In Vivo Miyokardiyal Onarım için İnsan iPS Hücrelerinden Elde Edilen Örgü Şekilli Mühendislik Kardiyak Dokuların Hazırlanması

Bu protokol, insan kaynaklı vücut parçaları ve STEM hücre kaynaklı kalp hücrelerinden elde edilen örgü şeklinde tasarlanmış kardiyak dokular oluşturmak için asil ve kolay bir yöntem açıklar. Doku geometrisinin esnekliği ve korunmuş doku fonksiyonunun ölçeklenebilirliği bu tekniğin başlıca avantajlarıdır. İmplante örgü şekli ECT'ler bir sıçan miyokard infarktüsü modelinde kardiyak yapı ve fonksiyon geri yükleyebilirsiniz.

Kardiyak rejeneratif tedavide kullanım için fizibilitesini teyit. Bu teknikler tutarlı sonuçlar için tekrarlanabilir insan KÖK hücre işleme ve doku kültürü becerileri gerektirir. Sancaklı pozisyonlarda yedi milimetre uzunluğunda 0,5 milimetre genişliğinde ve 2,5 milimetre yüksekliğinde dikdörtgen direkler ile 21 tarafından 20,5 milimetrelik dikdörtgen tepsi imal etmek için sac silikon yapıştırıcı ile yapıştırılmış izin vermek için uygun boyutta bir kürlenmiş PDMS levha keserek başlayın.

İki satır lık mesaj arasındaki yatay aralık 2,5 milimetre olmalıdır. Tepsiyi 120 santigrat derecede 20 dakika boyunca otoklavlayın ve kalıbı pbs'de bir saat boyunca %1 Poloxamer 407 ile kaplayın. Daha sonra kalıbı PBS ile iyice durulayın ve kalıbı altı kuyulu bir tabak kuyuya yerleştirin.

Soy analizi için, kardiyomiyosit artı endotel ve vasküler duvar hücre protokolleri hücreleri birleştirmek. Böylece duvar hücrelerinin son konsantrasyonu, yapı başına altı hücreye altı kat 10'luk bir toplam hücre sayısının %10 ila %20'si kadardır. Mix 133 asit çözünür Sıçan Kuyruğu kollajen tip bir çözelti ve 17 mikrolitre Alkali Tampon 17 mikrolitre 10X Minimum Essential Medium buz üzerinde.

Sonra kollajen çözeltisi için Bodrum Membran Matrix 67 mikrolitre ekleyin. Sonra, hücreleri santrifüj ve fetal sığır serum ve antibiyotikler ile desteklenen Yüksek Glikoz Dulbecco Minimal Essential Medium 167 mikrolitre pelet resuspend. Matris çözeltisindeki hücreleri buz üzerinde karıştırın.

Daha sonra dikkatlice poloxamer 407 kaplı PDMS doku kalıbına hücre matris süspansiyon 400 mikrolitre dökün. Standart hücre kültürü kuvözdeki hücre matris karışımını 37 santigrat derecede ve %5 karbondioksitle 60 dakika kuluçkaya yatırın. Doku oluştuğunda, dikkatle EKT kültür orta dört mililitre ile kalıp ıslatın ve 14 gün boyunca hücre kültürü kuluçka için plaka dönmek.

EKT implantasyonundan önce, EKT'yi yükleme direklerinden dikkatlice çıkarmak için ince prömiyerleri sterilize ettiniz. Doku kalıpları farklı son EKT geometrileri oluşturmak için çeşitli desenler, post uzunlukları ve sonrası aralıkları ile imal edilebilir. Bu analiz için, 2,5 milimetre genişliğinde aralıklarla yedi milimetre uzunluğunda direkler ile bir kalıp kullanılmıştır.

Poloxamer 407, hücrelerin kalıba yapışmasını önler ve 14 gün içinde hızlı jel sıkıştırmasını takiben karakteristik bir örgü yapısının oluşmasını sağlar. EkT kalıptan çıktıktan sonra bile yapı korunur. Fabrikasyon doku yapısı yaklaşık 1,5 santimetre genişliğinde ve 0,5 milimetre kalınlığındadır.

Ve kafesteki her bir demet genişliği ortalama olarak yaklaşık 0,5 milimetredir. Aynı şaşırtıcı post tasarımı ile dört kat daha büyük bir kalıptan 24 milyon hücre içeren 3 santimetrelik son genişlikte bir mesh ECT oluşturmak mümkündür. Bu büyük kafes EKT de kolayca kalıp kaldırılabilir ve küçük örgü EKT eşdeğer kuvvet yerel bir hareket oluşturur.

Bu son jel duygu kusurları önlemek için kabarcıklar üretmeden doku kalıbına eşit hücre matris karışımı dökmek önemlidir. Yüklenicinin işlevsel karakterizasyonu. ve dördüncü frekans ilişkileri dahili sistemler kullanılarak gerçekleştirilebilir.

Nihai hedefimiz, EKT paradigmalarının büyük hayvan klinik öncesi çalışmaları kullanan klinik tedavilere çevrilmesidir.