Optimal etkilerin değerlendirilmesi için fitokimyasal çözelti hazırlamak üzere ilaç tarama yaklaşımları için fitokimyasal bileşenler ile ilgili artan çalışmalarla, bu protokolün basit çalışma ve düşük maliyet olarak avantajlarına dikkat çekiyordum. Bu protokol, farmakolojinin ilaç taraması ile ilgilenen araştırmacılara fayda sağlayacaktır. Tüketim maliyetini göz önünde bulundurarak, ön deneyler için az miktarda fitokimyasal bileşikle başlamanızı öneririz.
İkincisi, normal bir şırınga üzerinde bir insülin şırıngası kullanılması önerilir Etanolde mililitre naringenin çözeltisi başına iki miligram hazırlamak için, 3.52 miligram naringenin tozu tartın ve iki mililitrelik bir tüpe ekleyin. Tozu tüpün dibine yerleştirmek için tüpü hızla döndürün. Daha sonra,% 0.5'lik bir çözelti hazırlamak için tüpe 8.8 mikrolitre% 100 etanol ekleyin.
Daha sonra% 5'lik bir çözelti hazırlamak için tüpe 79.2 mikrolitre% 100 etanol ekleyin. Daha sonra,% 5'lik çözeltiyi içeren tüpe 1.672 mililitre% 0.9 fizyolojik salin ekleyin. Bu bir emülsiyon üretecektir.
Daha sonra santrifüj, naringeninin çözelti içinde tamamen çözülüp çözülmediğini kontrol etmek için tüpü reddetti. Çözeltide çözülmemiş naringeninin beyaz çökeltileri görünebilir. Daha sonra, DMSO'da mililitre başına iki miligram naringenin çözeltisi hazırlamak için, 3.95 miligram naringenin tozu tartın ve iki mililitrelik bir tüpe ekleyin.
Hızlı bir dönüşten sonra,% 8.5'lik çözelti hazırlamak için tüpe 9.8 mililitre DMSO ekleyin. Ardından% 5'lik bir çözelti hazırlamak için tüpe 88.2 mikrolitre DMSO ekleyin. Daha sonra, çözeltiye 1.877 mililitre% 0.9 salin ekleyin.
Bu bir emülsiyonla sonuçlanacaktır. Naringeninin tamamen çözülüp çözülmediğini kontrol etmek için çözeltiyi santrifüj edin. Beyaz çökeltiler çözünmemiş naringenine sahiptir çözeltide görünebilir.
Daha sonra, Tween 80 ve DMSO'da mililitre başına iki miligram naringenin çözeltisi hazırlamak için, 6.69 miligram naringenin tozu tartın ve beş mililitrelik bir tüpe ekleyin. Tüpü hızla aşağı doğru döndürün ve% 3.5'lik bir çözelti hazırlamak için 117.7 mikrolitre DMSO ekleyin. Daha sonra% 3.5 Aralık 80 ve% 3.5 DMSO konsantrasyonu elde etmek için çözeltiye 117.7 mikrolitre Ara 80 ekleyin.
Bu çözeltiyi yavaşça 3109.6 mikrolitre% 0.9 salin içeren beş mililitrelik başka bir tüpe ekleyin ve berrak bir naringenin çözeltisi elde etmek için iyice çalkalayın. İki saat sonra, çözelti görünür çökelti olmadan berrak kalacaktır. Naringenin çözeltisini uygulamak için, beş haftalık bir C57 siyah altı erkek fareyi kuyruğunun tabanından kaldırın ve kuyruğunu yavaşça geriye doğru konumlandıran sağlam bir yüzeye yerleştirin.
Daha sonra, sol baş parmak ve işaret parmağı ile kulakların arkasındaki boynun tırnağını kavrayın ve kuyruğu küçük ve yüzük parmağı arasında konumlandırın. Fareyi, arka ucu hafifçe yükseltilmiş şekilde sırtüstü pozisyonda tutun. Naringenin çözeltisini enjekte etmek için, farenin sırtındaki cildi kavrayın, böylece karın derisi gerginleşir.
Daha sonra iğneyi karnın sağ alt veya sol kadranına 10 derecelik bir açıyla itin. mesane, karaciğer veya diğer iç organlara çarpmamak için. İğneyi deri altından üç ila beş milimetre boyunca kafatası yönünde çalıştırın, ardından karın boşluğuna 45 derecelik bir açıyla yerleştirin.
İğne karın duvarından geçtikten sonra, çözeltiyi yavaşça itin. Enjeksiyondan sonra, sızıntıyı önlemek için hafifçe döndürerek iğneyi yavaşça dışarı çekti. Bir kan şekeri testi yapmak için, test şeritlerini açın ve tarihi işaretleyin.
Yanal kuyruk damarında 25 gauge iğne dikeni ile küçük bir delinme yapın ve bir damla kan sıkın. Kan damlasını kağıt mendille sildikten sonra, başka bir damla kan sıkın ve test şeridinin kenarında toplayın. Glikoz ölçüm cihazında görüntülenen sonucu okuyun ve kaydedin.
Beslenen yüksek yağlı diyetin ve streptozotosin kaynaklı diyabetik farelerin vücut ağırlığı, streptozotosin tedavisinden sıfır ila sekiz hafta sonra kontrol grubu farelere kıyasla azalmıştır. Dördüncü haftada, naringenin ile tedavi edilen farelerin kilo kaybı, tedavi edilmemiş farelere kıyasla anlamlıydı. Diyabetik farelerde kan şekeri seviyesi, streptozotosin indüksiyonundan sonraki bir ay içinde çarpıcı bir şekilde artmıştır.
İki ay sonra, otomatik olarak iki ay önce gözlemlenen bir seviyeye düştü. Buna karşılık, naringenin tedavisi, STZ'ye kıyasla kan şekeri seviyelerini bir ayda% 51.8 ve iki ayda% 34.8 oranında düşürdü. Kontrollerle karşılaştırıldığında, streptozotosin ile indüklenen diyabetik fareler, kemik hacminde doku hacmi ve trabecula sayısına göre bir azalma ile belirtildiği gibi kemik kaybı sergiledi.
Bu arada, naringenin tedavisi kemik kaybını önemli ölçüde kurtardı. Trabeküler kemik alanı başına osteoklast sayısı ile gösterilen osteoklast aktivitesi diyabetik farelerde artmış ancak kontrol ve hastalık modelleri arasında istatistiksel bir anlamlılık gözlenmemiştir. Trabeküler kemik ve kontrol osteoklastlarının ve streptozotosin kaynaklı farelerin TRAP boyaması burada gösterilmiştir.
Naringenin tedavisi osteoklast aktivitelerini önemli ölçüde azaltmıştır. Diyabetik hayvanlarda, tip bir kollajenin C-terminal telopepti% 68.09 ve tip bir Pro-Kollajen'in N-terminal propeptidi% 204.88 oranında yükselmiştir, bu da kemik rezorpsiyon hızında dramatik bir artışa işaret etmektedir. Bununla birlikte, naringenin tedavisi, kemik rezorpsiyon hızının her iki göstergesini de önemli ölçüde azaltmıştır.
bu nedenle doğru dozajda pipet yapmak zordur. Ucun kesilmesi pipetlemeyi daha kolay ve daha doğru hale getirir. Alternatif olarak, gerekli hacim daha sonra kolayca yapılabilecek bir kütleye dönüştürülebilir.
Her mesane glikoz deneyinden önce tüm hayvanların açlık süresi, tüm deney boyunca bir şey olarak kalmalıdır.
