Drosophila melanogaster פרוטוקול הזרקת זחלים

פרוטוקול זה מטפל בקשיים ובאתגרים עם זחלים מיקרו-מולקולריים על ידי תיאור שיטה מדויקת שתאפשר שימוש בזחלי דרוסופילה מלנוגסטר כמודל למחקרים חיסוניים ומולקולריים שונים. זוהי טכניקת הזרקה פשוטה המציגה שיטה יעילה, חסכונית ומהירה לספק שוב ושוב מגוון חומרים באופן אחיד, המאפשר תוצאות עקביות ואמינות. התחילו בבחירת זחלי שלב אינסטאר שלישיים ושטיפתם בתמיסה של רינגר בצלחת פטרי קטנה.

מניחים נייר סינון בצלחת פטרי ומרטיבים אותו עם 5 מ"ל של הפתרון של רינגר. לאחר מכן מניחים את הזחלים על נייר הסינון. הכינו נימים באמצעות צינורות נימי מזכוכית בגודל 3.5 אינץ' במשגר מיקרופיפט.

פתח את נימי הזכוכית בעזרת מלקחיים בינוניים משוננים ישרים. ממלאים את הנימים הפתוחים בשמן מינרלי באמצעות מזרק חד פעמי מפלסטיק. לאחר מכן, להוציא את השמן מתוך צינור נימי עם מזרק nanoliter.

מלא את הנימים עם ההכנה החיידקית הרצויה להזרקה. מעבירים את הזחלים המרדים לנייר סינון לח עם הפתרון של רינגר. באמצעות מלקחיים, להפעיל לחץ איתן על הצד הגבי של הקצה האחורי של הזחלים, שבו spiracles קנה הנשימה ניכרים.

לאחר מכן, הכנס את המחט אופקית, לכיוון הקצה האחורי של הזחלים, והזריק את מלאי החיידקים. הסר מלקחיים כדי למנוע שפיכה של המולימפה או מעי. לאחר מכן, למשוך את המחט שהוכנסה בעבר לתוך זחלים.

להדביק 20 זחלים לכל מצב ניסיוני. בעזרת מברשת צבע, מעבירים בעדינות את הזחלים המוזרקים לנייר סינון לח נפרד. הוסף את הפתרון של רינגר לפי הצורך כדי למנוע התייבשות.

דגירה צלחת פטרי בחממה ב 25 C.Drosophila melanogaster זחלים נגועים פוטוגרבדוס א-סימביוטיקה הציג שיעור הישרדות של 57% במשך 24 שעות לאחר הזריקה, בעוד זחל מוזרק עם Escherichia coli הראה שיעור הישרדות 85% באותה נקודת זמן. החשיבות של שיטה זו היא כי המחט מוחזקת בערך במקביל לזחל. הלחץ המופעל להחזיק את הזחל הוא מעט מאוד, מה שמפחית את האפשרות של דליפת המולימפה, פציעה קטלנית, או משלוח לקוי של החומר הרצוי.

טכניקה זו יכולה להיות מושלמת עם תרגול.