이 프로토콜은 골반 장기 탈출증(POP)과 같은 자궁천골 인대 및 골반저 상태에 대한 연구의 접근성을 확장하고 미러링 골반저 조직의 해부를 용이하게 합니다. 이 기술을 사용하면 해부학적 부착을 유지하고 주변 골반저 장기를 회수하면서 마우스에서 두 자궁천골 인대를 분리할 수 있습니다. 우리의 방법은 임신이나 질병이 조직 기계적 행동에 어떻게 영향을 미치는지에 대한 연구를 허용하는 전임상 모델을 설정합니다.
이 방법은 여성 건강 관련 연구를위한 새로운 도구를 확립합니다. 주요 투쟁은 자궁 천골 인대를 식별하고 처리하는 것입니다. 내 조언은 이러한 조직이 작고 깨지기 쉽기 때문에 적절한 시간과 주의를 기울이는 것입니다.
안락사된 마우스를 패드에 놓고 네 팔다리를 고정하는 것으로 시작합니다. 가위로 복부를 1-1.5cm 길이로 절개합니다. 절개 부위의 두개골, 꼬리 및 측면에서 피부를 부드럽게 분리합니다.
마우스를 등쪽이 위로 향하도록 뒤집고 뒷다리 쪽으로 피부를 부드럽게 벗겨냅니다. 팔다리를 고정하고 흉부에서 골반까지 복부에 1cm 길이의 절개를하십시오. 장기를 흉부 쪽으로 부드럽게 밀어 선명한 시야를 확보합니다.
한 쌍의 집게를 사용하여 PBS로 관개 한 후 골반 지방 조직을 당겨 제거합니다. 자궁 뿔을 확인한 다음 난소에서 잘라냅니다. 이제 시야 밖으로 빼내고 자궁 경부 연결을 끊으십시오.
방광 연결부에서 요관을 절단합니다. 가능한 한 자궁 경부에 가깝게 결장을 자릅니다. 패드가 있는 마우스를 해부 범위 아래에 놓아 자궁천골 인대를 시각화합니다.
집게를 사용하여 자궁천골 인대에서 주변 지방을 부드럽게 제거합니다. 양쪽 인대의 자궁 경부 끝 주위에 5-0 봉합사를 묶습니다. 자궁 경부 인대의 자궁 경부 끝을 잘라내어 자궁 경부 조각을 붙입니다.
이제 인대 바닥에서 근육 조각을 자릅니다. 해부된 조직을 PBS가 포함된 수조에 넣어 조직 수화를 유지합니다. 나머지 조직의 자궁 경부 끝을 잘라내어 기계적 테스트 및 이미징을 위해 자궁 경부 조각을 부착합니다.
지방이 제거되면 집게로 방광을 잡고 약 40도 각도로 부드럽게 들어 올립니다. 가위를 사용하여 자궁 경부 바로 위의 말단에서 방광을 자릅니다. 수분을 유지하기 위해 방광을 PBS가 있는 욕조에 넣습니다.
이제 집게를 사용하여 자궁 경부를 대략 40도 각도로 들어 올립니다. 직장과 자궁경부를 연결하는 직장질 근막을 확인하고 메스와의 연결을 끊습니다. 가위를 사용하여 치골 합성에서 치골을 자릅니다.
골반저를 부드럽게 넓혀 조직 삽입의 가시성을 높입니다. 집게로 자궁 경부를 잡고 가능한 한 외음부에 가깝게 자릅니다. 수분을 유지하기 위해 조직을 PBS에 넣습니다.
집게를 사용하여 직장을 흉부 쪽으로 부드럽게 당깁니다. 직장을 확인하고 항문에서 자릅니다. 수분을 유지하기 위해 직장을 PBS에 넣으십시오.
관심 있는 모든 조직이 채취되면 골반에서 대퇴골을 탈구합니다. 원위부와 근위부에서 골반 뼈를 자릅니다. 해부된 조직을 PBS에 넣습니다.
효소 처리는 자궁천골 인대가 규정된 전체 변위에서 경험하는 평균 축 피크와 완화된 스트레스 요인을 감소시키는 것으로 나타났으며, 이는 콜라겐과 글리코사미노글리칸이 인대의 축 방향 강성에 기여했음을 나타냅니다. 기계적으로 테스트된 각 표본의 평균 축 변형률은 효소 처리된 샘플의 전체 축 변형률이 대조 샘플과 유사하거나 더 크다는 것을 나타내며, 이는 거시적 응력의 감소가 더 작은 균주가 아닌 효소 처리로 인한 것임을 시사합니다. 자궁천골 인대 중간 부분의 라만 분광법은 효소 처리가 쥐 자궁천골 인대의 생화학적 구성을 변경했음을 시사합니다.
콜라게나제 처리된 자궁천골 인대는 콜라겐 함량이 감소하고 물과 히알루론산이 감소했습니다. 콘드로이티나제 처리된 자궁천골 인대는 히알루론산이 적고 물과 콜라겐 함량이 낮았습니다. 특히 USL과 그 주변 조직의 손상을 피하기 위해 USL과 골반 장기 주변의 침전물이 필요하다는 사실을 명확히 할 때 세부 사항에 주의를 기울이는 것이 매우 중요합니다.
POP에 영향을 미치는 것으로 가정되는 유전적 변이가 있는 마우스를 사용하여 USL 및 기타 골반저 조직에 대한 추가 조사를 수행할 수 있습니다. 우리의 프로토콜은 이미 USL의 기계적 행동이 POP의 주요 위험 요소인 임신 기능을 어떻게 변화시키는지에 대한 조사를 포함하여 다양한 새로운 연구를 가능하게 하고 있습니다.
