生体内心筋修復用ヒトiPS細胞由来のメッシュ状の設計心臓組織の調製

このプロトコルは、ヒト誘発身体部分およびSTEM細胞由来の心臓細胞に由来するメッシュ状の人工心臓組織を作成するための高貴で容易な方法を記述する。組織形状の柔軟性と保存された組織機能のスケーラビリティは、この技術の主な利点です。埋め込まれたメッシュ形状ETは、ラット心筋梗塞モデルにおける心臓構造および機能を回復させることができる。

心臓再生療法での使用のためのその実現可能性を確認する。これらの技術は、再現性のあるヒトSTEM細胞処理と一貫した結果のための組織培養スキルを必要とします。硬化したPDMSシートを適切なサイズに切断して、シリコーン接着剤でシートを接着し、幅0.5ミリメートル幅7ミリメートル、高さ2.5ミリメートルの長方形ポストをずらした位置で21~20.5ミリメートルの長方形トレイを製造できるようにします。

2 行の柱の間の水平方向の間隔は 2.5 ミリメートルにする必要があります。PBSで1%ポロクサマー407で金型を1時間コーティングする前に、20分間120°Cでトレイをオートクレーブします。その後、PBSで鋳型を十分に洗い流し、金型を6ウェルプレートの1つの井戸に入れます。

系統解析では、心筋細胞の細胞と内皮および血管壁細胞プロトコルを組み合わせます。壁画細胞の最終的な濃度が、構成毎に6倍の細胞数の合計10〜20%となるようにする。酸溶性ラットテールコラーゲンタイプ1溶液の133マイクロリットルとアルカリバッファーの17マイクロリットルを氷の上の10倍最小必須培地の17マイクロリットルに混合します。

その後、コラーゲン溶液に67マイクロリットルの基部膜マトリックスを加えます。次に、細胞を遠心分離し、胎児ウシ血清と抗生物質を添加した高グルコースダルベックコのミニマルエッセンシャル培地の167マイクロリットルでペレットを再懸濁する。マトリックス溶液上の細胞を氷の上で混ぜます。

次に、細胞マトリックス懸濁液の400マイクロリットルをポロクサマー407被覆PDMS組織型に慎重に注ぎ込んだ。セルマトリックス混合物を標準細胞培養インキュベーターで摂氏37度、炭酸ガス5%で60分間インキュベートします。組織が形成されたら、4ミリリットルのECT培養培地で慎重にモールドを浸し、14日間細胞培養インキュベーターにプレートを戻す。

ECTの注入の前に、あなたは慎重に負荷のポストからECTを取除くために細かい鉗子を殺菌した。組織金型は、さまざまなパターン、ポスト長、ポスト間隔で製造され、異なる最終的なECT形状を生成することができます。この解析では、幅が 2.5 ミリメートルの長さ 7 ミリの長いポストを持つ金型を使用しました。

ポロクサマー407は、細胞のカビへの接着を防止し、14日間での急激なゲル圧縮に続く特徴的なメッシュ構造の形成を可能にする。この構造は、ECTが金型から解放された後も維持されます。作製された組織の構造は、幅約1.5センチメートル、厚さ0.5ミリメートルです。

そして、メッシュ内の各バンドルの幅は平均で約0.5ミリメートルです。同じずれたポスト設計で4倍の大きな金型から2400万個の細胞を含む3センチメートルの最終幅メッシュECTを生成することが可能です。この大きなメッシュECTは、金型から容易に除去することができ、より小さなメッシュECTと同等の力のローカル行為を生成します。

最終的なゲルの欠陥を感じないように気泡を発生させることなく、細胞マトリックス混合物を組織型に均等に注ぐことが重要です。契約者の機能特性。4 番目の周波数関係は、内蔵システムを使用して実行できます。

私たちの究極の目標は、ECTパラダイムを大規模な動物前臨床試験を利用した臨床療法への翻訳です。