Com o aumento dos estudos que dizem respeito aos componentes fitoquímicos para abordagens de triagem de fármacos para preparar solução fitoquímica para avaliação de efeitos ótimos, fui dando atenção às vantagens deste protocolo como operação simples e de baixo custo. Este protocolo beneficiará os pesquisadores que lidam com a triagem de drogas da farmacologia. Sugere-se começar com uma pequena quantidade de composto fitoquímico para experimentos preliminares, considerando o custo de consumo.
Em segundo lugar, recomenda-se o uso de uma seringa de insulina sobre uma seringa regular Para preparar uma solução de naringenina de dois miligramas por mililitro em etanol, pese 3,52 miligramas de pó de naringenina e adicione-a a um tubo de dois mililitros. Gire rapidamente o tubo para assentar o pó no fundo do tubo. Em seguida, adicione 8,8 microlitros de etanol a 100% ao tubo para preparar uma solução a 0,5%.
Em seguida, adicione 79,2 microlitros de etanol a 100% ao tubo para preparar uma solução a 5%. Em seguida, adicione 1,672 mililitros de solução salina fisiológica a 0,9% ao tubo que contém a solução a 5%. Isso produzirá uma emulsão.
Em seguida, a centrífuga recusou o tubo para verificar se a naringenina está completamente dissolvida na solução. Precipitados brancos de naringenina não dissolvida podem aparecer na solução. Em seguida, para preparar uma solução de naringenina de dois miligramas por mililitro em DMSO, pese 3,95 miligramas de pó de naringenina e adicione-o a um tubo de dois mililitros.
Após um giro rápido, adicione 9,8 mililitros de DMSO ao tubo para preparar a solução a 8,5%. Em seguida, adicione 88,2 microlitros de DMSO ao tubo para preparar uma solução a 5%. Em seguida, adicione 1,877 mililitros de solução salina a 0,9% à solução.
Isso resultará em uma emulsão. Centrifugar a solução para verificar se a naringenina está completamente dissolvida. Precipitados brancos têm naringenina não dissolvida pode aparecer na solução.
Em seguida, para preparar uma solução de naringenina de dois miligramas por mililitro em Tween 80 e DMSO, pese 6,69 miligramas de pó de naringenina e adicione-o em um tubo de cinco mililitros. Gire rapidamente o tubo e adicione 117,7 microlitros de DMSO para preparar uma solução a 3,5%. Em seguida, adicione 117,7 microlitros de Tween 80 à solução para obter uma concentração de 3,5% Tween 80 e 3,5% DMSO.
Adicione lentamente esta solução a outro tubo de cinco mililitros contendo 3109,6 microlitros de solução salina a 0,9% e agite bem para obter uma solução clara de naringenina. Após duas horas, a solução permanecerá límpida sem quaisquer precipitados visíveis. Para administrar a solução de naringenina, levante um rato C57 preto de seis machos C57 de cinco semanas de idade pela base de sua cauda e coloque-o em uma superfície sólida posicionando sua cauda para trás suavemente.
Em seguida, segure o scruff do pescoço atrás das orelhas com o polegar esquerdo e o dedo indicador e posicione a cauda entre o dedo pequeno e anelar. Mantenha o rato em decúbito dorsal com a sua extremidade posterior ligeiramente elevada. Para injetar a solução de naringenina, segure a pele nas costas do rato para que a pele abdominal fique tensa.
Em seguida, empurre a agulha para o quadrante inferior direito ou esquerdo do abdômen em um ângulo de 10 graus. para evitar atingir a bexiga, fígado ou outros órgãos internos. Passe a agulha por via subcutânea em uma direção craniana por três a cinco milímetros e, em seguida, insira-a em um ângulo de 45 graus na cavidade abdominal.
Uma vez que a agulha passa através da parede abdominal, empurre lentamente a solução. Após a injeção, puxou lentamente a agulha para fora, girando-a ligeiramente para evitar vazamentos. Para realizar um teste de glicose no sangue, abra as tiras de teste e marque a data.
Faça uma pequena punção na veia lateral da cauda com uma picada de agulha de calibre 25 e esprema uma gota de sangue. Depois de limpar a gota de sangue com papel de seda, esprema outra gota de sangue e colete-a na borda da tira de teste. Leia e registre o resultado exibido no medidor de glicose.
O peso corporal da dieta rica em gordura alimentada e dos ratos diabéticos induzidos por estreptozotocina foi diminuído em comparação com o dos ratos do grupo controle de zero a oito semanas após um tratamento com estreptozotocina. Na quarta semana, a perda de peso de camundongos tratados com naringenina foi significativa em comparação com camundongos não tratados. O nível de glicose no sangue nos ratos diabéticos aumentou drasticamente dentro de um mês após a indução da estreptozotocina.
Após dois meses, diminuiu automaticamente para um nível observado há dois meses. Em contraste, o tratamento com naringenina reduziu os níveis de glicose no sangue em 51,8% em um mês e 34,8% em dois meses em comparação com STZ. Em comparação com os controles, os camundongos diabéticos induzidos por estreptozotocina exibiram perda óssea, conforme indicado por uma diminuição no volume ósseo por volume de tecido e no número de trabéculas.
Enquanto isso, o tratamento com naringenina resgatou significativamente a perda óssea. A atividade dos osteoclastos, demonstrada pelo número de osteoclastos, por área óssea trabecular, foi aumentada em camundongos diabéticos, embora não tenha sido observada significância estatística entre os modelos controle e doença. A coloração TRAP de osso trabecular e osteoclastos de controle e camundongos induzidos por estreptozotocina é mostrada aqui.
O tratamento com naringenina diminuiu significativamente as atividades dos osteoclastos. Nos animais diabéticos, o telopeptídeo C-terminal do colágeno tipo um foi elevado em 68,09% e o propeptídeo N-terminal do tipo um Pro-Collagen foi elevado em 204,88%, indicando um aumento dramático na taxa de reabsorção óssea. No entanto, o tratamento com naringenina diminuiu significativamente ambos os indicadores da taxa de reabsorção óssea.
por isso é um desafio pipetar dosagem precisa. Cortar a ponta torna a pipetagem mais fácil e precisa. Alternativamente, o volume necessário pode ser convertido em uma massa, que pode ser posterior facilmente.
O tempo de jejum de todos os animais antes de cada experimento de glicose na bexiga deve permanecer a coisa durante todo o experimento.
