Questo protocollo amplierà l'accessibilità della ricerca sulle condizioni del legamento uterosacrale e del pavimento pelvico, come il prolasso degli organi pelvici o POP, e faciliterà la dissezione del tessuto del pavimento pelvico specchiante. Questa tecnica consente l'isolamento di entrambi i legamenti uterosacrali da un topo mantenendo gli attaccamenti anatomici e recuperando gli organi del pavimento pelvico circostante. Il nostro metodo stabilisce un modello preclinico che consente questo studio di come la gravidanza o la malattia influenzano il comportamento meccanico dei tessuti.
Questo metodo stabilisce un nuovo strumento per la ricerca relativa alla salute delle donne. La lotta principale è identificare e gestire il legamento uterosacrale. Il mio consiglio è di prendersi il tempo e la cura adeguati perché questi tessuti sono piccoli e fragili.
Inizia mettendo un topo eutanasia su un pad e bloccando i quattro arti verso il basso. Fai un'incisione lunga da uno a 1,5 centimetri sull'addome con le forbici. Separare delicatamente la pelle sui lati cranico, caudale e laterale dell'incisione.
Capovolgere il mouse per affrontare il lato dorsale verso l'alto e staccare delicatamente la pelle verso gli arti posteriori. Appuntare gli arti e fare un'incisione lunga un centimetro nell'addome dal torace al bacino. Spingere delicatamente gli organi verso il torace per una visione chiara.
Dopo l'irrigazione con PBS usando un paio di pinze, tirare e cancellare il tessuto adiposo pelvico. Identificare le corna uterine e poi tagliarle dalle ovaie. Ora, tirali fuori dal campo visivo e recidi la connessione cervicale.
Recidere gli ureteri dalla connessione della vescica. Tagliare il colon il più vicino possibile alla cervice. Posizionare il mouse con il pad sotto un cannocchiale da dissezione per visualizzare i legamenti uterosacrali.
Utilizzare una pinza per eliminare delicatamente il grasso circostante dai legamenti uterosacrali. Legare una sutura 5-0 intorno all'estremità cervicale di entrambi i legamenti. Tagliare l'estremità cervicale del legamento uterosacrale, lasciando un pezzo della cervice attaccato.
Ora, taglia un pezzo di muscolo dal fondo del legamento. Posizionare il fazzoletto sezionato in un bagno contenente PBS per mantenere l'idratazione dei tessuti. Tagliare l'estremità cervicale del tessuto rimanente, lasciando un pezzo di cervice attaccato per test meccanici e imaging.
Una volta che il grasso è stato eliminato, tenere la vescica con una pinza e sollevarla delicatamente con un angolo di circa 40 gradi. Usa le forbici per tagliare la vescica sul lato distale proprio sopra la cervice. Posizionare la vescica in un bagno con PBS per mantenere l'idratazione.
Ora, usa la pinza per sollevare la cervice con un angolo approssimativo di 40 gradi. Identificare la fascia rettovaginale che collega il retto e la cervice e recidere la connessione con il bisturi. Usa le forbici per tagliare l'osso pubico alla sintesi pubica.
Allargare delicatamente il pavimento pelvico per aumentare la visibilità delle inserzioni di tessuto. Tenere la cervice con una pinza e tagliarla il più vicino possibile alla vulva. Posizionare il tessuto in PBS per mantenere l'idratazione.
Utilizzare la pinza per tirare delicatamente il retto verso il torace. Identificare il retto e tagliarlo all'ano. Posizionare il retto in PBS per mantenere l'idratazione.
Una volta raccolti tutti i tessuti di interesse, dislocare i femori dal bacino. Tagliare l'osso pelvico dalle estremità distali e prossimali. Posizionare il tessuto sezionato in PBS.
Il trattamento enzimatico sembrava ridurre il picco assiale medio e i fattori di stress rilassati che il legamento uterosacrale sperimenta a spostamenti globali prescritti, indicando che il collagene e i glicosaminoglicani hanno contribuito alla rigidità assiale dei legamenti. Le deformazioni assiali medie per ciascun campione testato meccanicamente indicano che la deformazione assiale globale nei campioni trattati con enzimi era simile o più grande del campione controllato, suggerendo che la riduzione dello stress macroscopico era dovuta al trattamento enzimatico, piuttosto che a ceppi più piccoli. La spettroscopia Raman della sezione intermedia del legamento uterosacrale suggerisce che i trattamenti enzimatici hanno alterato la composizione biochimica dei legamenti uterosacrali murini.
I legamenti uterosacrali trattati con collagenasi avevano un ridotto contenuto di collagene, così come una diminuzione dell'acqua e dell'acido ialuronico. I legamenti uterosacrali trattati con condroitinasi avevano meno acido ialuronico, oltre a un contenuto inferiore di acqua e collagene. L'attenzione ai dettagli è molto importante, soprattutto quando si chiarisce il fatto che i depositi intorno all'USL e agli organi pelvici qui sono necessari per evitare di danneggiare l'USL e i suoi tessuti circostanti.
Ulteriori indagini possono essere condotte sull'USL e su altri tessuti del pavimento pelvico utilizzando topi che hanno variazioni genetiche che si ipotizza influenzino il POP. Il nostro protocollo sta già consentendo una serie di nuovi studi, tra cui l'indagine su come il comportamento meccanico delle USL cambia una funzione della gravidanza, che è un fattore di rischio chiave per POP.
