مع تزايد الدراسات المتعلقة بالمكونات الكيميائية النباتية لنهج فحص الأدوية لإعداد محلول كيميائي نباتي لتقييم التأثيرات المثلى ، كنت أولي اهتماما لمزايا هذا البروتوكول كعملية بسيطة وتكلفة منخفضة. سيفيد هذا البروتوكول الباحثين الذين يتعاملون مع فحص الأدوية في علم الأدوية. نقترح البدء بكمية صغيرة من مركب كيميائي نباتي للتجارب الأولية ، مع مراعاة تكلفة الاستهلاك.
ثانيا ، يوصى باستخدام حقنة الأنسولين على حقنة عادية لتحضير ملليغرام لكل ملليلتر من محلول نارينجينين في الإيثانول ، قم بوزن 3.52 ملليغرام من مسحوق نارينجينين وأضفه إلى أنبوب 2 ملليلتر. قم بتدوير الأنبوب بسرعة لتسوية المسحوق في قاع الأنبوب. بعد ذلك ، أضف 8.8 ميكرولتر من الإيثانول بنسبة 100٪ إلى الأنبوب لتحضير محلول بنسبة 0.5٪.
ثم أضف 79.2 ميكرولتر من الإيثانول بنسبة 100٪ إلى الأنبوب لتحضير محلول 5٪. بعد ذلك، أضف 1.672 ملليلتر من محلول ملحي فسيولوجي بنسبة 0.9٪ إلى الأنبوب الذي يحتوي على محلول 5٪. هذا سوف ينتج مستحلب.
ثم رفضت أجهزة الطرد المركزي الأنبوب للتحقق مما إذا كان النارينجينين يذوب تماما في المحلول. قد تظهر رواسب بيضاء من نارينجينين غير المذاب في المحلول. بعد ذلك ، لتحضير 2 ملليغرام لكل ملليلتر من محلول نارينجينين في DMSO ، قم بوزن 3.95 ملليغرام من مسحوق نارينجينين وأضفه إلى أنبوب 2 ملليلتر.
بعد الدوران السريع ، أضف 9.8 ملليلتر من DMSO إلى الأنبوب لتحضير محلول 8.5٪. ثم أضف 88.2 ميكرولتر من DMSO إلى الأنبوب لتحضير محلول 5٪. بعد ذلك ، أضف 1.877 ملليلتر من محلول ملحي بنسبة 0.9٪ إلى المحلول.
سيؤدي ذلك إلى مستحلب. الطرد المركزي الحل للتحقق مما إذا كان نارينجينين قد تم إذابته تماما. قد تظهر الرواسب البيضاء للنارينجينين غير المذاب في المحلول.
بعد ذلك ، لتحضير ملليغرام لكل ملليلتر من محلول نارينجينين في توين 80 و DMSO ، قم بوزن 6.69 ملليغرام من مسحوق نارينجينين وأضفه إلى أنبوب سعة خمسة ملليلتر. قم بتدوير الأنبوب بسرعة ، وأضف 117.7 ميكرولتر من DMSO لتحضير محلول 3.5٪. ثم أضف 117.7 ميكرولتر من توين 80 إلى المحلول للحصول على تركيز 3.5٪ توين 80 و 3.5٪ DMSO.
أضف هذا المحلول ببطء إلى أنبوب آخر سعة خمسة ملليلتر يحتوي على 3109.6 ميكرولتر من محلول ملحي 0.9٪ ورجه جيدا للحصول على محلول نارينجينين واضح. بعد ساعتين ، سيبقى المحلول واضحا دون أي رواسب مرئية. لإدارة محلول نارينجينين ، ارفع فأرا أسود من طراز C57 يبلغ من العمر خمسة أسابيع من قاعدة ذيله وضعه على سطح صلب مع وضع ذيله للخلف برفق.
بعد ذلك ، أمسك الرقبة خلف الأذنين بالإبهام الأيسر والسبابة وضع الذيل بين الإصبع الصغير والإصبع. حافظ على الماوس في وضع ضعيف مع نهايته الخلفية مرتفعة قليلا. لحقن محلول نارينجينين ، أمسك الجلد على ظهر الفأر بحيث يكون جلد البطن مشدودا.
ثم ادفع الإبرة إلى الربع السفلي الأيمن أو الأيسر من البطن بزاوية 10 درجات. لتجنب ضرب المثانة أو الكبد أو الأعضاء الداخلية الأخرى. قم بتشغيل الإبرة تحت الجلد في اتجاه الجمجمة لمدة ثلاثة إلى خمسة ملليمترات ، ثم أدخلها بزاوية 45 درجة في تجويف البطن.
بمجرد مرور الإبرة عبر جدار البطن ، ادفع المحلول ببطء. بعد الحقن ، اسحب الإبرة ببطء ، وقم بتدويرها قليلا لمنع التسرب. لإجراء اختبار جلوكوز الدم ، افتح شرائط الاختبار وحدد التاريخ.
قم بعمل ثقب صغير على الوريد الجانبي للذيل بوخز إبرة قياس 25 واضغط على قطرة دم. بعد مسح قطرة الدم بالمناديل الورقية ، اضغط على قطرة دم أخرى واجتمعها على حافة شريط الاختبار. قراءة وتسجيل النتيجة المعروضة على جهاز قياس الجلوكوز.
انخفض وزن الجسم في النظام الغذائي عالي الدهون الذي تم تغذيته والفئران المصابة بالسكري الناجم عن الستربتوزوتوسين مقارنة بفئران المجموعة الضابطة من صفر إلى ثمانية أسابيع بعد العلاج بالستربتوزوتوسين. في الأسبوع الرابع ، كان فقدان الوزن للفئران المعالجة بنارينجينين كبيرا مقارنة بالفئران غير المعالجة. ارتفع مستوى الجلوكوز في الدم في الفئران المصابة بالسكري بشكل كبير في غضون شهر واحد بعد تحريض الستربتوزوتوسين.
بعد شهرين ، انخفض تلقائيا إلى المستوى الذي لوحظ قبل شهرين. في المقابل ، خفض علاج نارينجينين مستويات الجلوكوز في الدم بنسبة 51.8٪ في شهر واحد و 34.8٪ في شهرين مقارنة ب STZ. بالمقارنة مع الضوابط ، أظهرت الفئران المصابة بالسكري الناجم عن الستربتوزوتوسين فقدان العظام كما يتضح من انخفاض حجم العظام حسب حجم الأنسجة وعدد الترابيكولا.
وفي الوقت نفسه ، أنقذ علاج نارينجينين بشكل كبير فقدان العظام. تم زيادة نشاط ناقضة العظم الذي أظهره عدد ناقضة العظم لكل منطقة عظمية تربيقية في الفئران المصابة بالسكري على الرغم من عدم ملاحظة أي دلالة إحصائية بين نماذج السيطرة والمرض. يظهر هنا تلطيخ TRAP للعظام التربيقية والخلايا الآكلة للعظم للسيطرة والفئران التي يسببها الستربتوزوتوسين.
علاج نارينجينين قلل بشكل كبير من أنشطة ناقضة العظم. في الحيوانات المصابة بالسكري ، تم رفع الببتيد الطرفي C من الكولاجين من النوع الأول بنسبة 68.09٪ وارتفع البروببتيد N-terminal من النوع الأول Pro-Collagen بنسبة 204.88٪ مما يشير إلى زيادة كبيرة في معدل ارتشاف العظام. ومع ذلك ، قلل علاج نارينجينين بشكل كبير من كلا مؤشري معدل ارتشاف العظام.
لذلك من الصعب ماصة جرعة دقيقة. قطع الطرف يجعل السحب أسهل وأكثر دقة. بدلا من ذلك ، يمكن تحويل الحجم المطلوب إلى كتلة ، والتي يمكن تحويلها لاحقا بسهولة.
يجب أن يظل وقت صيام جميع الحيوانات قبل كل تجربة جلوكوز المثانة هو الشيء خلال التجربة بأكملها.
