アフリカツメガエル・ ラエビス ・オタマジャクシの脊髄切除

このプロトコルは、カエルの脊髄再生の研究を可能にします。得られた知識は、人間が脊髄損傷にどのように反応するかを理解するための新しい洞察を提供する可能性があります。このプロトコルの主な利点は、傷害を行うことの容易さであり、また、尾部切断のパラダイムと比較して、この技術はヒトで起こることをよりよく模倣することである。

この技術は、異なる遺伝子、タンパク質、分子、およびシグナル伝達経路の関与をよりよく理解するために再生プロセスに挑戦することを可能にし、それによって新しい治療標的を同定し、傷害を発生させるための適切な場所、ならびにその延長を見つけることは困難である。これらの手順を確認できることは、この手順を簡単で再現可能にするために不可欠です。受精後3〜4週間で、オタマジャクシをペトリ皿に入れ、前肢と後肢の形態と外観を確認してください。

ステージ50の動物、ちょうど現れて球形である前肢、突出して球形である後肢の次の解剖学的特徴を探してください。手術前に、オタマジャクシを0.1倍のバルト溶液でメシル酸0.02%トリカインに入れて麻酔し、動物を逆さまにして反応しないことを確認します。脊髄切除手術を行うには、大さじと鉗子を使用して、麻酔をかけられたステージ50オタマジャクシの背側を、ガラスのペトリ皿の上半分のガーゼの濡れた部分の上に置きます。

次に、微小解剖スプリングハサミを用いて、中胸部レベルで皮膚および背筋を切開する。対照的な偽物の場合、切開サイズがわずか0.2ミリメートルであり、脊髄を損傷しないことを確認してください。トランスセクトされた動物では、脊髄を完全にトランセクトするために0.2ミリメートルの2回目の切開を行う。

手術後、オタマジャクシを、1タンクあたり10〜12オタマジャクシの密度で1回ペニシリンおよびストレプトマイシンを含む0.1倍バルト溶液の500ミリリットルを含むタンクに移す。トランセクトされたオタマジャクシを維持し、別々のタンクで偽のオタマジャクシを制御します。オタマジャクシを摂氏20〜21度の温度で曝気して維持する。

実験が終わるまで1日おきに抗生物質でバルト溶液を交換してください。手術後1日でオタマジャクシに餌やりを始め、死んだ動物を排除してください。水泳アッセイのために、光が通過する透明なポリスチレンシートで覆われた内側からLED照明のボックスを取得し、LEDボックスの上にカメラを設置する。

次いで、100ミリリットルの0.1倍バルト溶液で満たされた箱の上に直径15センチメートルのペトリ皿を置く。ある日、切除後、ペトリ皿にオタマジャクシを入れ、5分間の適応期間放置します。適応後、リファレンスソフトウェアを使用して5分間、フリースイミングの動作を追跡するビデオを開始します。

ビデオが完了したら、オタマジャクシをタンクに戻します。この代表的なドットプロットは、時間の経過に伴う運動機能の回復を示しています。輪廻転生から5日後、オタマジャクシは5分間で平均0.7メートル泳ぎ、泳ぐ能力が低下しました。

この容量は日が経つにつれて増加し、10日後の5分で平均2.1メートル、切除後15日後に5分で3.1メートルを示しました。水泳能力の完全な回復は、トランスセクション後20日目に観察され、5分で平均5.7メートルであった。水泳の平均は、動物の各バッチによって異なる場合があります。

したがって、実験群は、常にそれぞれの対照と比較されるべきであり、以前に得られたデータではない。手術後は、トランスクリプトミクス、プロテオミクス、メタボロミクスなどのグローバル解析や、脊髄再生を阻害または促進する化合物のスクリーニングに動物を利用でき、新しい治療法の開発を目指しています。