オープングローブの怪我は、治療を受けずに放置すると、視力の永久的な損失につながる可能性があります。この前部区分の器官培養モデルは動物のテストの必要性の中でこれらの傷害の査定を可能にする。このプロトコルは、臓器培養プラットフォームで3日以上の傷害を安定させるために、開いた地球の傷害および治療を追跡することを可能にする。
この手順を実証するには、ドクター・ボイス研究所の研究技術者であるトレント・ピアソンが行われます。まず、外科的なカーテンと、大解解に必要な器具を置きます。解剖顕微鏡で目を視覚化するためのバイオセーフティキャビネットを設置します。
皿アセンブリのためのバイオ安全キャビネットを設定します。バイオセーフティキャビネット内にオープングローブ傷害誘導ワークスペースを設置します。穿刺プラットフォームの前のラボジャックにクロストラッキングバイスを配置します。
余分な眼窩組織を除去し、抗生物質抗ミコティックPBSで目を洗浄した後、ガーゼを浸した抗生物質抗ミコティックPBSに目を見る。無菌カミソリやメスを使用して、眼の赤道付近に切開を作成します。その後、湾曲した外科用ハサミを使用して眼を半球化し、前眼を分離する。
シャベルとしてマイクロハサミを使用して、前部セグメントから膜房をすくい、マイクロハサミで前部セグメントからレンズを取り除きます。徐々に、骨柱状のメッシュワークが見えるまで、虹彩根に虹彩根を徐々にカットします。カットを虹彩の周囲に360度伸ばし、すべての骨柱状メッシュワーク領域を露出させ、必要に応じて、骨柱状メッシュワークを覆う残りの残存虹彩をクリーンアップします。
毛様体残骸を後部にトリミングし、組織の薄いバンドを1ミリメートルだけ残します。ペトリ皿に前セグメントを配置した後。綿棒を媒体に湿らし、角膜の中央にやさしく手を出して顔料を取り除きます。
鉗子で目を保持し、拭くことによって強結体の周りに余分な顔料を取り除きます。逆立ち前部セグメントを底皿の高い領域の上に置き、角膜が高い領域の中心に残っていることを確認します。クランプリングを新しく配置した前部セグメントの上に置き、Lキーでねじを軽く締めます。
Oリングを備えた両方の流体コネクタを、皿の底部のネジ付きポートに取り付けます。最初の流体コネクタには、18ゲージ90度曲がった針ハブ、チューブの長さ、18ゲージ針ハブ、ナイロンシリンジフィルター、三方弁、および媒体で満たされた20ミリメートルの注射器を取り付けます。第2の流体コネクタには、18ゲージ90度曲げ針ハブ、チューブの長さ、18ゲージの針ハブ、第1の流体コネクタのために実証された3方向バルブを取り付け、滅菌10ミリリットルシリンジのバレル部分を取り付け、液体および気泡を捕捉するための貯水池として機能します。
3方向バルブをシリンジに対して適切に開いたままにして、最初の流体コネクタポートを使用して、システムを通してメディアを静かに押し込みます。前セグメントを膨らませるには、チューブをメディアで満たし、最終的に貯水池を満たします。優しく皿にメディアを押して泡を取り出し、泡を押し出すために皿を反転します。
前セグメントの臓器培養皿を細胞培養器に入れます。チューブラインをインキュベータードアの底面から外に向けて、ドアの開閉に干渉しないようにします。圧力トランスデューサの器械の貯蔵所と管ラインを置く。
側面の3方向バルブを、PBSがラインを流れる間に設定された圧力トランスデューサに接続して、気泡がチューブラインに入らないようにします。開いた傷害の誘導のための準備されたバイオ安全キャビネットの内部は直径4.5ミリメートルまでの物に十分な穿刺力を発生させるために1平方インチあたりの50ポンドの力に穿刺プラットホームの圧力調整装置を置く。穿刺プラットフォームの前にあるラボジャックにクロストラッキングバイスを配置します。
ピストンアームを最大距離まで延長し、角膜の頂点を穿刺対象の1ミリメートル領域内に配置し、ピストンアームを引き込み、前部セグメントを穿刺対象物に1センチメートル近づけます。穿刺装置を起動するには、デバイスの電源を入れ、デバイスの2番目のスイッチでソレノイドバルブを開きます。目からデバイスを引き込むには、2番目のスイッチを押し、目視検査による適切な傷害誘導と、損傷部位から漏出した媒体を確認します。
手術後、角膜上皮の完全性を光学コヒーレン断層撮影を用いたイメージングを介して評価した。負傷した前部セグメント組織は、傷害後すぐに画像化され、72時間後に傷害を受けた。制御された目は角膜に顕著な混乱を示さないが、傷害後に角膜を通して明確な傷害が見つかった。
トップダウンの最大強度予測から、怪我の形や大きさが不規則であったことは明らかでしたが、怪我の大きさは72時間にわたって減少しました。手術前の最初の3日間は、受容可能範囲での圧力安定性を判定するために、眼間圧が観察された。代表的な結果では、5つの目のうち3つの眼が許容可能な眼間圧範囲内に入る。
開いた地球の損傷および治療介入による眼間圧変化。オープングローブ損傷誘導後、圧力は大幅に減少し、実験が完了するまで低いままでした。ダーマボンド接着剤を用いた負傷組織の治療は、未治療組織と比較して眼間圧の増加をもたらし、これは、この方法が眼内圧を回復するための治療薬の有効性を測定するために使用できることを示している。
臓器培養におけるセグメントの初期セットアップは、組織の長期安定性にとって重要である。リングを締め過ぎると、組織にストレスを与え、コンプライアンスを低下させる可能性があります。
