Этот протокол расширит доступность исследований состояний маточно-крестцовых связок и тазового дна, таких как пролапс тазовых органов или СОЗ, и облегчит рассечение зеркальной ткани тазового дна. Этот метод позволяет изолировать обе маточно-крестцовые связки от мыши, сохраняя при этом анатомические прикрепления и извлекая окружающие органы тазового дна. Наш метод устанавливает доклиническую модель, которая позволяет изучить, как беременность или болезнь влияют на механическое поведение тканей.
Этот метод создает новый инструмент для исследований, связанных с женским здоровьем. Основная борьба заключается в выявлении и обработке маточно-крестцовой связки. Мой совет - уделять достаточно времени и ухода, потому что эти ткани маленькие и хрупкие.
Начните с того, что положите усыпленную мышь на коврик и прижмите четыре конечности. Сделайте ножницами разрез на животе длиной от одного до 1,5 сантиметра. Аккуратно отделите кожу на краниальной, каудальной и боковой сторонах разреза.
Переверните мышь спинной стороной вверх и аккуратно оттяните кожу к задним конечностям. Прижмите конечности и сделайте разрез длиной в один сантиметр в животе от грудной клетки до таза. Осторожно подтолкните органы к грудной клетке для четкого обзора.
После орошения ПБС с помощью пары щипцов потяните и очистите тазовую жировую ткань. Определите рога матки, а затем отрежьте их от яичников. Теперь вытащите их из поля зрения и разорвите шейное соединение.
Отрежьте мочеточники от соединения мочевого пузыря. Разрежьте толстую кишку как можно ближе к шейке матки. Поместите мышь с подушечкой под рассекающий прицел, чтобы визуализировать маточно-крестцовые связки.
Используйте щипцы, чтобы аккуратно очистить маточно-крестцовые связки от окружающего жира. Завяжите шов 5-0 вокруг шейного конца обеих связок. Отрежьте шейный конец маточно-крестцовой связки, оставив прикрепленным кусочек шейки матки.
Теперь отрежьте кусочек мышцы от нижней части связки. Поместите рассеченную ткань в ванну, содержащую PBS, чтобы поддерживать гидратацию тканей. Отрежьте шейный конец оставшейся ткани, оставив прикрепленный кусочек шейки матки для механического тестирования и визуализации.
Как только жир будет очищен, удерживайте мочевой пузырь щипцами и осторожно поднимайте его под углом примерно 40 градусов. Используйте ножницы, чтобы разрезать мочевой пузырь на дистальной стороне прямо над шейкой матки. Поместите мочевой пузырь в ванну с PBS для поддержания гидратации.
Теперь используйте щипцы, чтобы поднять шейку матки под приблизительным углом 40 градусов. Определите ректовагинальную фасцию, соединяющую прямую кишку и шейку матки, и разорвите соединение со скальпелем. Используйте ножницы, чтобы разрезать лобковую кость в месте лобкового синтеза.
Аккуратно расширьте тазовое дно, чтобы увеличить видимость тканевых вставок. Придерживайте шейку матки щипцами и разрежьте ее как можно ближе к вульве. Поместите ткань в PBS для поддержания гидратации.
Используйте щипцы, чтобы осторожно потянуть прямую кишку к грудной клетке. Определите прямую кишку и разрезайте ее у заднего прохода. Поместите прямую кишку в PBS для поддержания гидратации.
После того, как все ткани, представляющие интерес, будут собраны, вывихните бедренные кости из таза. Разрежьте тазовую кость от дистального и проксимального концов. Поместите рассеченную ткань в PBS.
Лечение ферментами, по-видимому, уменьшало средний осевой пик и ослабляло стрессоры, которые испытывает маточнокрестцовая связка при предписанных глобальных смещениях, что указывает на то, что коллаген и гликозаминогликаны способствовали осевой жесткости связок. Средние осевые штаммы для каждого образца, подвергшегося механическим испытаниям, указывают на то, что глобальный осевой штамм в образцах, обработанных ферментами, был аналогичен или больше, чем в контролируемом образце, что позволяет предположить, что снижение макроскопического стресса было связано с обработкой ферментами, а не с меньшими штаммами. Рамановская спектроскопия промежуточного участка маточнокрестцовой связки предполагает, что ферментное лечение изменило биохимический состав маточно-крестцовых связок мышей.
В маточно-крестцовых связках, обработанных коллагеназой, было снижено содержание коллагена, а также уменьшилось количество воды и гиалуроновой кислоты. Маточно-крестцовые связки, обработанные хондроитиназой, имели меньше гиалуроновой кислоты, а также более низкое содержание воды и коллагена. Внимание к деталям очень важно, особенно при устранении того факта, что отложения вокруг USL и органов малого таза здесь необходимы, чтобы избежать повреждения USL и окружающих его тканей.
Дальнейшие исследования могут быть проведены на USL и других тканях тазового дна с использованием мышей, которые имеют генетические вариации, которые, как предполагается, влияют на СОЗ. Наш протокол уже позволяет проводить ряд новых исследований, в том числе изучение того, как механическое поведение USL изменяет функцию беременности, что является ключевым фактором риска развития СОЗ.
