Avec de plus en plus d’études concernant les composants phytochimiques pour les approches de criblage de médicaments afin de préparer une solution phytochimique pour l’évaluation des effets optimaux, je prêtais attention aux avantages de ce protocole en tant que fonctionnement simple et peu coûteux. Ce protocole profitera aux chercheurs qui s’occupent du dépistage des médicaments en pharmacologie. Nous suggérons de commencer avec une petite quantité de composé phytochimique pour les expériences préliminaires, en tenant compte du coût de consommation.
Deuxièmement, il est recommandé d’utiliser une seringue à insuline sur une seringue ordinaire Pour préparer une solution de naringénine de deux milligrammes par millilitre dans de l’éthanol, pesez 3,52 milligrammes de poudre de naringénine et ajoutez-la à un tube de deux millilitres. Faites tourner rapidement le tube pour déposer la poudre au fond du tube. Ensuite, ajoutez 8,8 microlitres d’éthanol à 100% dans le tube pour préparer une solution à 0,5%.
Ajoutez ensuite 79,2 microlitres d’éthanol à 100% dans le tube pour préparer une solution à 5%. Ensuite, ajoutez 1,672 millilitres de solution saline physiologique à 0,9% dans le tube contenant la solution à 5%. Cela produira une émulsion.
Ensuite, la centrifugeuse a refusé le tube pour vérifier si la naringénine est complètement dissoute dans la solution. Des précipités blancs de naringénine non dissoute peuvent apparaître dans la solution. Ensuite, pour préparer une solution de naringénine de deux milligrammes par millilitre dans du DMSO, pesez 3,95 milligrammes de poudre de naringénine et ajoutez-la dans un tube de deux millilitres.
Après un rapide essorage, ajoutez 9,8 millilitres de DMSO dans le tube pour préparer une solution à 8,5%. Ajoutez ensuite 88,2 microlitres de DMSO dans le tube pour préparer une solution à 5%. Ensuite, ajoutez 1,877 millilitres de solution saline à 0,9% à la solution.
Cela se traduira par une émulsion. Centrifuger la solution pour vérifier si la naringénine est complètement dissoute. Les précipités blancs ont de la naringénine non dissoute peuvent apparaître dans la solution.
Ensuite, pour préparer une solution de naringénine à deux milligrammes par millilitre dans Tween 80 et DMSO, pesez 6,69 milligrammes de poudre de naringénine et ajoutez-la dans un tube de cinq millilitres. Faites tourner rapidement le tube et ajoutez 117,7 microlitres de DMSO pour préparer une solution à 3,5%. Ajoutez ensuite 117,7 microlitres de Tween 80 à la solution pour atteindre une concentration de 3,5% Tween 80 et 3,5% de DMSO.
Ajouter lentement cette solution à un autre tube de cinq millilitres contenant 3109,6 microlitres de solution saline à 0,9% et bien agiter pour obtenir une solution claire de naringénine. Après deux heures, la solution restera claire sans précipités visibles. Pour administrer la solution de naringénine, soulevez une souris noire C57 six mâles âgée de cinq semaines par la base de sa queue et placez-la sur une surface solide en positionnant doucement sa queue en arrière.
Ensuite, saisissez la peau du cou derrière les oreilles avec le pouce gauche et l’index et placez la queue entre le petit et l’annulaire. Gardez la souris en décubitus dorsal avec son extrémité postérieure légèrement surélevée. Pour injecter la solution de naringénine, saisissez la peau sur le dos de la souris afin que la peau abdominale soit tendue.
Ensuite, poussez l’aiguille dans le quadrant inférieur droit ou gauche de l’abdomen à un angle de 10 degrés. pour éviter de frapper la vessie, le foie ou d’autres organes internes. Faites passer l’aiguille par voie sous-cutanée dans une direction crânienne sur trois à cinq millimètres, puis insérez-la à un angle de 45 degrés dans la cavité abdominale.
Une fois que l’aiguille traverse la paroi abdominale, poussez lentement la solution. Après l’injection, retirez lentement l’aiguille, en la tournant légèrement pour éviter les fuites. Pour effectuer un test de glycémie, ouvrez les bandelettes réactives et marquez la date.
Faites une petite ponction sur la veine latérale de la queue avec une piqûre d’aiguille de calibre 25 et pressez une goutte de sang. Après avoir essuyé la goutte de sang avec du papier de soie, pressez une autre goutte de sang et recueillez-la sur le bord de la bandelette de test. Lire et enregistrer le résultat affiché sur le glucomètre.
Le poids corporel des souris diabétiques nourries avec un régime riche en graisses et induites par la streptozotocine a diminué par rapport à celui des souris du groupe témoin de zéro à huit semaines après un traitement à la streptozotocine. À la quatrième semaine, la perte de poids des souris traitées à la naringénine était significative par rapport aux souris non traitées. Le taux de glucose sanguin chez les souris diabétiques a considérablement augmenté dans le mois suivant l’induction de la streptozotocine.
Après deux mois, il a automatiquement diminué à un niveau observé il y a deux mois. En revanche, le traitement par naringénine a abaissé la glycémie de 51,8% à un mois et de 34,8% à deux mois par rapport à STZ. Par rapport aux témoins, les souris diabétiques induites par la streptozotocine ont présenté une perte osseuse indiquée par une diminution du volume osseux par le volume tissulaire et le nombre de trabécules.
Pendant ce temps, le traitement à la naringénine a considérablement sauvé la perte osseuse. L’activité des ostéoclastes montrée par le nombre d’ostéoclastes par zone osseuse trabéculaire a augmenté chez les souris diabétiques, bien qu’aucune signification statistique n’ait été observée entre le modèle témoin et le modèle de la maladie. La coloration TRAP de l’os trabéculaire et des ostéoclastes de contrôle et des souris induites par la streptozotocine est montrée ici.
Le traitement par naringénine a significativement diminué les activités ostéoclastes. Chez les animaux diabétiques, le télopeptide C-terminal du collagène de type un a été élevé de 68,09% et le propeptide N-terminal de type un Pro-collagène a été élevé de 204,88%, indiquant une augmentation spectaculaire du taux de résorption osseuse. Cependant, le traitement par naringénine a significativement diminué les deux indicateurs du taux de résorption osseuse.
Il est donc difficile de pipeter un dosage précis. Couper la pointe rend le pipetage plus facile et plus précis. Alternativement, le volume requis peut être converti en une masse, qui peut être plus tard facilement.
Le temps de jeûne de tous les animaux avant chaque expérience de glucose vésical doit rester la chose pendant toute l’expérience.
