柚皮素溶液的制备

随着越来越多的研究关注药物筛选方法的植物化学成分，以制备植物化学溶液以评估最佳效果，我注意到该协议作为操作简单和低成本的优点。该协议将使处理药理学药物筛选的研究人员受益。考虑到消耗成本，我们建议从少量植物化学化合物开始进行初步实验。

其次，建议使用胰岛素注射器而不是普通注射器 要制备每毫升2毫克的柚皮素乙醇溶液，称取3.52毫克柚皮素粉并将其添加到两毫升的管中。快速旋转管子，将粉末沉降在管底部。接下来，向管中加入8.8微升100%乙醇以制备0.5%溶液。

然后向管中加入79.2微升100%乙醇，制备5%溶液。接下来，向含有5%溶液的管中加入1.672毫升0.9%生理盐水。这将产生乳液。

然后离心机拒绝试管检查柚皮素是否完全溶解在溶液中。溶液中可能会出现未溶解的柚皮素的白色沉淀。接下来，在DMSO中制备每毫升2毫克的柚皮素溶液，称取3.95毫克柚皮素粉并将其加入两毫升管中。

快速旋转后，向管中加入9.8毫升DMSO以制备8.5%的溶液。然后向管中加入88.2微升DMSO以制备5%溶液。接下来，向溶液中加入1.877毫升0.9%盐水。

这将产生乳液。离心溶液以检查柚皮素是否完全溶解。溶液中可能出现未溶解的白色沉淀物柚皮素。

接下来，在吐温80和DMSO中制备每毫升2毫克的柚皮素溶液，称取6.69毫克柚皮素粉并将其加入5毫升管中。快速旋转试管，加入117.7微升DMSO以制备3.5%的溶液。然后在溶液中加入117.7微升吐温80，以获得3.5%吐温80和3.5%DMSO浓度。

慢慢将此溶液加入另一个含有3109.6微升0.9%盐水的5毫升管中，摇匀，得到澄清的柚皮素溶液。两个小时后，溶液将保持透明，没有任何可见的沉淀物。要施用柚皮素溶液，请抬起一只五周大的C57黑六雄性小鼠的尾巴根部，并将其放在坚固的表面上，将其尾巴轻轻地向后放置。

接下来，用左手拇指和食指抓住耳朵后面的脖子，并将尾巴放在小指和无名指之间。保持鼠标仰卧位，后端略微抬高。要注射柚皮素溶液，请抓住小鼠背部的皮肤，使腹部皮肤绷紧。

然后将针头以 10 度角推入腹部的右下象限或左下象限。避免撞击膀胱、肝脏或其他内脏。将针头沿颅骨方向皮下敷三到五毫米，然后以 45 度角插入腹腔。

一旦针穿过腹壁，慢慢推动溶液。注射后，慢慢将针头拉出，稍微旋转以防止泄漏。要进行血糖测试，请打开试纸并标记日期。

用 25 号针刺在尾侧静脉上做一个小穿刺，挤出一滴血。用薄纸擦拭血滴后，挤出另一滴血，收集在试纸边缘。读取并记录血糖仪上显示的结果。

与链脲佐菌素治疗后0至8周的对照组小鼠相比，喂食和链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠的高脂肪饮食的体重降低。在第四周，与未治疗的小鼠相比，柚皮素治疗的小鼠的体重减轻是显着的。糖尿病小鼠的血糖水平在链脲佐菌素诱导后一个月内显着升高。

两个月后，它自动下降到两个月前观察到的水平。相比之下，与STZ相比，柚皮素治疗在一个月时将血糖水平降低了51.8%，在两个月时降低了34.8%。与对照组相比，链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠表现出骨质流失，如组织体积和小梁数量的骨体积减少所表明的那样。

同时，柚皮素治疗显著挽救了骨质流失。在糖尿病小鼠中，每个小梁骨区域的破骨细胞数显示的破骨细胞活性增加，尽管对照和疾病模型之间没有观察到统计学意义。本文显示了对照和链脲佐菌素诱导小鼠的小梁骨和破骨细胞的TRAP染色。

柚皮素治疗显著降低破骨细胞活性。在糖尿病动物中，1型胶原蛋白的C端端肽升高了68.09%，1型原胶原蛋白的N端端肽升高了204.88%，表明骨吸收率显著增加。然而，柚皮素治疗显著降低了骨吸收率的两个指标。

因此，移液准确剂量具有挑战性。切断吸头使移液更容易、更准确。或者，可以将所需的体积转换为质量，以后可以轻松完成。

每次膀胱葡萄糖实验前所有动物的空腹时间必须在整个实验过程中保持不变。