Este protocolo permitirá que os pesquisadores realizem medidas repetidas da função pulmonar em camundongos individuais, diminuindo a variabilidade experimental e reduzindo o número de camundongos necessários para cada experimento. A principal vantagem deste protocolo é que ele não requer visualização da traqueia através da cavidade oral ou dissecação traumática do pescoço para intubação. Esse método será de especial valor para os pesquisadores que estudam doenças pulmonares crônicas e progressivas, como asma, DPOC, enfisema e fibrose pulmonar.
A demonstração visual deste protocolo é fundamental porque entender como identificar a traqueia através da pele do pescoço ventral é central para o método. Demonstrando a técnica com Andrew Nelson será Kate Nolan, veterinária do meu laboratório. Para criar uma plataforma de intubação, dobre um comprimento de 15 a 20 centímetros de seda de 3-0 ao meio e tape as extremidades do fio até o topo de um aglutinante de três anéis de três polegadas.
Selecione uma cânula do tamanho e comprimento apropriados e corte um bisel na ponta distal do cateter. Suavize a superfície de corte com papel abrasivo para criar uma ponta arredondada e faça delicadamente uma leve curvação na cânula a aproximadamente um centímetro do bisel. Quando os materiais estiverem prontos, confirme a falta de resposta ao aperto do dedo do dedo em um rato anestesiado e enganque os incisivos superiores ao redor da linha de seda na parte superior da superfície angular da plataforma para suspender o mouse na posição supina.
Uma vez que o mouse esteja posicionado diretamente em recumbência dorsal, segure suavemente a base da cauda e retraia a cauda em direção à mesa. Coloque um pedaço de fita sobre a base da cauda para fixar o mouse e aplique creme depilatório na região ventral-cervical. Após 30 a 45 segundos, use gaze seca para remover o creme e enxágue bem a pele com água salina ou destilada.
Usando fórceps na mão não dominante, retraia suavemente a língua de uma maneira que abre suficientemente a boca para a introdução da cânula. Com a mão dominante, avance a cânula para a boca de tal forma que o final que é distal até a ligeira curva é contra o céu da boca do animal. Solte a língua e deslize a borda plana dos fórceps fechados caudalmente ao longo do pescoço ventral até que o manúbrio seja alcançado para deslocar lateralmente as glândulas salivares e achatar o músculo que cobre a traqueia.
A traqueia aparecerá transcutânea como uma linha branca. Se necessário, gire os fórceps em uma direção craniodorsal mantendo a tensão na pele em uma direção caudal para fazer com que as glândulas salivares deslocadas lateralmente apequem o pico e crie mais contraste em torno da traqueia. Supintando a mão dominante com flexão simultânea do pulso, avance a cânula ao mesmo tempo em que angling a ponta distal da cânula ventrally.
Se a cânula tiver sido devidamente colocada, ela será observada dentro da traqueia. Para confirmar uma colocação adequada, conecte uma lâmpada de inflação pulmonar à cânula e observe a expansão torácica com depressão simultânea do dispositivo. Sem deslocar a cânula, retire cuidadosamente os incisivos do mouse da plataforma de intubação e transfira o mouse para uma plataforma horizontal, em seguida, conecte a cânula ao adaptador no ventilador e, após uma inflação profunda, ventile o mouse por 60 segundos antes de medir a resistência respiratória.
Uma vez concluído o procedimento, transfira o mouse para uma plataforma aquecida e forneça estimulação constante através de pinças leves ou traseiras para incentivar a respiração espontânea. Uma vez observada a respiração espontânea, continue monitorando visualmente o animal. Quando a taxa de respiração voltar ao normal, segure a cânula ao nível do cubo e puxe suavemente o tubo cranialmente e longe do rato até que a cânula seja completamente removida da boca do animal.
Uma vez extubado, transfira o mouse para uma gaiola de recuperação limpa com suporte térmico com monitoramento até totalmente ambulatorial. Neste experimento representativo, a resistência respiratória foi medida nos dias 0, 3, 10 e 17, utilizando a técnica de oscilação forçada após uma inflação profunda de 25 centímetros de água mantida por cinco e 60 segundos de ventilação mecânica. Não foram observadas diferenças significativas na resistência respiratória medida entre qualquer um dos pontos de tempo dentro de cada cepa, sugerindo que a ausência de aumento da resistência respiratória ao longo do tempo indica falta de inflamação associada ao trauma de intubação funcionalmente significativa no sistema respiratório ao longo de quatro pontos de tempo consecutivos.
Este procedimento de intubação pode ser utilizado para proporcionar acesso à traqueia para a instalação de substâncias experimentais e o monitoramento em série da função respiratória. Essa técnica permite a avaliação da função pulmonar sem traqueostomia invasiva, facilitando o monitoramento em múltiplos pontos de tempo em doenças crônicas e progressivas dentro do mesmo camundongo.
