Nosso protocolo descreve a síntese de um novo hidrogel adesivo, gelatina o-nitrosobenzaldeído, em detalhes. Resolve principalmente o problema de como maximizar a adesão do hidrogel. Em nossa tecnologia, os grupos químicos no hidrogênio são modificados, tendo assim a atividade de reação química com grupos químicos na superfície do tecido animal para alcançar uma flexão e atenção próximas.
O produto sintetizado pela nossa técnica pode manter uma forte atenção a longo prazo na superfície dos tecidos animais, promovendo assim eficazmente a reparação de danos e a regeneração dos tecidos. Este método poderia fornecer informações sobre uma medicina regenerativa, incluindo danos em biossistemas. Relatamos anteriormente a aplicação de produtos sintetizados por este método na lesão corneana e DII.
Para começar, dissolva os compostos preparados conforme descrito no manuscrito em 40 mililitros de N, N-dimetilformamida e mexa à temperatura ambiente por 16 horas. Em seguida, adicione 200 mililitros de água de zero grau Celsius à mistura e precipite a mistura para obter o produto bruto. Dissolva repetidamente o produto bruto em N, N-dimetilformamida e, em seguida, precipite por cinco ciclos.
Depois de precipitar o produto bruto, seque-o a 80 graus Celsius por duas horas para obter o produto inicial. Efectuar a substituição ipso do éster metílico do ácido metil 4-butanoico adicionando lentamente 9,4 gramas de 4-butanoato de metilo a uma solução pré-fria de ácido nítrico a 70% e mexer a menos dois graus Celsius durante três horas. Em seguida, precipite a mistura.
Filtrar com 200 mililitros de água Celsius de zero grau e purificá-la em N, N-dimetilformamida para precipitar um produto sólido. Hidrolisou o produto sólido em ácido trifluoroacético a 90 graus Celsius e colocou-o em um evaporador rotativo antes de secá-lo no forno. Depois de dissolver o produto intermédio em tetraidrofurano, adicionar lentamente 1,43 gramas de borohidreto de sódio a zero graus Celsius.
Após três horas, retire todos os solventes sob vácuo e suspenda o resíduo numa solução um-para-um de água/diclorometano. Prepare o diclorometano para extrair o produto da camada aquosa enquanto remove a camada orgânica e seque sobre o sulfato de magnésio. Em seguida, purificar o produto bruto por cromatografia em coluna de sílica gel usando metanol diclorometano na proporção de 10:1.
Finalmente, obtenha 5,31 gramas de pó amarelado relativamente puro NB carboxy. Prepare uma solução homogênea de gelatina dissolvendo cinco gramas de gelatina em 100 mililitros de água deionizada e armazenada a 37 graus Celsius para um lote de modificação. Após a definição da razão de alimentação conforme descrito no manuscrito, dissolver 1.060 miligramas de carboxi NB em cinco mililitros de sulfóxido de dimetila.
Para activar os grupos carboxila de carboxi NB, adicionar 746 miligramas de cloridrato de 1-3-etilcarbodimida à solução de carboximetilsulfóxido de NB carboxi e agitar durante cinco minutos. Após a dissolução do cloridrato de 1-3-etilcarbodimida, adicione 448 miligramas de N-hidroxisuccinimida e mexa por cinco minutos. Use um funil de gota para soltar lentamente a mistura a uma taxa de 0,5 mililitros por minuto na solução de gelatina dissolvida com agitação vigorosa para reagir a 45 graus Celsius por quatro horas.
Após a dialise da solução de gelatina NB contra o excesso de água desionizada por pelo menos três dias, colete, congele e liofilize para obter as espumas de gelatina-NB. Mantenha as espumas em um dessecate no escuro para uso posterior. Dissolva as espumas de gelatina-NB liofilizadas em água deionizada a 37 graus Celsius imediatamente antes do uso.
As imagens de MEV da gelatina da superfície corneana lesada e do revestimento proteico da superfície corneana tratada com revestimento proteico de gelatina-NB-4 foram obtidas, mostrando que a morfologia da proteína estável gelatina-NB-4 adere à superfície corneana. No entanto, uma superfície corneana lesionada tratada com nada ou gelatina parece lisa. Imagens de fluorescência da superfície colônica de camundongos marcada por gelatina e revestimento molecular gelatina-NB mostram que a gelatina-RN marcada fluorescentemente tem a capacidade de aderir ao tecido intestinal e formar um revestimento denso.
No entanto, a intensidade de fluorescência do grupo gelatina é muito fraca, indicando que ele não adere firmemente à parede intestinal. As imagens de fluorescência da gelatina de rótulo e das placas aminadas tratadas com revestimento molecular gelatina-NB em zero e 24 horas mostram que ambas podem aderir inicialmente à placa. Depois de derramar PBS e trocar a placa aminada a cada quatro horas por 24 horas, apenas a gelatina-NB mantém uma forte fluorescência, indicando que ela adere fortemente.
A espectroscopia de fótons de raios-X da ligação gelatina-NB-4 demonstrou que os espectros de uma superfície corneana e de uma superfície tratada com gelatina são os mesmos. No entanto, um pico extra aparece a 400 elétron-volt, indicando a formação de muitas ligações CN no tecido após o tratamento com gelatina-NB ativada por UV. A coisa mais importante a lembrar é que, ao sintetizar gelatina-RN em diferentes condições de aplicação, é necessário configurar o gradiente FR pré-experimento para explorar o melhor efeito de atenção.
Esta técnica pode abrir caminho para o desenvolvimento de medicina biossintética e regenerativa. Os pesquisadores podem consultar o vídeo para modificar o grupo para atender às necessidades biomédicas.
