オヴォで ニワトリ胚における血管内注射

こんにちは、揚州大学のカイ・ジンです。私たちの研究グループを代表して、私は発生研究におけるニワトリ胚の強力なツールを提示するつもりです。ニワトリ胚は、発生と分化を調査するために使用されてきた古典的な発生モデルであり、実際、ニワトリ胚への実験室の無関係な対策は、遺伝子トランスフェクション、トランスジェニック育種、生殖腺経壁標示などの発生生物学のための貴重なツールです。

私たちの研究室では、μ型の注入方法を確立していますが、多くの研究者にとって、注射の詳細は不明瞭でラインが難しいです。そこでこのビデオでは、ovoでのニワトリ胚発生の初期段階における血管注射の詳細を紹介します。あなたがそれに興味があるならば、私達に連絡すること自由に感じなさい。

ここで、プロトコルの詳細を示す。受精卵の収集と準備。第一に、哺乳類とは異なり、鶏肉は単一の卵巣に何百万もの卵胞を持っていますが、これらの卵胞のほんの一部だけが排卵するのに十分成熟しています。

各卵胞は1つの卵母細胞または生殖細胞を含む。卵胞が成熟して卵黄を放出するとすぐに、卵管の漏斗に取り込まれます。卵胞が卵管の頸部腹部に入ると、精液は鶏の体内の卵に結合し、鶏の体内のカルシウムは受精卵を包む殻を形成し、体内で柔らかい殻の卵を形成します。

カルシウムの殻は、卵が生産されるまで徐々に厚くなります。学術的には胚卵と呼ばれる受精卵を集め、摂氏37.8度、湿度60%のインキュベーター内のラックにきれいに置きます。胚を適切な条件下でインキュベートする。

2日間の孵化後、原始的な心臓と呼ばれる小さな脈打つ赤い点が現れます。このプロセスはチェリービートと呼ばれます。約2.5日で、血管が見え、心臓と体のセグメントが形成されています。

針およびプラスミド調製。針としてガラス毛細血管を使用しています。注入の前に、外径1ミリメートル、内径0.6ミリメートルのガラス毛細血管を準備する。

外因性物質は、通常、プラスミド、パッケージングされたレンチウイルスおよび始原生殖細胞、またはPGCである。このビデオでは、トリパンブルーを使用して、注入された材料の痕跡を示します。ウィンドウ。胚を暴露する前に, 我々は、細菌の汚染を防ぐために胚を滅菌する必要があります.

これは、卵の開口部の部位で75%アルコールの綿球で胚の表面を静かに拭くことによって行われます。消毒後、卵殻の鈍い端を鉗子で静かに叩き、卵殻の表面にある0.5センチ×0.5センチメートルの穴を鉗子で慎重にクリップして胚を露出させます。インオボ血管内注射。

顕微鏡の下のビューを見て、顕微鏡の焦点を調整して最初に胚を見つけ、次に注射の準備ができているニワトリ胚の血管を見つけます。外因性物質を含む針を血管に向け、針が注射される血管と平行であることに注意する。血管に針をそっと差し込み、エアポンプの電源を入れます。

この時点で、異物は動脈に入り、心臓の鼓動とともに、動脈を通って胚に戻り、次いで静脈に戻る。血管注射には2種類あります。一つは、胚の頭の静脈から異物が注入され、心臓に逆流する頭部注射です。

もう1つは、心臓の鼓動とともに異物が胚に循環する背側大動脈注射です。胚性心臓の鼓動と血液の循環により、異物が動脈の端にある毛細血管によって静脈に受容され、次いで静脈から胚に戻ることがはっきりとわかり、注入された異物が胚の各部分に効果的に送達されることを示す。注射後、実体顕微鏡から卵を取り出し、小さなはさみで長さ3センチの医療用テープを切り取り、テープを開口部に貼り付けます。

はさみでテープを優しくこすり取って気泡を絞り出し、別のテープを切って開口部を十字に密封します。開口部を密封した後、注入された胚を慎重にインキュベーターに戻す。ここでは、注射後のニワトリ胚の代表的な画像を示す。

第1の画像は、レンチウイルスプラスミド注入の結果を示す。実体蛍光顕微鏡下での緑色蛍光は、胚における注入プラスミドの発現の成功を示す。このことは、ニワトリ胚へのプラスミドの血管内注射の実現可能性を示唆している。

2番目の画像は、PGC注射の結果を示す。PGCにはRFPのラベルが付けられていた。この写真では、受信者の生殖腺にある赤い点である注入されたPGCを見ることができました。

これは、ドナーPGCがレシピエントの生殖腺に効果的に侵入し、植民地化することができたことを示しています。結論として、このプロトコルは、ニワトリ胚への外因性物質、プラスミドまたはPGCのin-ovo血管内注射のプロセスを提示する。ここで示した方法は、従うのが簡単で、学ぶのが簡単で、多くの分野で応用する価値があります。

これが私があなたと共有したいすべてです。このアプローチが、ニワトリの胚の設定と発生生物学における強力な研究ツールとしてのあなたの仕事を促進することを願っています。このビデオを見ていただきありがとうございます。