Con l'aumentare degli studi riguardano le componenti fitochimiche per gli approcci di screening farmacologico per preparare la soluzione fitochimica per la valutazione degli effetti ottimali, stavo prestando attenzione ai vantaggi di questo protocollo come funzionamento semplice e basso costo. Questo protocollo andrà a beneficio dei ricercatori che si occupano dello screening farmacologico dei farmaci. Suggeriamo di iniziare con una piccola quantità di composto fitochimico per esperimenti preliminari, considerando il costo del consumo.
In secondo luogo, si raccomanda l'uso di una siringa da insulina su una siringa normale Per preparare una soluzione di naringenina di due milligrammi per millilitro in etanolo, pesare 3,52 milligrammi di polvere di naringenina e aggiungerla a un tubo da due millilitri. Ruotare rapidamente il tubo per depositare la polvere sul fondo del tubo. Quindi, aggiungere 8,8 microlitri di etanolo al 100% al tubo per preparare una soluzione allo 0,5%.
Quindi aggiungere 79,2 microlitri di etanolo al 100% al tubo per preparare una soluzione al 5%. Quindi, aggiungere 1.672 millilitri di soluzione salina fisiologica allo 0,9% al tubo contenente la soluzione al 5%. Questo produrrà un'emulsione.
Quindi la centrifuga ha rifiutato il tubo per verificare se la naringenina è completamente disciolta nella soluzione. Nella soluzione possono apparire precipitati bianchi di naringenina non disciolta. Successivamente, per preparare una soluzione di naringenina da due milligrammi per millilitro in DMSO, pesare 3,95 milligrammi di polvere di naringenina e aggiungerla in un tubo da due millilitri.
Dopo una rapida rotazione, aggiungere 9,8 millilitri di DMSO al tubo per preparare l'8,5% soluzione. Quindi aggiungere 88,2 microlitri di DMSO al tubo per preparare una soluzione al 5%. Quindi, aggiungere 1.877 millilitri di soluzione salina allo 0,9% alla soluzione.
Ciò si tradurrà in un'emulsione. Centrifugare la soluzione per verificare se la naringenina è completamente sciolta. I precipitati bianchi hanno naringenina non disciolta possono apparire nella soluzione.
Successivamente, per preparare una soluzione di naringenina da due milligrammi per millilitro in Tween 80 e DMSO, pesare 6,69 milligrammi di polvere di naringenina e aggiungerla in un tubo da cinque millilitri. Ruotare rapidamente il tubo e aggiungere 117,7 microlitri di DMSO per preparare una soluzione al 3,5%. Quindi aggiungere 117,7 microlitri di Tween 80 alla soluzione per ottenere una concentrazione di 3,5% Tween 80 e 3,5% DMSO.
Aggiungere lentamente questa soluzione ad un altro tubo da cinque millilitri contenente 3109,6 microlitri di soluzione salina allo 0,9% e agitare bene per ottenere una soluzione limpida di naringenina. Dopo due ore, la soluzione rimarrà limpida senza precipitati visibili. Per somministrare la soluzione di naringenina, sollevare un topo C57 nero sei maschi di cinque settimane per la base della coda e posizionarlo su una superficie solida posizionando delicatamente la coda all'indietro.
Quindi, afferrare la collottola dietro le orecchie con il pollice sinistro e l'indice e posizionare la coda tra il mignolo e l'anulare. Tenere il mouse in posizione supina con l'estremità posteriore leggermente sollevata. Per iniettare la soluzione di naringenina, afferrare la pelle sulla schiena del topo in modo che la pelle addominale sia tesa.
Quindi spingere l'ago nel quadrante inferiore destro o sinistro dell'addome con un angolo di 10 gradi. per evitare di colpire la vescica, il fegato o altri organi interni. Eseguire l'ago per via sottocutanea in direzione cranica per tre-cinque millimetri, quindi inserirlo con un angolo di 45 gradi nella cavità addominale.
Una volta che l'ago passa attraverso la parete addominale, spingere lentamente la soluzione. Dopo l'iniezione, estrarre lentamente l'ago, ruotandolo leggermente per evitare perdite. Per eseguire un test della glicemia, aprire le strisce reattive e contrassegnare la data.
Fai una piccola puntura sulla vena laterale della coda con una puntura dell'ago calibro 25 e spremi una goccia di sangue. Dopo aver asciugato la goccia di sangue con carta velina, spremere un'altra goccia di sangue e raccoglierla sul bordo della striscia reattiva. Leggere e registrare il risultato visualizzato sul misuratore di glucosio.
Il peso corporeo dei topi diabetici alimentati con dieta ricca di grassi e indotti da streptozotocina è diminuito rispetto a quello dei topi del gruppo di controllo da zero a otto settimane dopo un trattamento con streptozotocina. Alla quarta settimana, la perdita di peso dei topi trattati con naringenina era significativa rispetto ai topi non trattati. Il livello di glucosio nel sangue nei topi diabetici è aumentato drasticamente entro un mese dall'induzione della streptozotocina.
Dopo due mesi, è automaticamente diminuito a un livello osservato due mesi fa. Al contrario, il trattamento con naringenina ha abbassato i livelli di glucosio nel sangue del 51,8% a un mese e del 34,8% a due mesi rispetto a STZ. Rispetto ai controlli, i topi diabetici indotti da streptozotocina hanno mostrato perdita ossea come indicato da una diminuzione del volume osseo dal volume del tessuto e dal numero di trabecula.
Nel frattempo, il trattamento con naringenina ha salvato significativamente la perdita ossea. L'attività degli osteoclasti mostrata dal numero di osteoclasti per area ossea trabecolare è aumentata nei topi diabetici, sebbene non sia stata osservata alcuna significatività statistica tra il modello di controllo e quello di malattia. La colorazione TRAP dell'osso trabecolare e degli osteoclasti di controllo e dei topi indotti dalla streptozotocina è mostrata qui.
Il trattamento con naringenina ha ridotto significativamente le attività degli osteoclasti. Negli animali diabetici, il telopeptide C-terminale del collagene di tipo uno era elevato del 68,09% e il propeptide N-terminale del Pro-Collagene di tipo uno era elevato del 204,88%, indicando un drammatico aumento del tasso di riassorbimento osseo. Tuttavia, il trattamento con naringenina ha ridotto significativamente entrambi gli indicatori del tasso di riassorbimento osseo.
Quindi è difficile pipettare un dosaggio accurato. Il taglio della punta rende il pipettaggio più semplice e preciso. In alternativa, il volume richiesto può essere convertito in una massa, che può essere facilmente in seguito.
Il tempo di digiuno di tutti gli animali prima di ogni esperimento di glucosio della vescica deve rimanere la cosa durante l'intero esperimento.
