哺乳類と同様に、筋線維数は、家禽の胚発生中に最終的な筋肉量の主要な決定因子が確立される。この方法は、研究者が卵子筋形成および筋線維過形成の操作における家禽を研究することを可能にする。この技術は、設備への投資をほとんど必要とせず、筋形成操作を研究するための簡単で比較的低コストの方法である。
この技術に慣れていない研究者は、卵を適切に孵化させるのに苦労するかもしれません。このテクニックを実証するのは、私とモーガン・グレイブリー、どちらも私たちの研究室の理学修士号の大学院生です。実験を開始する前に、質の悪い卵を検査して捨ててください。
選択した卵に個々の卵番号を割り当てて記録し、卵の重量を量ります。次に、卵を適切な孵化トレイに入れ、摂氏26.6度、相対湿度40%で6時間予備孵化します。インキュベーション後、インキュベーション18日目までインキュベーター温度を摂氏37度に上げ、相対湿度40%に保ちます。
インキュベーター全体のいくつかの卵の表面温度を1日2回、熱表面温度計で測定し、卵の表面温度が摂氏37度であることを確認します。1時間ごとに回転して卵の位置を変え続けてください。10%から12.5%の卵の体重減少を確実にするために、孵化の最初の18.5日間、毎日卵の体重を記録してください。
インキュベーションの10日目に、原稿に記載されているように、卵管注射処置における各100マイクロリットルに必要なニコチンアミドリボシド溶液を調製し、溶液を水浴中で摂氏37度に維持する。インキュベーターから一度に1つのトレイずつ卵を取り出し、暖かいタオルで覆った後、卵黄嚢を見つけるために各卵をろうそくでろうそくでください。卵殻に1センチメートルの深さの滅菌20ゲージ2.54センチの皮下注射針を挿入し、卵黄嚢に100マイクロリットルの滅菌生理食塩水でニコチンアミドリボシド処理の割り当てられた用量を注入する前に、注射領域を70%エタノールで洗浄する。
過度の水分損失を避けるために、すぐに注射部位を絶対防水テープの小さな部分で覆いました。すべての卵が治療を受けたら、トレイをインキュベーターに戻します。孵化18日目に、トレイから卵を取り出し、治療に応じて割り当てられた孵化ボックスに入れ、すべての卵が孵化するまで、または孵化の23日目まで湿度を60%に上げて孵化箱をインキュベーターに入れます。
サンプル収集の前に、雛を頭を下げて脚を体の下に押し下げて横に置き、頭の上から尾までの長さを測定し、くちばしの後部から頭蓋骨の後ろまでの頭の長さの一方の耳穴から他方の耳穴までの頭の幅を測定することによって、安楽死させたひよこの王冠からお尻の長さを決定します。頭の円周を評価するには、一方の耳の穴から他方の耳の穴まで頭蓋骨の周りに非弾性の弦を巻き付け、次にメートル法定規で弦の測定値を取得します。同様に、翼が体に接触する下の胸の周りに紐を巻き付けて胸囲を決定し、その紐をメトリック定規の上に置き、測定値を取得します。
ひよこの胸に70%のエタノールをスプレーし、指で羽と皮膚を引っ張って胸郭の主要筋肉を明らかにし、続いてデジタルノギスで測定します。翼が体に接触する胸の幅と鎖骨の下から脂肪パッドの上部までの胸の長さを測定します。右胸郭の主要筋肉を抽出するには、体壁から筋肉を解放する前に、外科用はさみまたはメスと鉗子を使用してキール骨に沿って切断します。
大胸筋を取り除いた後、アイスキャンディースティックの上に筋肉を平らに置き、デジタルノギスを使用して測定値を収集します。頭蓋から筋肉の尾部までの筋肉の長さと、筋肉の頭蓋部分の最も広い部分の筋肉幅を調べます。筋肉の厚さを決定するために、鉗子で乳房を拾い上げ、筋肉の頭蓋部の最も厚い部分で測定する。
測定が完了すると、左右の大胸筋をマイナス80°Cで最大1年間保存してさらに分析することができます。胚に、4回のニコチンアミドリボシド用量または用量を注射して、卵子摂食における効果を研究した。18日目の胚および孵化したひよこの体重に用量効果がないことが観察された。
同様に、18胚の終日について胸郭大筋測定に対する用量効果は検出されなかった。孵化したひよこの場合、胸部の主要な筋肉の長さおよび幅の測定に線量の影響はなかった。しかし、用量は筋肉の重さと深さに影響を与えました。
ニコチンアミドリボシドを注射しなかった胚から発達したひよこは、501,000ミリモルのニコチンアミドリボシドを注射した胚からのひよこよりも体重が少ない胸郭主要筋肉を有していた。ゼロおよび250ミリモルのニコチンアミドリボシドを注射された胚からのひよこは、501,000ミリモルのニコチンアミドリボシドを注射された胚からのひよこよりも胸部の主要な深さが小さかった。堅牢な実験を実行するための鍵は、欠陥のない均一な卵を選択することです。
これにより、すべての効果が治療触媒されることを確実にする。大胸筋の採取により、組織学を用いて筋線維形態測定法を測定することができ、遺伝子およびタンパク質発現解析のために総RNAおよびタンパク質を抽出することができる。現在、この技術が処理鳥類の新鮮な肉質の成長性能に及ぼす影響を研究しています。
