우리의 프로토콜은 새로운 접착 하이드로겔인 젤라틴 o-니트로소벤즈알데히드의 합성을 자세히 설명합니다. 주로 하이드로겔의 접착력을 극대화하는 방법의 문제를 해결합니다. 우리의 기술에서는, 수소에 있는 화학물질 그룹은 이렇게 변형됩니다, 따라서 가까운 구부리고 주의를 달성하기 위하여 동물 조직 표면에 화학 그룹을 가진 화학 반응의 활동이 있습니다.
우리의 기술에 의해 합성된 제품은 동물 조직의 표면에 강한 장기적 관심을 유지할 수 있으므로 손상 복구 및 조직 재생을 효과적으로 촉진합니다. 이 방법은 생물 시스템의 손상을 포함하여 재생 의학에 대한 통찰력을 제공 할 수 있습니다. 우리는 이전에 각막 손상 및 IBD에서 이 방법으로 합성된 제품의 적용을 보고했습니다.
시작하기 위해, 원고에 설명 된대로 제조 된 화합물을 40 밀리리터의 N, N- 디메틸 포름 아미드에 용해시키고 상온에서 16 시간 동안 교반한다. 그런 다음 섭씨 0 도의 물 200 밀리리터를 혼합물에 첨가하고 혼합물을 침전시켜 조 생성물을 얻는다. 조 생성물을 N, N- 디메틸 포름 아미드에 반복적으로 용해시킨 다음 5 사이클 동안 침전시킨다.
조생성물을 침전시킨 후, 이를 섭씨 80도에서 2시간 동안 건조시켜 초기 생성물을 얻었다. 70 % 질산의 예냉 용액에 메틸 4- 부타 노 에이트 9.4g을 천천히 첨가하여 메틸 4- 부탄산 메틸 에스테르의 입소 치환을 수행하고 섭씨 영하 2도에서 3 시간 동안 교반한다. 그런 다음 혼합물을 침전시킵니다.
섭씨 0도의 물 200ml로 여과하고 N, N-디메틸포름아미드로 정제하여 고체 생성물을 침전시킵니다. 고체 생성물을 섭씨 90도에서 트리플루오로아세트산으로 가수분해하고 오븐에서 건조하기 전에 회전 증발기에 넣습니다. 중간 생성물을 테트라 하이드로 푸란에 용해시킨 후, 섭씨 0도에서 천천히 1.43 그램의 수소화 붕소 나트륨을 첨가한다.
3시간 후 진공 상태에서 모든 용매를 제거하고 잔류물을 일대일 물/디클로로메탄 용액에 현탁합니다. 디클로로메탄을 준비하여 유기층을 제거하면서 수성층으로부터 생성물을 추출하고 황산마그네슘으로 건조시킨다. 그런 다음 디클로로메탄 메탄올을 10:1 비율로 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 조 생성물을 정제합니다.
마지막으로, 5.31 그램의 비교적 순수한 황색 분말 NB 카르복시를 얻는다. 5 그램의 젤라틴을 100 밀리리터의 탈 이온수에 용해시켜 균질 한 젤라틴 용액을 제조하고 한 배치의 변형을 위해 섭씨 37도에서 보관한다. 원고에 기술된 바와 같이 공급비를 정의한 후, 1, 060 밀리그램의 NB 카르복시를 5 밀리리터의 디메틸 설폭사이드에 용해시킨다.
NB 카르복시의 카르복실기를 활성화시키기 위해, 746 밀리그램의 1-3-에틸카르보디미드 염산염을 NB 카르복시 메틸술폭사이드 용액에 첨가하고 5분 동안 교반한다. 1-3-에틸카르보디미드 염산염이 용해된 후 448mg의 N-하이드록시석신이미드를 넣고 5분 동안 저어줍니다. 적하 깔때기를 사용하여 분당 0.5ml의 속도로 혼합물을 용해된 젤라틴 용액에 넣고 격렬하게 저어주면서 섭씨 45도에서 4시간 동안 반응시킵니다.
적어도 3일 동안 과량의 탈이온수에 대해 젤라틴 NB 용액을 투석한 후, 이를 수집, 동결 및 동결건조하여 젤라틴-NB 폼을 얻었다. 추가 사용을 위해 거품을 어두운 곳에서 건조시키는 곳에 보관하십시오. 동결 건조 젤라틴-NB 폼을 사용 직전에 섭씨 37도의 탈이온수에 녹입니다.
손상된 각막 표면의 SEM 이미지를 얻어 젤라틴과 젤라틴-NB-4 단백질이 코팅된 각막 표면의 형태가 각막 표면에 안정적으로 부착되어 있음을 보여줍니다. 그러나 아무것도 또는 젤라틴으로 치료하지 않은 손상된 각막 표면은 매끄럽게 보입니다. 젤라틴 및 젤라틴-NB 분자 코팅에 의해 표지된 마우스 결장 표면의 형광 이미지는 형광 표지된 젤라틴-NB가 장 조직에 부착되어 치밀한 코팅을 형성하는 능력을 가지고 있음을 보여줍니다.
그러나 젤라틴 그룹의 형광 강도는 매우 약하여 장벽에 단단히 부착되지 않음을 나타냅니다. 0시간 및 24시간에서 라벨 젤라틴 및 젤라틴-NB 분자 코팅 처리된 아민화 플레이트의 형광 이미지는 둘 다 초기에 플레이트에 부착될 수 있음을 보여줍니다. PBS를 붓고 24시간 동안 4시간마다 아민화된 플레이트를 교체한 후 젤라틴-NB만이 강한 형광을 유지하여 강하게 접착됨을 나타냅니다.
젤라틴-NB-4 결합의 X선 광자 분광법은 각막 표면과 젤라틴으로 처리된 표면의 스펙트럼이 동일하다는 것을 입증했습니다. 그러나 400 전자 볼트에서 추가 피크가 나타나며, 이는 UV 활성화 젤라틴-NB로 처리한 후 조직에 많은 CN 결합이 형성됨을 나타냅니다. 기억해야 할 가장 중요한 점은 다양한 적용 조건에서 젤라틴-NB를 합성할 때 최상의 주의 효과를 탐색하기 위해 실험 전 FR 기울기를 설정해야 한다는 것입니다.
이 기술은 생합성 및 재생 의학을 개발할 수 있는 길을 열 수 있습니다. 연구원은 비디오를 참조하여 생물 의학적 요구 사항을 충족하도록 그룹을 수정할 수 있습니다.
