最適な効果を評価するためのファイトケミカル溶液を調製するための薬剤スクリーニングアプローチのためのファイトケミカル成分に関する研究が増えるにつれ、私はこのプロトコルの利点を簡単な操作と低コストとして注目していました。このプロトコルは、薬理学の薬物スクリーニングを扱う研究者に利益をもたらします。消費コストを考慮して、予備実験のために少量の植物化学物質から始めることをお勧めします。
第二に、通常の注射器の上にインスリン注射器を使用することをお勧めしますエタノール中の1ミリリットルあたり2ミリグラムのナリンゲニン溶液を調製するには、3.52ミリグラムのナリンゲニン粉末を量り、それを2ミリリットルのチューブに加えます。チューブをすばやく回転させて、チューブの底に粉末を沈殿させます。次に、8.8マイクロリットルの100%エタノールをチューブに加えて、0.5%溶液を調製します。
次に、79.2マイクロリットルの100%エタノールをチューブに加えて、5%溶液を調製します。次に、1.672ミリリットルの0.9%生理食塩水を5%溶液を含むチューブに加える。これにより、エマルジョンが生成されます。
次に、遠心分離機は、ナリンゲニンが溶液に完全に溶解しているかどうかを確認するためにチューブを拒否しました。溶解していないナリンゲニンの白い沈殿物が溶液中に現れることがあります。次に、DMSOで1ミリリットルあたり2ミリグラムのナリンゲニン溶液を調製するために、3.95ミリグラムのナリンゲニン粉末を量り、それを2ミリリットルのチューブに加えます。
すばやく回転した後、9.8ミリリットルのDMSOをチューブに加えて、8.5%溶液を調製します。次に、88.2マイクロリットルのDMSOをチューブに加えて、5%溶液を調製します。次に、1.877ミリリットルの0.9%生理食塩水を溶液に加えます。
これにより、エマルジョンが得られます。溶液を遠心分離して、ナリンゲニンが完全に溶解しているかどうかを確認します。ナリンゲニンが溶解していない白色沈殿物が溶液中に現れることがある。
次に、Tween 80およびDMSOで1ミリリットルあたり2ミリグラムのナリンゲニン溶液を調製するために、6.69ミリグラムのナリンゲニン粉末を量り、それを5ミリリットルのチューブに加える。チューブをすばやく回転させ、117.7マイクロリットルのDMSOを加えて3.5%溶液を調製します。次に、117.7マイクロリットルのトゥイーン80を溶液に加えて、3.5%トゥイーン80および3.5%DMSO濃度を達成します。
この溶液を3109.6マイクロリットルの0.9%生理食塩水を含む別の5ミリリットルのチューブにゆっくりと加え、よく振って透明なナリンゲニン溶液を得る。2時間後、溶液は目に見える沈殿物なしで透明なままになります。ナリンゲニン溶液を投与するには、5週齢のC57ブラック6オスマウスを尾の付け根で持ち上げ、尾をそっと後ろに向け、固体の表面に置きます。
次に、左手の親指と人差し指で耳の後ろの首筋をつかみ、小指と薬指の間に尻尾を置きます。マウスを仰臥位に保ち、後端をわずかに持ち上げます。ナリンゲニン溶液を注入するには、腹部の皮膚が緊張するようにマウスの背中の皮膚をつかみます。
次に、針を腹部の右下または左の象限に10度の角度で押し込みます。膀胱、肝臓、その他の内臓にぶつからないようにするため。針を頭蓋方向に3〜5ミリメートル皮下に走らせてから、腹腔内に45度の角度で挿入します。
針が腹壁を通過したら、ゆっくりと溶液を押します。注射後、針をゆっくりと引き出し、漏れを防ぐためにわずかに回転させます。血糖値テストを実行するには、テストストリップを開いて日付をマークします。
25ゲージの針刺しで外側尾静脈に小さな穴を開け、一滴の血を絞り出します。ティッシュペーパーで一滴の血液を拭いた後、もう一滴の血液を絞り出し、テストストリップの端に集めます。血糖値計に表示される結果を読んで記録します。
高脂肪食給餌およびストレプトゾトシン誘導糖尿病マウスの体重は、ストレプトゾトシン処置後0〜8週間で対照群マウスのそれと比較して減少した。第4週において、ナリンゲニン処置マウスの体重減少は、非処置マウスと比較して有意であった。糖尿病マウスの血糖値は、ストレプトゾトシン誘導後1ヶ月以内に劇的に上昇した。
2か月後、2か月前に観察されたレベルに自動的に減少しました。対照的に、ナリンゲニン治療は、STZと比較して、血糖値を1か月で51.8%、2か月で34.8%低下させました。対照と比較して、ストレプトゾトシン誘発糖尿病マウスは、組織体積および小柱の数による骨体積の減少によって示されるように骨量減少を示した。
一方、ナリンゲニン治療は骨量減少を有意に救った。糖尿病マウスでは骨梁面積当たりの破骨細胞数で示した破骨細胞活性は増加したが、対照モデルと疾患モデルとの間に統計学的有意性は認められなかった。コントロールおよびストレプトゾトシン誘導マウスの骨梁および破骨細胞のTRAP染色をここに示す。
ナリンゲニン治療は破骨細胞の活性を有意に低下させた。糖尿病動物では、1型コラーゲンのC末端テロペプチドが68.09%上昇し、1型プロコラーゲンのN末端プロペプチドが204.88%上昇し、骨吸収率が劇的に増加したことを示しています。しかし、ナリンゲニン治療は骨吸収率の両方の指標を有意に低下させた。
そのため、正確な投与量をピペットで固めることは困難です。チップを切断すると、ピペッティングがより簡単かつ正確になります。あるいは、必要な体積を質量に変換することができ、後で簡単に変換することができます。
各膀胱グルコース実験前のすべての動物の絶食時間は、実験全体を通して物のままでなければならない。
