私たちのプロトコルは、新しい接着性ヒドロゲル、ゼラチンo-ニトロソベンズアルデヒドの合成について詳細に説明しています。主に、ヒドロゲルの接着性を最大化する方法の問題を解決します。私たちの技術では、水素中の化学基を修飾することで、動物組織表面の化学基と化学反応する活性を持ち、密接な曲げと注意を実現します。
私たちの技術によって合成された製品は、動物組織の表面に強い長期的な注意を維持することができ、したがって、損傷の修復と組織の再生を効果的に促進します。この方法は、生命システムの損傷を含む再生医療への洞察を提供する可能性があります。我々はこれまでに、この方法で合成した製品の角膜損傷やIBDへの応用を報告している。
まず、原稿に記載されているように調製した化合物を40ミリリットルのN,N-ジメチルホルムアミドに溶解し、周囲温度で16時間攪拌します。次に、200ミリリットルの摂氏0度の水を混合物に加え、混合物を沈殿させて粗生成物を得る。粗生成物をN,N-ジメチルホルムアミドに繰り返し溶解し、次いで5サイクル沈殿させる。
粗生成物を沈殿させた後、摂氏80度で2時間乾燥させて初期の生成物を得る。70%硝酸の予冷溶液に9.4グラムの4-ブタン酸メチルをゆっくりと加え、摂氏マイナス2度で3時間攪拌することにより、4-ブタン酸メチルエステルのipso置換を実行します。次に混合物を沈殿させる。
摂氏0度200ミリリットルの水でろ過し、N、N-ジメチルホルムアミドで精製して固体生成物を沈殿させます。固形物を摂氏90度のトリフルオロ酢酸で加水分解し、ロータリーエバポレーターに入れてからオーブンで乾燥させます。中間生成物をテトラヒドロフランに溶解した後、1.43グラムの水素化ホウ素ナトリウムを摂氏0度でゆっくりと加える。
3時間後、真空下ですべての溶媒を除去し、残留物を1対1の水/ジクロロメタン溶液に懸濁します。ジクロロメタンを準備して、有機層を除去しながら水層から生成物を抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させます。次いで、ジクロロメタンメタノールを10:1の比率で用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗生成物を精製する。
最後に、5.31グラムの比較的純粋な黄色がかった粉末NBカルボキシを得る。5グラムのゼラチンを100ミリリットルの脱イオン水に溶解し、1バッチの変性のために摂氏37度で保存することにより、均質なゼラチン溶液を調製する。原稿に記載されているように供給比を定義した後、1, 060ミリグラムのNBカルボキシを5ミリリットルのジメチルスルホキシドに溶解する。
NBカルボキシのカルボキシル基を活性化するには、746ミリグラムの1-3-エチルカルボジミド塩酸塩をNBカルボキシメチルスルホキシド溶液に加え、5分間攪拌します。1-3-エチルカルボジミド塩酸塩が溶解した後、448ミリグラムのN-ヒドロキシスクシンイミドを加え、5分間攪拌します。滴下漏斗を使用して、激しく攪拌しながら溶解したゼラチン溶液に毎分0.5ミリリットルの速度で混合物をゆっくりと滴下し、摂氏45度で4時間反応させます。
ゼラチンNB溶液を過剰の脱イオン水に対して少なくとも3日間透析した後、それを回収、凍結、および凍結乾燥して、ゼラチン-NBフォームを得る。さらに使用するために、フォームを暗所で乾燥させて保管してください。凍結乾燥ゼラチン-NBフォームは、使用直前に摂氏37度の脱イオン水に溶解します。
損傷した角膜表面ゼラチン及びゼラチン-NB-4タンパク質コーティング処理角膜表面のSEM像が得られ、ゼラチン-NB-4タンパク質の形態が角膜表面に安定に付着していることを示している。しかし、何もまたはゼラチンで処理されていない損傷した角膜表面は滑らかに見えます。ゼラチンおよびゼラチン-NB分子コーティングによって標識されたマウス結腸表面の蛍光画像は、蛍光標識されたゼラチン-NBが腸組織に接着し、緻密なコーティングを形成する能力を有することを示している。
しかし、ゼラチン群の蛍光強度は非常に弱く、腸壁に強固に接着できないことを示している。標識ゼラチンおよびゼラチン-NB分子コーティング処理アミノ化プレートの0時間および24時間の蛍光画像は、両方が最初にプレートに接着できることを示しています。PBSを注ぎ、アミノ化プレートを4時間ごとに24時間交換した後、ゼラチン-NBのみが強い蛍光を維持し、強く接着することを示しています。
ゼラチン-NB-4結合のX線光子分光法は、角膜表面とゼラチンで処理された表面のスペクトルが同じであることを示しました。ただし、400電子ボルトに余分なピークが現れ、UV活性化ゼラチン-NBで処理した後の組織に多くのCN結合が形成されることを示しています。覚えておくべき最も重要なことは、さまざまな適用条件でゼラチンNBを合成する場合、最良の注意効果を探求するために実験前のFR勾配を設定する必要があるということです。
この技術は、生合成・再生医療の発展への道を開く可能性があります。研究者はビデオを参照して、生物医学的ニーズを満たすようにグループを変更できます。
