このプロトコルは、ショウジョウバエのメラノガスター幼虫を様々な免疫および分子研究のモデルとして使用することを可能にする正確な方法を記述することによって、幼虫をマイクロインジェクションすることの困難および課題に対処する。これは、さまざまな物質を均一な方法で繰り返し送達するための効率的で費用対効果の高い迅速な方法を提示する簡単な注入技術であり、一貫性のある信頼性の高い結果を可能にします。第3齢期の幼虫を選択し、小さなペトリ皿でリンゲルの溶液でそれらを洗うことから始めます。
ろ紙をペトリ皿に入れ、5mlのリンゲル溶液で湿らせます。その後、幼虫をろ紙の上に置きます。マイクロピペットプーラーで3.5インチガラスキャピラリーチューブを使用して毛細血管を準備します。
まっすぐな鋸歯状の中点鉗子の助けを借りてガラス毛細血管を開きます。プラスチック製の使い捨てシリンジを使用して、開いた毛細血管に鉱物油を充填します。次に、ナノリットルのインジェクターでキャピラリーチューブからオイルを排出します。
毛細血管を注射用の所望の細菌製剤で満たす。麻酔した幼虫をリンゲル溶液で湿らせたろ紙に移す。鉗子を使用して、気管スパイラルが明らかな幼虫の後端の背側にしっかりと圧力をかける。
次に、針を水平に挿入し、幼虫の後端に向かって、細菌ストックを注入する。血リンパや腸のこぼれを避けるために鉗子を取り除きます。次に、幼虫に挿入した針を抜く。
各実験条件について20匹の幼虫に感染させる。絵筆を使用して、注入された幼虫を別の湿ったろ紙に静かに移す。乾燥を防ぐために、必要に応じてリンガーのソリューションを追加します。
Photorhabdus asymbioticaに感染したショウジョウバエメラノガスター幼虫は、注射後24時間で57%の生存率を示し、一方、大腸菌を注射した幼虫は、同時に85%の生存率を示した。この方法の重要性は、針が幼虫とほぼ平行に保持されることである。幼虫を保持するために加えられる圧力は非常に少なく、血リンパ漏出、致死的傷害、または所望の物質の不十分な送達の可能性を低減する。
このテクニックは練習で完成させることができます。
