Mit zunehmenden Studien über die phytochemischen Komponenten für Drogen-Screening-Ansätze zur Herstellung phytochemischer Lösung für die Bewertung optimaler Wirkungen, habe ich auf die Vorteile dieses Protokolls als einfache Bedienung und niedrige Kosten geachtet. Dieses Protokoll wird den Forschern zugute kommen, die sich mit dem Arzneimittelscreening der Pharmakologie befassen. Wir empfehlen, mit einer kleinen Menge phytochemischer Verbindung für Vorversuche zu beginnen, unter Berücksichtigung der Verbrauchskosten.
Zweitens wird empfohlen, eine Insulinspritze über eine normale Spritze zu verwenden Um eine zwei Milligramm pro Milliliter Naringeninlösung in Ethanol herzustellen, wiegen Sie 3,52 Milligramm Naringeninpulver und fügen Sie es zu einem Zwei-Milliliter-Röhrchen hinzu. Drehen Sie das Röhrchen schnell, um das Pulver am Boden des Röhrchens abzusetzen. Als nächstes fügen Sie 8,8 Mikroliter 100% Ethanol in die Röhre hinzu, um eine 0,5% ige Lösung herzustellen.
Dann fügen Sie 79,2 Mikroliter 100% Ethanol in das Röhrchen hinzu, um eine 5% ige Lösung herzustellen. Als nächstes fügen Sie 1,672 Milliliter 0,9% physiologische Kochsalzlösung in das Röhrchen mit der 5% igen Lösung hinzu. Dadurch entsteht eine Emulsion.
Dann verweigerte die Zentrifuge das Röhrchen, um zu überprüfen, ob das Naringenin vollständig in der Lösung gelöst ist. Weiße Ausschläge von ungelöstem Naringenin können in der Lösung auftreten. Als nächstes, um eine zwei Milligramm pro Milliliter Naringenin-Lösung in DMSO herzustellen, wiegen Sie 3,95 Milligramm Naringenin-Pulver und fügen Sie es in ein Zwei-Milliliter-Röhrchen hinzu.
Nach einer schnellen Drehung 9,8 Milliliter DMSO in das Röhrchen geben, um 8,5% ige Lösung herzustellen. Dann fügen Sie 88,2 Mikroliter DMSO in das Röhrchen hinzu, um eine 5% ige Lösung herzustellen. Als nächstes fügen Sie der Lösung 1,877 Milliliter 0,9% Kochsalzlösung hinzu.
Dies führt zu einer Emulsion. Zentrifugieren Sie die Lösung, um zu überprüfen, ob das Naringenin vollständig gelöst ist. Weiße Ausscheidungen haben ungelöstes Naringenin kann in der Lösung erscheinen.
Als nächstes, um eine zwei Milligramm pro Milliliter Naringenin-Lösung in Tween 80 und DMSO herzustellen, wiegen Sie 6,69 Milligramm Naringenin-Pulver und fügen Sie es in ein Fünf-Milliliter-Röhrchen hinzu. Drehen Sie das Röhrchen schnell herunter und fügen Sie 117,7 Mikroliter DMSO hinzu, um eine 3,5% ige Lösung herzustellen. Dann fügen Sie der Lösung 117,7 Mikroliter Tween 80 hinzu, um eine Konzentration von 3,5% Tween 80 und 3,5% DMSO zu erreichen.
Fügen Sie diese Lösung langsam zu einem weiteren Fünf-Milliliter-Röhrchen hinzu, das 3109,6 Mikroliter 0,9% Kochsalzlösung enthält, und schütteln Sie es gut, um eine klare Naringeninlösung zu erhalten. Nach zwei Stunden bleibt die Lösung ohne sichtbare Ausfällungen klar. Um die Naringenin-Lösung zu verabreichen, heben Sie eine fünf Wochen alte C57 schwarze sechsköpfige Maus an der Basis ihres Schwanzes an und legen Sie sie auf eine feste Oberfläche, indem Sie ihren Schwanz vorsichtig zurücklegen.
Als nächstes fassen Sie den Hals hinter den Ohren mit dem linken Daumen und Zeigefinger und positionieren Sie den Schwanz zwischen dem kleinen und dem Ringfinger. Halten Sie die Maus in Rückenlage mit leicht erhöhtem hinterem Ende. Um die Naringeninlösung zu injizieren, fassen Sie die Haut auf dem Rücken der Maus, so dass die Bauchhaut straff ist.
Drücken Sie dann die Nadel in einem 10-Grad-Winkel in den unteren rechten oder linken Quadranten des Bauches. um zu vermeiden, die Blase, Leber oder andere innere Organe zu treffen. Führen Sie die Nadel drei bis fünf Millimeter lang subkutan in Schädelrichtung und führen Sie sie dann in einem 45-Grad-Winkel in die Bauchhöhle ein.
Sobald die Nadel durch die Bauchdecke geht, drücken Sie langsam die Lösung. Nach der Injektion ziehen Sie die Nadel langsam heraus und drehen sie leicht, um ein Auslaufen zu verhindern. Um einen Blutzuckertest durchzuführen, öffnen Sie die Teststreifen und markieren Sie das Datum.
Machen Sie eine kleine Punktion an der seitlichen Schwanzvene mit einem 25-Gauge-Nadelstich und drücken Sie einen Tropfen Blut heraus. Nachdem Sie den Blutstropfen mit Seidenpapier abgewischt haben, drücken Sie einen weiteren Tropfen Blut aus und sammeln Sie ihn am Rand des Teststreifens. Lesen und notieren Sie das auf dem Blutzuckermessgerät angezeigte Ergebnis.
Das Körpergewicht der fettreichen Diät- und Streptozotocin-induzierten diabetischen Mäuse war im Vergleich zu dem der Kontrollgruppenmäuse null bis acht Wochen nach einer Streptozotocin-Behandlung verringert. In der vierten Woche war der Gewichtsverlust von Naringenin-behandelten Mäusen im Vergleich zu unbehandelten Mäusen signifikant. Der Blutzuckerspiegel bei den diabetischen Mäusen stieg innerhalb eines Monats nach der Induktion von Streptozotocins dramatisch an.
Nach zwei Monaten sank sie automatisch auf ein Niveau, das vor zwei Monaten beobachtet wurde. Im Gegensatz dazu senkte die Naringenin-Behandlung den Blutzuckerspiegel um 51,8% nach einem Monat und 34,8% nach zwei Monaten im Vergleich zu STZ. Im Vergleich zu den Kontrollen zeigten die Streptozotocin-induzierten diabetischen Mäuse Knochenverlust, was durch eine Abnahme des Knochenvolumens um das Gewebevolumen und die Anzahl der Trabekeln angezeigt wird.
In der Zwischenzeit rettete die Naringenin-Behandlung den Knochenverlust erheblich. Die Osteoklastenaktivität, die durch die Osteoklastenzahl pro trabekulärer Knochenfläche gezeigt wurde, war bei diabetischen Mäusen erhöht, obwohl keine statistische Signifikanz zwischen dem Kontroll- und dem Krankheitsmodell beobachtet wurde. TRAP-Färbung von trabekulären Knochen und Osteoklasten von Kontroll- und Streptozotocin-induzierten Mäusen ist hier gezeigt.
Die Behandlung mit Naringenin verringerte signifikant die Osteoklastenaktivitäten. Bei den diabetischen Tieren war das C-terminale Telopeptid von Typ-Eins-Kollagen um 68,09% und das N-terminale Propeptid von Typ eins Pro-Kollagen um 204,88% erhöht, was auf einen dramatischen Anstieg der Knochenresorptionsrate hinweist. Die Behandlung mit Naringenin verringerte jedoch beide Indikatoren der Knochenresorptionsrate signifikant.
Daher ist es schwierig, eine genaue Dosierung zu pipetten. Das Abschneiden der Spitze macht das Pipettieren einfacher und genauer. Alternativ kann das benötigte Volumen in eine Masse umgewandelt werden, die später problemlos umgesetzt werden kann.
Die Fastenzeit aller Tiere vor jedem Blasenglukose-Experiment muss während des gesamten Versuchs die Sache bleiben.
