Notre protocole décrit en détail la synthèse d’un nouvel hydrogel adhésif, la gélatine o-nitrosobenzaldéhyde. Il résout principalement le problème de savoir comment maximiser l’adhérence de l’hydrogel. Dans notre technologie, les groupes chimiques dans l’hydrogène sont modifiés, ayant ainsi l’activité de réaction chimique avec des groupes chimiques sur la surface des tissus animaux pour obtenir une flexion et une attention étroites.
Le produit synthétisé par notre technique peut maintenir une forte attention à long terme à la surface des tissus animaux, favorisant ainsi efficacement la réparation des dommages et la régénération des tissus. Cette méthode pourrait donner un aperçu d’une médecine régénérative, y compris les dommages dans les biosystèmes. Nous avons déjà signalé l’application de produits synthétisés par cette méthode dans les lésions cornéennes et les MII.
Pour commencer, dissoudre les composés préparés comme décrit dans le manuscrit dans 40 millilitres de N, N-diméthylformamide et agiter à température ambiante pendant 16 heures. Ajoutez ensuite 200 millilitres d’eau de zéro degré Celsius au mélange et précipitez le mélange pour obtenir le produit brut. Dissoudre à plusieurs reprises le produit brut dans du N, N-diméthylformamide, puis précipiter pendant cinq cycles.
Après avoir précipité le produit brut, séchez-le à 80 degrés Celsius pendant deux heures pour obtenir le produit précoce. Effectuer la substitution ipso de l’ester méthylique de l’acide méthyl 4-butanoïque en ajoutant lentement 9,4 grammes de 4-butanoate de méthyle à une solution prérefroidie d’acide nitrique à 70% et agiter à moins deux degrés Celsius pendant trois heures. Ensuite, précipitez le mélange.
Filtrer avec 200 millilitres d’eau zéro degré Celsius et purifier dans N, N-diméthylformamide pour précipiter un produit solide. Hydrolysez le produit solide dans de l’acide trifluoroacétique à 90 degrés Celsius et placez-le dans un évaporateur rotatif avant de le sécher au four. Après dissolution du produit intermédiaire dans le tétrahydrofurane, ajouter lentement 1,43 gramme de borohydrure de sodium à zéro degré Celsius.
Après trois heures, retirer tous les solvants sous vide et suspendre le résidu dans une solution aqueuse/dichlorométhane un-à-un. Préparer le dichlorométhane pour extraire le produit de la couche aqueuse tout en enlevant la couche organique et sécher sur du sulfate de magnésium. Purifier ensuite le produit brut par chromatographie sur colonne de gel de silice à l’aide de méthanol dichlorométhane dans un rapport de 10:1.
Enfin, on obtient 5,31 grammes de poudre jaunâtre relativement pure NB carboxy. Préparer une solution homogène de gélatine en dissolvant cinq grammes de gélatine dans 100 millilitres d’eau désionisée et stockée à 37 degrés Celsius pour un lot de modification. Après avoir défini le rapport d’alimentation tel que décrit dans le manuscrit, dissoudre 1 060 milligrammes de carboxy NB dans cinq millilitres de diméthylsulfoxyde.
Pour activer les groupes carboxyle du carboxy NB, ajouter 746 milligrammes de chlorhydrate de 1-3-éthylcarbodimide dans la solution de méthylsulfoxyde de carboxy NB et agiter pendant cinq minutes. Une fois le chlorhydrate de 1-3-éthylcarbodimide dissous, ajouter 448 milligrammes de N-hydroxysuccinimide et agiter pendant cinq minutes. Utilisez un entonnoir à goutte pour déposer lentement le mélange à un taux de 0,5 millilitre par minute dans la solution de gélatine dissoute en agitant vigoureusement pour réagir à 45 degrés Celsius pendant quatre heures.
Après avoir dialysé la solution de gélatine NB contre l’excès d’eau désionisée pendant au moins trois jours, prélever, congeler et lyophiliser pour obtenir les mousses gélatine-NB. Conservez les mousses dans un dessèchement dans l’obscurité pour une utilisation ultérieure. Dissoudre les mousses de gélatine lyophilisée-NB dans de l’eau désionisée à 37 degrés Celsius immédiatement avant utilisation.
Les images MEB de la surface cornéenne blessée de la gélatine et de la protéine gélatine-NB-4 ont été obtenues, montrant que la morphologie de la protéine gélatine-NB-4 stable adhère à la surface cornéenne. Cependant, une surface cornéenne blessée traitée avec rien ou de la gélatine semble lisse. Les images de fluorescence de la surface colique des souris marquées par un revêtement moléculaire de gélatine et de gélatine-NB montrent que la gélatine-NB marquée par fluorescence a la capacité d’adhérer au tissu intestinal et de former un revêtement dense.
Cependant, l’intensité de fluorescence du groupe gélatine est très faible, ce qui indique qu’il n’adhère pas fermement à la paroi intestinale. Les images de fluorescence de la gélatine marqueuse et des plaques aminées traitées au revêtement moléculaire de gélatine-NB à zéro et 24 heures montrent que les deux peuvent initialement adhérer à la plaque. Après avoir versé du PBS et changé la plaque aminée toutes les quatre heures pendant 24 heures, seule la gélatine-NB maintient une forte fluorescence, indiquant qu’elle adhère fortement.
La spectroscopie de photons X de la liaison gélatine-NB-4 a démontré que les spectres d’une surface cornéenne et d’une surface traitée à la gélatine sont les mêmes. Cependant, un pic supplémentaire apparaît à 400 électronvolts, indiquant la formation de nombreuses liaisons CN dans le tissu après un traitement avec de la gélatine activée par UV-NB. La chose la plus importante à retenir est que lors de la synthèse de gélatine-NB dans différentes conditions d’application, il est nécessaire de mettre en place un gradient FR pré-expérimental pour explorer le meilleur effet d’attention.
Cette technique pourrait ouvrir la voie au développement de la médecine biosynthétique et régénérative. Les chercheurs peuvent se référer à la vidéo pour modifier le groupe afin de répondre aux besoins biomédicaux.
