この方法は、変形性膝関節症の新たな臨床戦略として活用できる可能性を秘めています。この技術は安全で、局所注射が簡単で、動物実験に効果的です。銀ナノ粒子は、他の炎症性疾患にも適用できる可能性があり、さらなる研究が必要です。
したがって、マウスの膝のサイズを注射する際には注意し、正しい手順を確保することが重要です。膝関節の手の充填を評価し、薬剤の漏れを防ぎます。まず、麻酔をかけたマウスを手術台に置きます。
マウスの手足をテープで固定し、カミソリで毛皮を剃ります。次に、0.1%ヨードホルムとアルコールを交互にこすり洗いして、剃った部分を3回消毒します。はさみを使用して皮膚を切開し、皮下組織と膝蓋骨下靭帯を順番に露出させます。
1ミリリットルのインスリン注射器で、10単位の2型コラゲナーゼを関節腔に注入します。皮下組織を縫合し、皮膚を縫合します。次に、縫合された領域を0.1%ヨードホルムで滅菌します。
麻酔から目覚めたら、マウスを個別に換気されたケージに入れます。まず、氷上に置いた1.5ミリリットルのマイクロ遠心チューブに400マイクロリットルの1型コラーゲンを加えます。次に、200マイクロリットルのPBXを加え、よく混ぜてチューブを氷の上に置きます。
この懸濁液に400マイクロリットルの銀ナノ粒子を加え、最終的なナノ粒子濃度を1ミリモルにします。懸濁液をよく混ぜます。コラゲナーゼ注射の1週間後、KOAマウスをケージから取り出します。
銀ナノ粒子を注入する前に、麻酔をかけ、前述のようにマウスを外科的に準備します。はさみを使用して、皮膚、皮下組織、膝の靭帯を順番に露出させます。次に、1ミリリットルのインスリン注射器の針を使用して、関節腔に15度の角度で入り、20マイクロリットルの銀ナノ粒子コラーゲン混合物をゆっくりと注入します。
注射中、膝関節が腫れ、薬剤の注射が成功します。先ほどと同じように手術部位を縫合・滅菌した後、麻酔が切れたら個別に換気されたケージにマウスを入れます。安楽死させたマウスの手足を外科的に滅菌し、解剖します。
大腿骨と脛骨を含む膝関節を採取し、筋肉組織を取り除きます。大腿骨と脛骨、および周囲の軟靭帯を含む膝関節組織を収集します。保存と固定のために10%ホルマリンで包みます。
組織を一晩固定した後、切片をパラフィンに埋め込みます。ミクロトームを使用して、埋め込まれた組織を0.4マイクロの厚さのセクションに切断します。組織をさまざまな染色技術にかけます。
KOAマウスの平均体重は、対照群のマウスよりも有意に低かった。2型コラゲナーゼおよび銀ナノ粒子群のマウスの平均体重は、KOAマウスと比較して高かった。HE染色により、KOA群のマウスの滑膜厚は対照群と比較して有意に高いことが示された。
ナノ粒子で処理した群の滑膜厚は、KOA群に比べて減少した。滑膜の血管過形成はKOA群で観察され、ナノ粒子処理群では有意に減少することがわかった。Safranin-O染色により、KOAマウスでは軟骨マトリックスが破壊されたことが明らかになりましたが、ナノ粒子コラーゲン混合物で処理したマウスでは、軟骨マトリックスが有意に良好であることが示されました。
形態学的特徴スコアは、対照群と比較してコラーゲンII処理群で高かった。免疫組織化学的染色により、KOA群と比較して、ナノ粒子処理マウスの滑膜領域における好中球浸潤の減少が実証されました。II型コラゲナーゼといくつかのナノ粒子の注入中の薬物閉塞を避けることが重要です。
いくつかのナノ粒子の治療効果は、前十字靭帯損傷の動物モデルで試みることができます。
