Ce protocole élargira l’accessibilité de la recherche sur les affections du ligament utéro-sacré et du plancher pelvien, comme le prolapsus des organes pelviens, et facilitera la dissection du tissu miroir du plancher pelvien. Cette technique permet d’isoler les deux ligaments utéro-sacrés d’une souris tout en maintenant les attaches anatomiques et en récupérant les organes du plancher pelvien environnants. Notre méthode établit un modèle préclinique qui permet cette étude de la façon dont la grossesse ou la maladie influence le comportement mécanique des tissus.
Cette méthode établit un nouvel outil pour la recherche liée à la santé des femmes. La lutte principale consiste à identifier et à manipuler le ligament utéro-sacré. Mon conseil est de prendre suffisamment de temps et de soins parce que ces tissus sont petits et fragiles.
Commencez par placer une souris euthanasiée sur un coussinet et épingler les quatre membres vers le bas. Faites une incision d’un à 1,5 centimètre de long sur l’abdomen avec des ciseaux. Séparez doucement la peau des côtés crânien, caudal et latéral de l’incision.
Retournez la souris pour faire face à la face dorsale vers le haut et décollez doucement la peau vers les membres postérieurs. Épinglez les membres et faites une incision d’un centimètre de long dans l’abdomen du thorax au bassin. Poussez doucement les organes vers le thorax pour une vue dégagée.
Après l’irrigation avec PBS à l’aide d’une paire de pinces, tirez et nettoyez le tissu adipeux pelvien. Identifiez les cornes utérines, puis coupez-les des ovaires. Maintenant, sortez-les du champ de vision et coupez la connexion cervicale.
Couper les uretères de la connexion de la vessie. Coupez le côlon le plus près possible du col de l’utérus. Placez la souris avec le tampon sous une lunette de dissection pour visualiser les ligaments utéro-sacrés.
Utilisez une pince pour éliminer doucement toute graisse environnante des ligaments utéro-sacrés. Attachez une suture 5-0 autour de l’extrémité cervicale des deux ligaments. Coupez l’extrémité cervicale du ligament utéro-sacré, en laissant un morceau du col de l’utérus attaché.
Maintenant, coupez un morceau de muscle du bas du ligament. Placez le tissu disséqué dans un bain contenant du PBS pour maintenir l’hydratation des tissus. Coupez l’extrémité cervicale du tissu restant, en laissant un morceau de col de l’utérus attaché pour les tests mécaniques et l’imagerie.
Une fois la graisse éliminée, tenez la vessie avec une pince et soulevez-la doucement à un angle d’environ 40 degrés. Utilisez des ciseaux pour couper la vessie du côté distal, juste au-dessus du col de l’utérus. Placez la vessie dans un bain avec PBS pour maintenir l’hydratation.
Maintenant, utilisez la pince pour soulever le col de l’utérus à un angle approximatif de 40 degrés. Identifiez le fascia rectovaginal reliant le rectum et le col de l’utérus et coupez la connexion avec le scalpel. Utilisez des ciseaux pour couper l’os pubien à la synthèse pubienne.
Élargissez doucement le plancher pelvien pour augmenter la visibilité des insertions tissulaires. Tenez le col de l’utérus avec une pince et coupez-le le plus près possible de la vulve. Placez le tissu dans PBS pour maintenir l’hydratation.
Utilisez la pince pour tirer doucement le rectum vers le thorax. Identifiez le rectum et coupez-le au niveau de l’anus. Placez le rectum dans PBS pour maintenir l’hydratation.
Une fois que tous les tissus d’intérêt sont récoltés, disloquez les fémurs du bassin. Coupez l’os pelvien des extrémités distales et proximales. Placez le tissu disséqué dans PBS.
Le traitement enzymatique semblait réduire le pic axial moyen et les facteurs de stress détendus que le ligament utéro-sacré subit aux déplacements globaux prescrits, indiquant que le collagène et les glycosaminoglycanes contribuaient à la rigidité axiale des ligaments. Les déformations axiales moyennes pour chaque échantillon testé mécaniquement indiquent que la déformation axiale globale dans les échantillons traités par enzymes était similaire ou plus grande que l’échantillon contrôlé, ce qui suggère que la réduction du stress macroscopique était due à un traitement enzymatique plutôt qu’à des souches plus petites. La spectroscopie Raman de la section intermédiaire du ligament utéros-sacré suggère que les traitements enzymatiques ont modifié la composition biochimique des ligaments utéro-sacrés murins.
Les ligaments utéros-sacrés traités au collagénase présentaient une diminution de la teneur en collagène, ainsi qu’une diminution de l’eau et de l’acide hyaluronique. Les ligaments utéros-sacrés traités par chondroïtinase avaient moins d’acide hyaluronique, ainsi qu’une teneur en eau et en collagène plus faible. L’attention aux détails est très importante, en particulier pour éliminer le fait que les dépôts autour de la LSU et des organes pelviens sont nécessaires pour éviter d’endommager la LSU et ses tissus environnants.
D’autres recherches peuvent être menées sur la LSU et d’autres tissus du plancher pelvien en utilisant des souris qui ont des variations génétiques hypothétiques pour affecter les POP. Notre protocole permet déjà une série de nouvelles études, y compris l’étude de la façon dont le comportement mécanique des LSU modifie une fonction de la grossesse, qui est un facteur de risque clé pour les POP.
