В нашем протоколе подробно описан синтез нового адгезивного гидрогеля, желатина о-нитрозобензальдегида. В основном это решает проблему того, как максимизировать адгезию гидрогеля. В нашей технологии химические группы в водороде модифицируются, таким образом, проявляя активность химической реакции с химическими группами на поверхности тканей животных для достижения близкого изгиба и внимания.
Продукт, синтезированный по нашей методике, может поддерживать сильное долгосрочное внимание на поверхности тканей животных, тем самым эффективно способствуя восстановлению повреждений и регенерации тканей. Этот метод может дать представление о регенеративной медицине, включая повреждение биосистем. Ранее мы сообщали о применении продуктов, синтезированных этим методом, при повреждении роговицы и ВЗК.
Для начала растворяют приготовленные соединения, как описано в рукописи, в 40 миллилитрах N,N-диметилформамида и перемешивают при температуре окружающей среды в течение 16 часов. Затем добавьте в смесь 200 миллилитров воды с нулевым градусом Цельсия и осаждайте смесь для получения сырого продукта. Многократно растворяют сырой продукт в N, N-диметилформамиде, а затем осаждают в течение пяти циклов.
После осаждения сырого продукта высушите его при температуре 80 градусов Цельсия в течение двух часов, чтобы получить ранний продукт. Выполните ipso-замену метилового эфира 4-бутановой кислоты, медленно добавив 9,4 грамма метил-4-бутаноата в предварительно охлажденный раствор 70% азотной кислоты и перемешайте при минус двух градусах Цельсия в течение трех часов. Затем выпадайте смесь в осадок.
Отфильтруйте 200 миллилитрами воды с нулевым градусом Цельсия и очистите ее в N, N-диметилформамиде для осаждения твердого продукта. Гидролизуют твердый продукт в трифторуксусной кислоте при температуре 90 градусов Цельсия и помещают его во вращающийся испаритель перед сушкой в духовке. После растворения промежуточного продукта в тетрагидрофуране медленно добавьте 1,43 грамма борогидрида натрия при нуле градусов Цельсия.
Через три часа удалите все растворители под вакуумом и суспендируйте остаток в растворе воды / дихлорметана один к одному. Подготовьте дихлорметан для извлечения продукта из водного слоя, удалив органический слой, и высушите над сульфатом магния. Затем очистите сырой продукт с помощью колоночной хроматографии силикагеля с использованием дихлорметанола в соотношении 10:1.
Наконец, получите 5,31 грамма относительно чистого желтоватого порошка NB carboxy. Готовят однородный раствор желатина, растворяя пять граммов желатина в 100 миллилитрах деионизированной воды и храня при температуре 37 градусов Цельсия для одной партии модификации. После определения соотношения сырья, как описано в рукописи, растворите 1 060 миллиграммов карбокси NB в пяти миллилитрах диметилсульфоксида.
Чтобы активировать карбоксильные группы карбокси NB, добавьте 746 миллиграммов гидрохлорида 1-3-этилкарбодимида в раствор карбоксиметилсульфоксида NB и перемешивайте в течение пяти минут. После растворения гидрохлорида 1-3-этилкарбодимида добавьте 448 миллиграммов N-гидроксисукцинимида и перемешивайте в течение пяти минут. Используйте капельную воронку, чтобы медленно опустить смесь со скоростью 0,5 миллилитра в минуту в растворенный раствор желатина при энергичном перемешивании, чтобы он реагировал при 45 градусах Цельсия в течение четырех часов.
После диализа раствора желатина NB против избытка деионизированной воды в течение не менее трех дней соберите, заморозьте и лиофилизируйте его для получения пены желатин-NB. Храните пену в осушителе в темноте для дальнейшего использования. Растворите сублимированные пены желатина-NB в деионизированной воде при температуре 37 градусов Цельсия непосредственно перед использованием.
Были получены СЭМ-изображения поврежденной поверхности роговицы, обработанной желатином и белковым покрытием желатина-NB-4, обработанной поверхностью роговицы, показывающие, что морфология стабильного белка желатина-NB-4 прилипает к поверхности роговицы. Тем не менее, поврежденная поверхность роговицы, обработанная ничем или желатином, кажется гладкой. Флуоресцентные изображения поверхности толстой кишки мышей, помеченной желатином и молекулярным покрытием из желатина-NB, показывают, что флуоресцентно меченный желатин-NB обладает способностью прилипать к ткани кишечника и образовывать плотное покрытие.
Однако интенсивность флуоресценции желатиновой группы очень слабая, что указывает на то, что она не может прочно прилипать к стенке кишечника. Флуоресцентные изображения желатина метки и обработанных молекулярным покрытием пластин с молекулярным покрытием желатина-NB при нуле и 24 часах показывают, что оба могут изначально прилипать к пластине. После заливки PBS и замены аминованной пластины каждые четыре часа в течение 24 часов только желатин-NB поддерживает сильную флуоресценцию, что указывает на его сильное прилипание.
Рентгеновская фотонная спектроскопия связи желатин-NB-4 показала, что спектры поверхности роговицы и поверхности, обработанной желатином, совпадают. Однако дополнительный пик появляется при 400 электронвольт, что указывает на образование многих CN-связей в ткани после обработки УФ-активированным желатином-NB. Самое важное, что нужно помнить, это то, что при синтезе желатина-NB в различных условиях применения необходимо настроить предэкспериментальный градиент FR, чтобы исследовать наилучший эффект внимания.
Этот метод может проложить путь для развития биосинтетической и регенеративной медицины. Исследователи могут обратиться к видео, чтобы изменить группу в соответствии с биомедицинскими потребностями.
