Esse protocolo ampliará a acessibilidade das pesquisas sobre o ligamento uterossacro e as condições do assoalho pélvico, como o prolapso de órgãos pélvicos, ou POP, e facilitará a dissecção do tecido espelhado do assoalho pélvico. Esta técnica permite o isolamento de ambos os ligamentos uterossacrais de um camundongo, mantendo os anexos anatômicos e recuperando os órgãos do assoalho pélvico circundantes. Nosso método estabelece um modelo pré-clínico que permite estudar como a gravidez ou doença influencia o comportamento mecânico tecidual.
Esse método estabelece uma nova ferramenta para a pesquisa em saúde da mulher. A principal luta é identificar e manusear o ligamento uterossacro. Meu conselho é ter tempo e cuidados adequados, porque esses tecidos são pequenos e frágeis.
Comece colocando um mouse eutanasiado em uma almofada e fixando os quatro membros para baixo. Faça uma incisão de um a 1,5 centímetro de comprimento no abdômen com tesoura. Separe suavemente a pele nos lados cranial, caudal e lateral da incisão.
Vire o mouse para encarar o lado dorsal para cima e descasque suavemente a pele em direção aos membros posteriores. Fixe os membros e faça uma incisão de um centímetro de comprimento no abdômen do tórax até a pelve. Empurre suavemente os órgãos em direção ao tórax para uma visão clara.
Após a irrigação com PBS usando um par de pinças, truxe e limpe o tecido adiposo pélvico. Identifique os chifres uterinos e, em seguida, corte-os dos ovários. Agora, retire-os do campo de visão e corte a conexão cervical.
Separe os ureteres da conexão da bexiga. Corte o cólon o mais próximo possível do colo do útero. Coloque o mouse com a almofada sob um escopo dissecante para visualizar os ligamentos uterossacros.
Use pinças para limpar suavemente qualquer gordura circundante dos ligamentos uterossacros. Amarre uma sutura 5-0 ao redor da extremidade cervical de ambos os ligamentos. Corte a extremidade cervical do ligamento uterossacro, deixando um pedaço do colo do útero preso.
Agora, corte um pedaço de músculo da parte inferior do ligamento. Colocar o tecido dissecado em um banho contendo PBS para manter a hidratação do tecido. Corte a extremidade cervical do tecido restante, deixando um pedaço do colo do útero preso para testes mecânicos e de imagem.
Uma vez que a gordura tenha sido limpa, segure a bexiga com pinças e levemente levante-a em um ângulo de aproximadamente 40 graus. Use uma tesoura para cortar a bexiga no lado distal logo acima do colo do útero. Coloque a bexiga em um banho com PBS para manter a hidratação.
Agora, use a pinça para levantar o colo do útero em um ângulo aproximado de 40 graus. Identificar a fáscia retovaginal que conecta o reto e o colo do útero e cortar a conexão com o bisturi. Use uma tesoura para cortar o osso púbico na síntese púbica.
Alargar suavemente o assoalho pélvico para aumentar a visibilidade das inserções de tecido. Segure o colo do útero com pinças e corte-o o mais próximo possível da vulva. Coloque o tecido em PBS para manter a hidratação.
Use a pinça para puxar suavemente o reto em direção ao tórax. Identifique o reto e corte-o no ânus. Coloque o reto em PBS para manter a hidratação.
Uma vez que todos os tecidos de interesse são colhidos, deslocar os fêmures da pelve. Cortar o osso pélvico das extremidades distal e proximal. Colocar o tecido dissecado em PBS.
O tratamento enzimático pareceu reduzir o pico axial médio e os estressores relaxados que o ligamento uterossacro experimenta nos deslocamentos globais prescritos, indicando que o colágeno e os glicosaminoglicanos contribuíram para a rigidez axial dos ligamentos. As deformações axiais médias para cada espécime mecanicamente testado indicam que a deformação axial global nas amostras tratadas com enzima foi semelhante ou maior do que a amostra controlada, sugerindo que a redução do estresse macroscópico foi devida ao tratamento enzimático, em vez de cepas menores. A espectroscopia Raman da seção intermediária do ligamento uterossacro sugere que os tratamentos enzimáticos alteraram a composição bioquímica dos ligamentos uterossacrais murinos.
Os ligamentos uterossacrais tratados com colagenase apresentaram diminuição do conteúdo de colágeno, bem como diminuição de água e ácido hialurônico. Os ligamentos uterossacrais tratados com condroitinase apresentaram menor teor de ácido hialurônico, além de menor teor de água e colágeno. A atenção aos detalhes é muito importante, especialmente ao limpar o fato de que os depósitos ao redor da USL e órgãos pélvicos aqui são necessários para evitar danificar a USL e seus tecidos circundantes.
Investigações adicionais podem ser conduzidas na USL e em outros tecidos do assoalho pélvico usando camundongos que têm variações genéticas que hipotetizam afetar a POP. Nosso protocolo já está possibilitando uma série de novos estudos, incluindo a investigação de como o comportamento mecânico das USLs altera uma função da gravidez, que é um fator de risco chave para POP.
