В связи с ростом исследований, касающихся фитохимических компонентов для скрининга лекарственных средств, подходов к приготовлению фитохимического раствора для оценки оптимальных эффектов, я обращал внимание на преимущества этого протокола, такие как простота эксплуатации и низкая стоимость. Этот протокол принесет пользу исследователям, занимающимся скринингом лекарств фармакологии. Мы предлагаем начать с небольшого количества фитохимического соединения для предварительных экспериментов, учитывая стоимость потребления.
Во-вторых, с помощью инсулинового шприца над обычным шприцем рекомендуется приготовить два миллиграмма на миллилитр раствора нарингенина в этаноле, взвесить 3,52 миллиграмма порошка нарингенина и добавить его в двухмиллилитровую трубку. Быстро раскрутите трубку, чтобы оседнуть порошок в нижней части трубки. Далее добавляют в пробирку 8,8 микролитра 100% этанола для приготовления 0,5% раствора.
Затем добавляют в пробирку 79,2 микролитра 100% этанола для приготовления 5% раствора. Далее добавляют 1,672 миллилитра 0,9% физиологического раствора в трубку, содержащую 5%-ный раствор. Это приведет к образованию эмульсии.
Тогда центрифуга отказалась от трубки проверить, полностью ли растворен нарингенин в растворе. В растворе могут появиться белые осадки нерастворенированного нарингенина. Затем, чтобы приготовить два миллиграмма на миллилитр раствора нарингенина в ДМСО, взвесьте 3,95 миллиграмма порошка нарингенина и добавьте его в двухмиллилитровую трубку.
После быстрого отжима добавьте в трубку 9,8 миллилитра ДМСО для приготовления 8,5% раствора. Затем добавляют в пробирку 88,2 микролитра ДМСО для приготовления 5%-ного раствора. Далее в раствор добавляют 1,877 миллилитра 0,9% физиологического раствора.
Это приведет к эмульсии. Центрифугируйте раствор, чтобы проверить, полностью ли растворен нарингенин. Белые осадки с нерастворенным нарингенином могут появиться в растворе.
Затем, чтобы приготовить два миллиграмма на миллилитр раствора нарингенина в Tween 80 и DMSO, взвесьте 6,69 миллиграмма порошка нарингенина и добавьте его в пятимиллилитровую трубку. Быстро раскрутите трубку и добавьте 117,7 микролитров ДМСО для приготовления 3,5% раствора. Затем добавляют 117,7 микролитра Tween 80 к раствору для достижения концентрации 3,5% Tween 80 и 3,5% DMSO.
Медленно добавляют этот раствор в еще пять миллилитровых пробирок, содержащих 3109,6 микролитра 0,9% физиологического раствора, и хорошо встряхивают, чтобы получить прозрачный раствор нарингенина. Через два часа раствор останется прозрачным без каких-либо видимых осадков. Чтобы ввести раствор нарингенина, поднимите пятинедельную черную шестилетнюю мышь C57 у основания ее хвоста и поместите ее на твердую поверхность, осторожно расположив хвост назад.
Далее обхватите шею за уши большим и указательным пальцами левой руки и расположите хвост между маленьким и безымянным пальцем. Держите мышь в положении лежа на спине со слегка приподнятым задним концом. Чтобы ввести раствор нарингенина, захватите кожу на спине мыши так, чтобы кожа живота была подтянутой.
Затем протолкните иглу в правый нижний или левый квадрант живота под углом 10 градусов. чтобы избежать попадания в мочевой пузырь, печень или другие внутренние органы. Проведите иглу подкожно в черепном направлении на три-пять миллиметров, затем вставьте ее под углом 45 градусов в брюшную полость.
Как только игла пройдет через брюшную стенку, медленно протолкните раствор. После инъекции медленно вытащили иглу наружу, слегка повернув ее, чтобы предотвратить утечку. Чтобы выполнить тест на глюкозу в крови, откройте тест-полоски и отметьте дату.
Сделайте небольшой прокол на боковой хвостовой вене с помощью укола иглой 25-го калибра и выдавите каплю крови. Вытирая каплю крови папиросной бумагой, выжмите еще одну каплю крови и соберите ее на краю тест-полоски. Считывание и запись результата, отображаемого на глюкометре.
Масса тела мышей с сахарным диабетом с высоким содержанием жиров и вызванной стрептозотоцином была снижена по сравнению с массой мышей контрольной группы от нуля до восьми недель после лечения стрептозотоцином. На четвертой неделе потеря веса мышей, получавших нарингенин, была значительной по сравнению с мышами, не получавшими лечение. Уровень глюкозы в крови у мышей с диабетом резко повысился в течение одного месяца после индукции стрептозотоцина.
Через два месяца он автоматически снизился до уровня, наблюдавшегося два месяца назад. Напротив, лечение нарингенином снизило уровень глюкозы в крови на 51,8% через один месяц и на 34,8% через два месяца по сравнению с STZ. По сравнению с контрольной группой, у мышей с диабетом, индуцированной стрептозотоцином, наблюдалась потеря костной массы, о чем свидетельствует уменьшение объема кости по объему ткани и количеству трабекул.
Между тем, лечение нарингенином значительно спасло потерю костной массы. Активность остеокластов, показанная числом остеокластов на область трабекулярной кости, была увеличена у мышей с диабетом, хотя статистической значимости между контрольной и болезненной моделями не наблюдалось. Здесь показано ОКРАШИВАНИЕ TRAP трабекулярной кости и остеокластов контрольных и стрептозотоцин-индуцированных мышей.
Лечение нарингенином значительно снижало активность остеокластов. У животных с диабетом С-концевой телопептид коллагена первого типа был повышен на 68,09%, а N-концевой пропептид про-коллагена первого типа был повышен на 204,88%, что указывает на резкое увеличение скорости резорбции кости. Однако лечение нарингенином значительно снижало оба показателя скорости резорбции кости.
таким образом, трудно пипетку точной дозировки. Отрезание наконечника делает пипетку проще и точнее. Альтернативно, требуемый объем может быть преобразован в массу, которая может быть легко впоследствии.
Время голодания всех животных перед каждым экспериментом с глюкозой в мочевом пузыре должно оставаться неизменным в течение всего эксперимента.
