이 프로토콜은 연구원이 개별 마우스에 있는 폐 기능의 반복 측정을 능력을 발휘하는 것을 허용할 것입니다, 실험가가 감소하고 각 실험에 필요한 마우스의 수를 감소시킵니다. 이 프로토콜의 주요 장점은 구강 또는 목의 외상성 해부를 통해 기관의 시각화를 필요로하지 않는다는 것입니다. 이 방법은 천식, COPD, 폐기종 및 폐 섬유증과 같은 만성 및 진보적인 폐 질환을 연구하는 연구자에게 특별한 가치가 있을 것입니다.
이 프로토콜의 시각적 데모는 복부 목의 피부를 통해 기관을 식별하는 방법을 이해하는 것이 방법의 중심이기 때문에 중요합니다. 앤드류 넬슨과 함께 기술을 시연하는 것은 내 실험실에서 수의사 케이트 놀란이 될 것입니다. 삽관 플랫폼을 만들려면 15~20cm 길이의 3-0 실크를 반으로 접고 스레드 끝을 3인치 3링 바인더 의 상단에 테이프로 묶습니다.
적절한 크기와 길이의 캐뉼라를 선택하고 카테터의 말단 끝에서 벨을 자른다. 연마 용지로 절단 된 표면을 부드럽게하여 둥근 팁을 만들고 베벨에서 약 1 센티미터 떨어진 캐뉼라에서 약간 구부러집니다. 재료가 준비되면 마취 된 마우스에서 발가락 꼬집어 에 대한 응답부족을 확인하고 플랫폼의 각진 표면 의 상단에있는 실크 실 주위의 상부 절개를 연결하여 마우스를 supine 위치에 놓습니다.
마우스가 등갈 에 정사각형으로 배치되면, 부드럽게 꼬리의 기초를 잡고 테이블쪽으로 꼬리를 철회. 꼬리 의 바닥에 테이프 조각을 놓고 마우스를 고정하고 복부 자궁 경부 부위에 탈모 크림을 바르습니다. 30~45초 후에는 마른 거즈를 사용하여 크림을 제거하고 식염수 또는 증류수로 피부를 완전히 헹구십시오.
지배적이지 않은 손에 집게를 사용하여, 캐뉼라의 도입을 위해 입을 충분히 열어주는 방식으로 혀를 부드럽게 철회합니다. 지배적 인 손으로, 약간의 굴곡에 해반되는 끝이 동물의 입의 지붕에 대해 있도록 입으로 캐뉼라를 진행합니다. 주브리움이 타액 땀샘을 대체하고 기관지를 덮는 근육을 평평하게 하기 위해 주브리움에 도달할 때까지 혀를 풀어 주며 복부 목을 따라 밀폐된 집게의 평평한 가장자리를 밀어내십시오.
기관체는 흰색 선으로 경피적으로 나타납니다. 필요한 경우, 코달 방향으로 피부에 긴장을 유지하면서 집게를 회전하여 측면 변위 타액 선이 최고조에 달하고 기관 주위의 대비를 더 높입니다. 손목의 동시 굴곡으로 지배적 인 손을 수호하고 캐뉼라의 황실 끝을 동시에 잡는 동시에 캐뉼라를 전진시다.
캐뉼라가 제대로 배치된 경우 기관 내에서 관찰됩니다. 적절한 배치를 확인하려면 폐 인플레이션 전구를 캐뉼라에 연결하고 장치의 동시 우울증과 흉부 확장을 관찰하십시오. 캐뉼라를 대체하지 않고, 조심스럽게 삽관 플랫폼에서 마우스의 절개를 풀고 마우스를 수평 플랫폼에 옮은 다음, 공실기의 어댑터에 캐뉼라를 부착하고 깊은 인플레이션에 따라 호흡 저항을 측정하기 전에 60 초 동안 마우스를 환기시하십시오.
절차가 완료되면 마우스를 따뜻하게 한 플랫폼으로 옮기고 가벼운 발가락 이나 꼬리 핀치를 통해 일정한 자극을 제공하여 자발적인 호흡을 장려합니다. 일단 자발적인 호흡이 관찰되면, 시각적으로 동물을 감시합니다. 호흡 속도가 정상으로 돌아오면 허브 수준에서 캐뉼라를 잡고 동물의 입에서 캐뉼라가 완전히 제거 될 때까지 마우스에서 조심스럽게 튜브를 밀고 멀리 당깁니다.
일단 추방되면, 완전히 외래때까지 모니터링과 열 지원깨끗한 복구 케이지로 마우스를 전송합니다. 본 대표적인 실험에서, 호흡저항은 기계적 환기의 5및 60초 동안 25cm의 물에서 깊은 인플레이션에 따라 강제 진동 기술을 사용하여 0, 3, 10 및 17일에 측정하였다. 각 균주 내에서 측정된 호흡 저항에 있는 유의한 다름은 각 긴장 내의 시간 점 사이에서 관찰되지 않았으며, 시간이 지남에 따라 호흡 저항의 증가의 부재가 4개의 연속적인 시간 점을 통해 호흡기에서 기능적으로 중요한 삽관 외상 관련 염증의 부족을 나타낸다는 것을 건의합니다.
이 관관 절차는 실험 물질의 설치 및 호흡기 기능의 직렬 모니터링을 위한 기관에 대한 액세스를 제공하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술은 침습적 기관 절제술없이 폐 기능의 평가를 허용, 동일한 마우스 내에서 만성 및 진보적 인 질병의 여러 시간 지점에서 모니터링을 용이하게.
