マウス子宮仙靭帯と骨盤底器官の分離と特性評価

このプロトコルは、骨盤臓器脱(POP)などの子宮仙骨靭帯および骨盤底の状態に関する研究のアクセシビリティを拡大し、ミラーリング骨盤底組織の解剖を容易にします。この技術により、解剖学的付着を維持し、周囲の骨盤底器官を回収しながら、マウスから両方の子宮仙靭帯を分離することができます。私たちの方法は、妊娠や病気が組織の機械的挙動にどのように影響するかについてのこの研究を可能にする前臨床モデルを確立します。

この方法は、女性の健康関連研究のための新しいツールを確立します。主な闘争は、子宮仙骨靭帯の特定と取り扱いです。私のアドバイスは、これらの組織は小さくて壊れやすいので、十分な時間と注意を払うことです。

安楽死させたマウスをパッドの上に置き、四肢を固定することから始めます。ハサミで腹部を1〜1.5センチの長さで切開します。切開部の頭蓋側、尾側、外側の皮膚をそっと分離します。

マウスを裏返して背側を上に向け、後肢に向かって皮膚をそっと剥がします。手足を固定し、胸部から骨盤まで腹部に1センチの長さの切開を行います。臓器を胸部に向かってそっと押して、はっきりと見えるようにします。

一対の鉗子を使用してPBSで洗浄した後、骨盤脂肪組織を引っ張ってきれいにします。子宮角を特定し、卵巣からそれらを切り取ります。次に、それらを視野から引き出し、頸部接続を切断します。

膀胱接続から尿管を切断します。結腸を子宮頸部のできるだけ近くで切ります。パッド付きのマウスを解剖スコープの下に置き、子宮仙骨靭帯を視覚化します。

鉗子を使用して、子宮仙骨靭帯から周囲の脂肪をそっと取り除きます。両方の靭帯の頸部の端の周りに5-0縫合糸を結びます。子宮仙骨靭帯の頸部端を切り取り、子宮頸部の一部を取り付けたままにします。

次に、靭帯の底から筋肉を切り取ります。解剖した組織をPBSを含む浴に入れて、組織の水分補給を維持します。残りの組織の頸部端を切断し、機械的試験および画像診断のために子宮頸部を取り付けたままにする。

脂肪が取り除かれたら、鉗子で膀胱を持ち、約40度の角度でゆっくりと持ち上げます。はさみを使用して、子宮頸部の真上の遠位側で膀胱を切断します。水分補給を維持するために、膀胱をPBSの入ったお風呂に入れます。

次に、鉗子を使用して、子宮頸部を約40度の角度で持ち上げます。直腸と子宮頸部をつなぐ直腸膣筋膜を特定し、メスとの接続を切断します。はさみを使用して、恥骨合成で恥骨を切断します。

骨盤底をゆっくりと広げて、組織の挿入の視認性を高めます。鉗子で子宮頸部を持ち、できるだけ外陰部の近くで切ります。水分補給を維持するために組織をPBSに入れます。

鉗子を使用して、直腸を胸部に向かってそっと引っ張ります。直腸を特定し、肛門でそれを切断します。水分補給を維持するために直腸をPBSに入れます。

関心のあるすべての組織が採取されると、骨盤から大腿骨が脱臼します。骨盤骨を遠位端と近位端から切り取ります。解剖した組織をPBSに入れます。

酵素処理は、子宮仙靭帯が所定の全球変位で経験する平均軸方向ピークと弛緩ストレッサーを減少させるように見え、コラーゲンとグリコサミノグリカンが靭帯の軸方向の硬さに寄与していることを示しています。機械的に試験された各試料の平均軸ひずみは、酵素処理されたサンプルの全体的な軸ひずみが対照サンプルと同等またはそれ以上であったことを示しており、巨視的ストレスの減少は、より小さな株ではなく酵素処理によるものであることが示唆されています。子宮仙骨靭帯の中間部のラマン分光法は、酵素処理がマウス子宮仙靭帯の生化学的組成を変化させたことを示唆しています。

コラゲナーゼ処理された子宮仙靭帯は、コラーゲン含有量が減少し、水分とヒアルロン酸が減少しました。コンドロイチナーゼ処理された子宮仙靭帯は、ヒアルロン酸が少なく、水分とコラーゲンの含有量も低かった。特にUSLとその周辺組織の損傷を避けるためにUSLと骨盤内臓器の周りの沈着物が必要であるという事実をクリアするときは、細部への注意が非常に重要です。

POPに影響を与えると仮定した遺伝的変異を有するマウスを使用して、USLおよび他の骨盤底組織についてさらなる調査を行うことができます。私たちのプロトコルは、USLの機械的挙動がPOPの重要な危険因子である妊娠の機能をどのように変化させるかについての調査を含む、さまざまな新しい研究をすでに可能にしています。