Protokolümüz, yeni bir yapışkan hidrojel olan jelatin o-nitrosobenzaldehitin sentezini ayrıntılı olarak açıklamaktadır. Temel olarak, hidrojelin yapışmasının nasıl en üst düzeye çıkarılacağı sorununu çözer. Teknolojimizde, hidrojendeki kimyasal gruplar modifiye edilir, böylece yakın bükülme ve dikkat elde etmek için hayvan dokusu yüzeyindeki kimyasal gruplarla kimyasal reaksiyon aktivitesine sahip olur.
Tekniğimiz tarafından sentezlenen ürün, hayvan dokularının yüzeyinde güçlü bir uzun vadeli dikkat sağlayabilir, böylece hasar onarımını ve doku yenilenmesini etkili bir şekilde teşvik edebilir. Bu yöntem, biyosistemlerdeki hasar da dahil olmak üzere rejeneratif bir tıbba dair fikir verebilir. Bu yöntemle sentezlenen ürünlerin kornea yaralanması ve IBD'de uygulandığını daha önce bildirmiştik.
Başlamak için, hazırlanan bileşikleri makalede açıklandığı gibi 40 mililitre N, N-dimetilformamid içinde çözün ve ortam sıcaklığında 16 saat boyunca karıştırın. Daha sonra karışıma 200 mililitre sıfır santigrat derece su ekleyin ve ham ürünü elde etmek için karışımı çökeltin. Ham ürünü tekrar tekrar N, N-dimetilformamid içinde çözün ve ardından beş döngü boyunca çökeltin.
Ham ürünü çökelttikten sonra, erken ürünü elde etmek için iki saat boyunca 80 santigrat derecede kurutun. Metil 4-bütanoik asit metil esterinin ipso ikamesini,% 70'lik bir nitrik asit ön soğutma çözeltisine yavaşça 9.4 gram metil 4-butanoat ekleyerek gerçekleştirin ve üç saat boyunca eksi iki santigrat derecede karıştırın. Sonra karışımı çökeltin.
200 mililitre sıfır santigrat derece su ile filtreleyin ve katı bir ürünü çökeltmek için N, N-dimetilformamid içinde arıtın. Katı ürünü 90 santigrat derecede trifloroasetik asit içinde hidrolize edin ve fırında kurutmadan önce döner bir evaporatöre yerleştirin. Ara ürünü tetrahidrofuran içinde çözdükten sonra, sıfır santigrat derecede yavaşça 1.43 gram sodyum borohidrit ekleyin.
Üç saat sonra, tüm çözücüleri bir vakum altında çıkarın ve kalıntıyı bire bir su / diklorometan çözeltisinde askıya alın. Organik tabakayı çıkarırken ürünü sulu tabakadan çıkarmak için diklorometan hazırlayın ve magnezyum sülfat üzerinde kurutun. Daha sonra ham ürünü, 10: 1 oranında diklorometan metanol kullanarak silika jel kolon kromatografisi ile saflaştırın.
Son olarak, 5.31 gram nispeten saf sarımsı toz NB karboksisi elde edin. Beş gram jelatini 100 mililitre deiyonize suda çözerek homojen bir jelatin çözeltisi hazırlayın ve bir parti modifikasyon için 37 santigrat derecede saklayın. Makalede açıklandığı gibi besleme oranını tanımladıktan sonra, beş mililitre dimetil sülfoksit içinde 1.060 miligram NB karboksisini çözün.
NB karboksinin karboksil gruplarını aktive etmek için, NB karboksi metilsülfoksit çözeltisine 746 miligram 1-3-etilkarbodimid hidroklorür ekleyin ve beş dakika karıştırın. 1-3-etilkarbodimid hidroklorür çözüldükten sonra, 448 miligram N-hidroksisüksinamid ekleyin ve beş dakika karıştırın. Karışımı dakikada 0,5 mililitre oranında çözünmüş jelatin çözeltisine yavaşça düşürmek için bir damlama hunisi kullanın, dört saat boyunca 45 santigrat derecede reaksiyona girmek için kuvvetli bir karıştırma ile.
Jelatin NB çözeltisini aşırı deiyonize suya karşı en az üç gün boyunca diyalize ettikten sonra, jelatin-NB köpüklerini elde etmek için toplayın, dondurun ve liyofilize edin. Daha fazla kullanım için köpükleri karanlıkta kurutucuda tutun. Dondurarak kuru jelatin-NB köpüklerini kullanımdan hemen önce 37 santigrat derecede deiyonize suda çözün.
Yaralı kornea yüzey jelatini ve jelatin-NB-4 protein kaplaması ile işlenmiş kornea yüzeyinin SEM görüntüleri elde edilmiş ve jelatin-NB-4 protein stabilinin morfolojisinin kornea yüzeyine yapıştığını göstermiştir. Bununla birlikte, hiçbir şey veya jelatin ile muamele edilmemiş yaralı bir kornea yüzeyi pürüzsüz görünmektedir. Jelatin ve jelatin-NB moleküler kaplama ile etiketlenmiş farelerin kolonik yüzeyinin floresan görüntüleri, floresan olarak etiketlenmiş jelatin-NB'nin bağırsak dokusuna yapışma ve yoğun bir kaplama oluşturma yeteneğine sahip olduğunu göstermektedir.
Bununla birlikte, jelatin grubunun floresan yoğunluğu çok zayıftır, bu da bağırsak duvarına sıkıca yapışmadığını gösterir. Etiket jelatininin ve jelatin-NB moleküler kaplama ile işlenmiş aminasyonlu plakaların sıfır ve 24 saat içindeki floresan görüntüleri, her ikisinin de başlangıçta plakaya yapışabileceğini göstermektedir. PBS'yi döktükten ve aminlenmiş plakayı 24 saat boyunca her dört saatte bir değiştirdikten sonra, sadece jelatin-NB güçlü bir floresan tutar ve bu da güçlü bir şekilde yapıştığını gösterir.
Jelatin-NB-4 bağının X-ışını foton spektroskopisi, bir kornea yüzeyinin spektrumunun ve jelatin ile muamele edilmiş bir yüzeyin spektrumlarının aynı olduğunu göstermiştir. Bununla birlikte, 400 elektron voltta ekstra bir tepe noktası ortaya çıkar ve UV ile aktive edilmiş jelatin-NB ile tedaviden sonra dokuda birçok CN bağının oluşumunu gösterir. Hatırlanması gereken en önemli şey, jelatin-NB'yi farklı uygulama koşullarında sentezlerken, en iyi dikkat etkisini keşfetmek için deney öncesi FR gradyanının kurulmasının gerekli olmasıdır.
Bu teknik, biyosentetik ve rejeneratif tıbbın geliştirilmesinin yolunu açabilir. Araştırmacılar, biyomedikal ihtiyaçları karşılamak için grubu değiştirmek için videoya başvurabilirler.
