号。</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">2 回目の採血の実験群ラットの en-2: シリアル番号。</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">最初の血のコレクションの初心者グループのラットの Bn-1: シリアル番号。</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">2 回目の採血の初心者グループのラットの Bn-2: シリアル番号。</td>
		</tr>
</tbody></table>表 1: 血の結果は実験グループと初心者グループに収集されます。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>血のコレクションの時間</td>
			<td>平均穿刺回</td>
			<td>時間あける</td>
			<td>2 回を穿刺します。</td>
			<td>3 回を穿刺します。</td>
			<td>失敗しました</td>
			<td>成功率</td>
		</tr>
<tr>
<td>実験群</td>
			<td>20</td>
			<td>1.50 ±0.61</td>
			<td>11</td>
			<td>8</td>
			<td>0</td>
			<td>1</td>
			<td>95%</td>
		</tr>
<tr>
<td>初心者のためのグループ</td>
			<td>20</td>
			<td>1.85 ± 0.75</td>
			<td>7</td>
			<td>9</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
			<td>90%</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">1 つの時間穿刺: ラット最初の穿刺後の成功の血のコレクションの数</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">穿刺: 成功した血のコレクションに 2 番目の穿刺後ラットの数の 2 倍します。</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">3 回穿刺: ラット 3 穿刺後の成功の血のコレクションの数</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="5">失敗しました: ラットの数 3 穿刺後採血に失敗しました</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>表 2 穿刺時間と実験群・初心者グループの成功率の比較。

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Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

ここでは、吸引チューブを用いた非麻酔下ラットの単純な尾静脈採血法について述べる。このメソッドは、血液への直接暴露のリスクを低減し、簡単に単一の穿刺から複数のサンプルを取ってします。

真空の血のコレクション システムと非麻酔下ラットの尾静脈からの採血を繰り返す

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

35.4K ビュー.  Jianghan University. ここでは、吸引チューブを用いた非麻酔下ラットの単純な尾静脈採血法について述べる。このメソッドは、血液への直接暴露のリスクを低減し、簡単に単一の穿刺から複数のサンプルを取ってします。

ビデオ: Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Collection Protocol for Human Pancreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation of pancreas recovered from cadaveric organ donors. The pancreas is divided into 3 main regions (head, body, tail) followed by serial transverse sections throughout the medial to lateral axis. Alternating sections are used for fixed paraffin and fresh frozen blocks and remnant samples are minced for snap frozen sample preparations, either with or without RNAse inhibitors, for DNA, RNA, or protein isolation. The overall goal of the pancreas dissection procedure is to sample the entire pancreas while maintaining anatomical orientation.
Endocrine cell heterogeneity in terms of islet composition, size, and numbers is reported for human islets compared to rodent islets 1. The majority of human islets from the pancreas head, body and tail regions are composed of insulin-containing &beta;-cells followed by lower proportions of glucagon-containing &alpha;-cells and somatostatin-containing &delta;-cells. Pancreatic polypeptide-containing PP cells and ghrelin-containing epsilon cells are also present but in small numbers. In contrast, the uncinate region contains islets that are primarily composed of pancreatic polypeptide-containing PP cells 2. These regional islet variations arise from developmental differences. The pancreas develops from the ventral and dorsal pancreatic buds in the foregut and after rotation of the stomach and duodenum, the ventral lobe moves and fuses with the dorsal 3. The ventral lobe forms the posterior portion of the head including the uncinate process while the dorsal lobe gives rise to the rest of the organ. Regional pancreatic variation is also reported with the tail region having higher islet density compared to other regions and the dorsal lobe-derived components undergoing selective atrophy in type 1 diabetes4,5.
Additional organs and tissues are often recovered from the organ donors and include pancreatic lymph nodes, spleen and non-pancreatic lymph nodes. These samples are recovered with similar formats as for the pancreas with the addition of isolation of cryopreserved cells. When the proximal duodenum is included with the pancreas, duodenal mucosa may be collected for paraffin and frozen blocks and minced snap frozen preparations.

This video demonstrates a dissection procedure for processing human pancreas into multiple storage formats. Anatomical orientation is maintained throughout the pancreatic regions to allow definition of regional islet composition and density.

ヒト膵臓の収集プロトコル

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

医学

Dried Blood Spot Collection of Health Biomarkers to Maximize Participation in Population Studies

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, biomarkers need to be easy to obtain, transport, and analyze. Dried Blood Spots meet this need, and can be collected in the field with high response rates. These elements are particularly important in longitudinal study designs including interventions where attrition is critical to avoid, and high response rates improve the interpretation of results. Dried Blood Spot sample collection is simple, quick, relatively painless, less invasive then venipuncture, and requires minimal field storage requirements (i.e.&#160;samples do not need to be immediately frozen and can be stored for a long period of time in a stable freezer environment before assay). The samples can be analyzed for a variety of different analytes, including cholesterol, C-reactive protein, glycosylated hemoglobin, numerous cytokines, and other analytes, as well as provide genetic material. DBS collection is depicted as employed in several recent studies.

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease or health. In population and social sciences, biomarkers need to be easy to obtain, transport, and analyze. Dried Blood Spot (DBS) collection meets this need, can be collected in the field with high response rates&#160;and analyzed for a variety of biomarkers.

集団研究への参加を最大化するために健康バイオマーカーの血液スポットコレクション乾燥させ

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, ...

Collection, Isolation, and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Samples

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female genital tract (FGT). Because heterosexual transmission now represents the dominant mechanism of HIV transmission, and given the continual spread of sexually transmitted infections (STIs), it is critical to understand the interplay between host and pathogen at the genital mucosa. The substantial gaps in knowledge around FGT immunity are partially due to the difficulty in successfully collecting and processing mucosal samples. In order to facilitate studies with sufficient sample size, collection techniques must be minimally invasive and efficient. To this end, a protocol for the collection of cervical cytobrush samples and subsequent isolation of cervical mononuclear cells (CMC) has been optimized. Using ex vivo flow cytometry-based immunophenotyping, it is possible to accurately and reliably quantify CMC lymphocyte/monocyte population frequencies and phenotypes. This technique can be coupled with the collection of cervical-vaginal lavage (CVL), which contains soluble immune mediators including cytokines, chemokines and anti-proteases, all of which can be used to determine the anti- or pro-inflammatory environment in the vagina.

The use of cytobrush sampling to collect lymphocytes and monocytes from the endocervix is a minimally invasive technique that provides samples for analysis of female genital tract immunity. In this protocol, we describe the collection of cytobrush samples and immune cell isolation for flow cytometry assays.

人間頸管サンプルの採取、単離、およびフローサイトメトリー分析

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

ラットにおける同種血血栓による虚血性脳卒中のための塞栓中大脳動脈閉塞（MCAO）

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Routine Screening Method for Microparticles in Platelet Transfusions

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood banks. Cells fragment off microparticles (MP) when they are stressed. Blood and blood components may contain cellular fragments from a variety of cells, most notably from activated platelets. When performing their roles as innate immune cells and major players in coagulation and hemostasis, platelets change shape and generate microparticles. With dynamic light scattering (DLS)-based microparticle detection, it is possible to differentiate activated (high microparticle) from non-activated (low microparticle) platelets in transfusions, and optimize the use of this scarce blood product. Previous research suggests that providing non-activated platelets for prophylactic use in hematology-oncology patients could reduce their risk of becoming refractory and improve patient care. The goal of this screening method is to routinely differentiate activated from non-activated platelets. The method described here outlines the steps to be performed for routine platelet inventory management in a hospital blood bank: obtaining a sample from a platelet transfusion, loading the sample into the capillary for DLS measurement, performing the DLS test to identify microparticles, and using the reported microparticle content to identify activated platelets.

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative in hospital blood banks. The goal is to differentiate activated from non-activated platelets to optimize the use of platelets. Providing non-activated platelets to hematology-oncology patients might reduce their high risk to become refractory.

血小板輸血で微粒子のスクリーニング法のルーチン

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

ラットの血液サンプル コレクションの代替方法として鎖骨下静脈穿刺

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Simultaneous Electrocardiography Recording and Invasive Blood Pressure Measurement in Rats

For studies related to cardiovascular physiology or pathophysiology, blood pressure (BP) and electrocardiography are basic observational parameters. Research focusing on cardiovascular disease models, potential cardiovascular therapeutic targets or pharmaceutical agents requires assessment of systemic arterial pressure and heart rhythm changes. In situations where radio telemetry systems are not available or affordable, the technique of femoral artery cannulation is an alternative way to obtain intra-arterial pressure waveform recordings and systemic BP measurements. This technique is economical and can be performed with standard equipment in animal facilities. However, invasive arterial pressure recording requires cannulation of small arteries, which can be a challenging surgical skill. Here, we present step-by-step protocols for femoral artery cannulation procedures. Key procedures include the calibration of the data acquisition system, tissue dissection and femoral artery cannulation, and setup of the arterial cannulation system for pressure recording. Surface electrocardiography recording procedures are also included. We also present examples of BP recordings from normotensive and hypertensive rats. This protocol allows reliable direct recordings of systemic BP with simultaneous electrocardiography.

Here, we describe a setup for simultaneous recording of electrocardiography and intra-arterial blood pressure (BP) in experimental rats, which can be done with standard equipment in animal facilities and can be applied to physiological or pharmacological studies to investigate pathogenic or therapeutic mechanisms in cardiovascular medicine.

心電図の同時記録と侵襲的血圧ラットにおける測定

For studies related to cardiovascular physiology or pathophysiology, blood pressure (BP) and electrocardiography are basic observational parameters. ...

A New Best Practice for Validating Tail Vein Injections in Rat with Near-infrared-Labeled Agents

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part of many experimental procedures where reagents need to be introduced directly into the bloodstream. Unwittingly, the injection can be subcutaneous, possibly altering the scientific outcomes. Utilizing a nanoemulsion-based biological probe with an incorporated near-infrared fluorescent (NIRF) dye, this method offers the capability of imaging a successful tail vein injection in vivo. With the use of a NIRF imager, images are taken before and after the injection of the agent. An acceptable IV injection is then qualitatively or quantitatively determined based on the intensity of the NIRF signal at the site of injection.

Here we present a method to validate tail vein injections in rats by utilizing near-infrared fluorescence imaging data from dyes incorporated into agents or biological probes. The tail is imaged before and after the injection, the fluorescent signal is quantified, and an assessment of the injection quality is made.

近く-赤外線-ラベル エージェントとラットの尾静脈注射を検証するための新しいベスト プラクティス

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part ...

Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in research work. Tail blood collection is a popular method when a small amount of blood sample is needed. Orbital artery could be considered if a large amount of blood is needed but this blood collection method has ethical issues. Formerly, we demonstrated the feasibility and safety of blood sample collection through subclavian vein puncture in rats, and here we investigate whether this method could be used in mice. We report that this method is safe and practical for blood collection in mice. Blood collection through the subclavian vein puncture in mice can be a convenient method in daily research works.

Here, we present a protocol to take blood samples from the subclavian vein of mice.

マウスの鎖骨下静脈穿刺による血液採取

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in ...

Simultaneous Flow Cytometric Characterization of Multiple Cell Types Retrieved from Mouse Brain/Spinal Cord Through Different Homogenization Methods

Recent advances in viral vector and nanomaterial sciences have opened the way for new cutting-edge approaches to investigate or manipulate the central nervous system (CNS). However, further optimization of these technologies would benefit from methods allowing rapid and streamline determination of the extent of CNS and cell-specific targeting upon administration of viral vectors or nanoparticles in the body. Here, we present a protocol that takes advantage of the high throughput and multiplexing capabilities of flow cytometry to allow a straightforward quantification of different cell subtypes isolated from mouse brain or spinal cord, namely microglia/macrophages, lymphocytes, astrocytes, oligodendrocytes, neurons and endothelial cells. We apply this approach to highlight critical differences between two tissue homogenization methods in terms of cell yield, viability and composition. This could instruct the user to choose the best method depending on the cell type(s) of interest and the specific application. This method is not suited for analysis of anatomical distribution, since the tissue is homogenized to generate a single-cell suspension. However, it allows to work with viable cells and it can be combined with cell-sorting, opening the way for several applications that could expand the repertoire of tools in the hands of the neuroscientist, ranging from establishment of primary cultures derived from pure cell populations, to gene-expression analyses and biochemical or functional assays on well-defined cell subtypes in the context of neurodegenerative diseases, upon pharmacological treatment or gene therapy.

We present a flow cytometry method to identify simultaneously different cell types retrieved from mouse brain or spinal cord. This method could be exploited to isolate or characterize pure cell populations in neurodegenerative diseases or to quantify the extent of cell targeting upon in vivo administration of viral vectors or nanoparticles.

異なる均質化法を通じてマウス脳/脊髄から取り出された複数の細胞型の同時フロー細胞特性評価

Recent advances in viral vector and nanomaterial sciences have opened the way for new cutting-edge approaches to investigate or manipulate the central ...

真空の血のコレクションシステムと非麻酔下ラットの尾静脈からの採血を繰り返す

要約

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ヒト膵臓の収集プロトコル

集団研究への参加を最大化するために健康バイオマーカーの血液スポットコレクション乾燥させ

人間頸管サンプルの採取、単離、およびフローサイトメトリー分析

ラットにおける同種血血栓による虚血性脳卒中のための塞栓中大脳動脈閉塞（MCAO）

血小板輸血で微粒子のスクリーニング法のルーチン

ラットの血液サンプルコレクションの代替方法として鎖骨下静脈穿刺

心電図の同時記録と侵襲的血圧ラットにおける測定

近く-赤外線-ラベルエージェントとラットの尾静脈注射を検証するための新しいベストプラクティス

マウスの鎖骨下静脈穿刺による血液採取

異なる均質化法を通じてマウス脳/脊髄から取り出された複数の細胞型の同時フロー細胞特性評価

真空の血のコレクション システムと非麻酔下ラットの尾静脈からの採血を繰り返す

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集団研究への参加を最大化するために健康バイオマーカーの血液スポットコレクション乾燥させ

人間頸管サンプルの採取、単離、およびフローサイトメトリー分析

ラットにおける同種血血栓による虚血性脳卒中のための塞栓中大脳動脈閉塞（MCAO）

血小板輸血で微粒子のスクリーニング法のルーチン

ラットの血液サンプル コレクションの代替方法として鎖骨下静脈穿刺

心電図の同時記録と侵襲的血圧ラットにおける測定

近く-赤外線-ラベル エージェントとラットの尾静脈注射を検証するための新しいベスト プラクティス

マウスの鎖骨下静脈穿刺による血液採取

異なる均質化法を通じてマウス脳/脊髄から取り出された複数の細胞型の同時フロー細胞特性評価

真空の血のコレクションシステムと非麻酔下ラットの尾静脈からの採血を繰り返す

ラットの血液サンプルコレクションの代替方法として鎖骨下静脈穿刺

近く-赤外線-ラベルエージェントとラットの尾静脈注射を検証するための新しいベストプラクティス