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요약

Echocardiographic 시험 쥐에서 자주 사용 됩니다. 비싼 고해상도 초음파 장치가이 목적을 위해 개발 되었습니다. 이 프로토콜에서는 심장 형태를 결정 하는 조직학 형태학 분석 함께 저렴 한 echocardiographic 절차를 설명 합니다.

초록

유전자 변형된 마우스 모델의 증가 최근 몇 년 동안에서 가능한 되고있다. 또한, 약리 연구에서 쥐의 수는 높다. 이 마우스 모델의 phenotypic 특성에는 심장 기능과 형태학의 검사를 필요합니다. 심장 초음파 및 자기 공명 영상 (MRI)은 심장 기능과 마우스 형태학 특성을 일반적으로 사용 되 접근법입니다. Echocardiographic 및 MRI 장비 전문 사용 작은 설치류에 비싼 하 고 전용된 공간이 필요 합니다. 이 프로토콜 15 MHz 인간의 혈관 프로브 임상 echocardiographic 시스템을 사용 하 여 마우스에 심장 측정을 설명 합니다. 측정은 마 취 성인 쥐에 수행 됩니다. 적어도 3 개의 이미지 시퀀스는 기록 하 고 parasternal 짧은 축 보기에서 M 모드에서 각 동물에 대 한 분석. 나중에, 심장 조직학 검사 수행 및 cardiomyocyte 직경 hematoxylin에 결정 됩니다-오신-또는 밀 세균 agglutinin (WGA)-파라핀 섹션 스테인드. 배 밀도 Pecam-1 immunostaining 후 결정된 morphometrically입니다. 프로토콜 약리 연구에 성공적으로 적용 하 고 다른 유전 동물 모델의 왼쪽된 앞쪽 내림차순 관상 동맥 (영구 결 찰 하 여 실험적인 심근 경색 후에 뿐만 아니라 초기 조건 되었습니다. 젊은이)입니다. 우리의 경험에서는, echocardiographic 조사 마 취 동물에 제한 되 고 적어도 무게 성인 쥐에 가능 25 g.

서문

유전자 변형된 마우스 모델의 큰 다양 한 사용할 수 있습니다, 하 고 약리 연구에서 쥐의 수는 높은1,2. 심장 초음파 및 MRI은 심장 기능과 형태학이 마우스 모델3의 phenotypic 특성 일반적으로 사용 되 접근법입니다. 제시 프로토콜의 목적은 심장 기능과 성인 쥐에 형태 분석입니다. 그것은 echocardiographic, 조직학, 결합 및 immunohistochemical 측정. Echocardiographic 시험 쥐4,5,6,7,,89,10,11에서 널리 이용 된다 12. Pachon 외. 11 식별 205 연구 2012과 2015 사이의 순환, 순환 연구, 미국의 저널의 생리-심 혼과 순환 상 생리학, 및 심장 혈관 연구 에 게시 동물에 echocardiographic 검사를 사용합니다.

심장 초음파는 심장 고기 유전자 변형된 쥐5,6,13,,1415,16, 를 식별 하는 데 17 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22, 또한 만성 과부하 유발 비 대, 심근 허 혈, 및 쥐 (12에서 검토) 심장 근육 병 증 모델에서 심장 기능 분석으로. 향상 된 심장 초음파 장비에 대 한 수는 왼쪽 심 실 (LV) 수축 기 및 diastolic 차원, 조직 도플러 영상, 심근 대비 진단법, 그리고 라스베가스 지역 기능과 관상 예비 의 평가의 표준 측정 12. 이상적으로, echocardiographic 시험 수축 기능, 자율 반사 제어에 마 취의 부정적인 영향을 피하기 위해 의식 쥐에서 수행 해야 하 고 심장 속도11. 그럼에도 불구 하 고,이 방법은 동물; 훈련 요구에 의해 제한 됩니다. 안정적인; 체온 유지에 어려움 운동 유물; 스트레스; 매우 높은 심장 주파수; 그리고 동물의 많은 수는 조사 하는 경우에 특히 실험을 수행 하기 위해 두 개 이상의 조사에 대 한 요구 사항. 흥미롭게도, 최근 연구 보고 훈련 하 고 훈련 되지 않는 동물19에 echocardiographic 매개 변수에서 차이가. 우리는 마 취 쥐에 echocardiographic 측정을 수행합니다. 다른 마 취 프로토콜 아래에 설명 될 것 이다.

비록 표준 해상도 심장 초음파 (> 10 MHz)은 측정 LV 수축 기 및 diastolic 크기와 성인 쥐에 심장 기능에 충분 한, 메서드를 기본 구조 현상의 설명에 제한 됩니다. 따라서, 우리가 결합 조직학을 vivo에서 측정 및 측정, 예를 들어 cardiomyocyte 직경 및 배 밀도를 immunohistological 분석. 동일한 유형의 다른 조직학 및 immunohistological 조사, 확산의 결정, apoptosis, 경색 크기 측정, 섬유 증, 및 특정 마커 식의 검사를 수행할 수 있습니다. 조직 처리 하지만이 프로토콜의 대상이 되지 않습니다. 조직학 분석 비보에 echocardiographic 시험의 기본 구조 변경에 대 한 추가적인 통찰력을 제공합니다. 추가 단계에서 우리는 분자와 울트라 구조 조사와이 측정을 완료할 수 있습니다. 조직학 분석 echocardiographic 시험 완료 뿐만 아니라 또한 불가결 될 때 심장 초음파의 해상도 충분 하지 않습니다. 이것은 유전자 변형된 생쥐 배아 치명적인23,24의 모델의 경우 특히.

프로토콜

여기에 설명 된 실험 관련 기관 및 프랑스 동물 복지 법률, 지침 및 정책에 따라 실시 했다. 그들은 프랑스 윤리 위원회에 의해 승인 되었습니다 (위원회 회의 Institutionnel d ' Ethique 부 l ' 동물 드 응용; 번호 후부 터/2012-106).

1. 심장 초음파

  1. 꼬리 가볍게 잡고 적절 한 위치를 표준 실험실 균형을 사용 하 여 마우스의 몸 무게를 확인.
  2. 50 mg/kg pentobarbital 25 , 26의 복 (i.p.) 주입에 의해 동물 anesthetize.
    참고: 연구를 통해 동일한 프로토콜을 사용 하는 경우 마 취의 다른 종류를 사용할 수 있습니다. 장단점은 아래에 설명 될 것 이다.
  3. 마우스 응답 하지 않는 때까지 그것의 자신의 감 금 소 및 대기에 다시, 그것은 보여줍니다 지속적인 호흡, 그리고 후방 발 반사는 결 석. 이 테스트 하려면 약간 발을 짜 내 고 다리는 여전히 리트랙트 여부 관찰.
  4. 왼쪽 흉부와 상업 설치류 면도기를 사용 하 여 왼쪽된 겨드랑이 면도.
    참고: 전용된 설치류 면도기를 사용 하 여 정밀한 마우스 머리의 완전 한 제거를 위한 echocardiographic 측정에 간섭을 유발 하지 않도록 허용 됩니다. 상업적인 머리 제거 크림 또는 솔루션 피해 야 한다로 그들은 일반적으로 향수, 그것은 일어나 야 후 동물을 방해 합니다. 열 손실을 증가, 과도 한 면도 하지 마십시오.
  5. 따뜻한 패드 12 머리 얕은 왼쪽 양면 위치, 40-42 ° C로 설정 자 고 동물을 넣어 o ' 시계와 6 꼬리 o ' 시계. 테이프로 왼쪽된 팔, 왼쪽된 다리, 그리고 꼬리 수정.
  6. 적용 사전 예 열 변환기의 머리 면도 가슴에 심장 초음파 젤.
  7. 배치 변환기 parasternal-왼쪽, 젖꼭지 근육의 수준에 2 차원 (2D) parasternal 긴 축 보기를 목의 오른쪽으로 그것을 지시 합니다. Papilary 근육 수준에서 짧은 축 보기를 시계 방향으로 90 ° 변환기를 설정 합니다. 최소 깊이 설정과 확대/축소를 사용 하 여 이미지 품질 및 프레임 속도 최대화 하기 위해. 스윕 속도 최대로 설정. 이러한 설정, 다른 확대/축소 및 깊이 옵션 설정
    1. 컴퓨터와 소프트웨어에 따라 사용할 수 있습니다. 2D 기반 M 모드 이미지를 기록 짧은 축에 27 볼. 그림 1A와 B 27을 참조 하십시오.
      참고: 주의 가슴에 과도 한 압력을 적용 하지 않도록이 bradycardia을 발생할 수 있습니다.
  8. 각 동물에 대 한 3 마음 이길 시 네 루프의 기록 이상 3 시리즈.
    참고:이 연구에 사용 된 echocardiograph 소프트웨어에 대 한 누르십시오는 " 취득/저장 " 버튼을 한 번만. 이 방법론은이 특정 소프트웨어와 함께 echocardiograph에 적용 됩니다. 다른 컴퓨터와 다른 소프트웨어 패키지를 사용할 수 있습니다.
  9. 성공적인 기록, 닦아는 심장 초음파 젤 마우스 흉부, 생리대, 및 변환기에서 후. 사지 및 꼬리에서 테이프를 제거.
  10. 관찰 하 난방 패드, 손실을 방지 하기 위해 불필요 한 빛 노출 및 열, 최대 절전 모드 해제 될 때까지 조직으로 덮여에 마우스를 두고
  11. 동물의 장에 다시.
  12. 분석 parasternal 짧은 축 보기 왼쪽된 심 실 (LV) 치수 및 기능 결정에서 M 모드 이미지 기록. Systole와 심장 (LVAWs 및 LVAWd), LV 내부 끝 심장 수축 및 끝 확장기 직경 (LVIDs 및 LVIDd), 및 systole와 심장 (LVPWs 및 LVPWd)를 사용 하 여 LV 후부 벽 두께 (LVPW)에서 LV 앞쪽 벽의 두께 측정 합니다 저장 된 이미지에 조직 혈액 인터페이스의 식별.
  13. 명백한 최대한 LV 확장기 차원 시 확장기 치수를 측정 하 고 끝 심장 수축 차원 LV 후부 벽의 가장 앞쪽 수축 여행 시 LV. 터치 스크린에 꼭지는 " 분석 " 아이콘 다음에 " LVAWd " 아이콘. 오른쪽 심 실 구멍 및 심장에 LV 앞쪽 벽 사이의 인터페이스에 전자 캘리퍼스 위치.
  14. 전자 캘리퍼스 LV 앞쪽 벽와 LV 확장기 앞쪽 벽 두께를 LV 구멍 사이의 인터페이스에 위치, 소프트웨어 직접 LV 내부 끝 확장기 측정으로 전환 됩니다.
  15. LV 구멍 및 LV 직경 내부 끝 확장기를 LV 후부 벽 사이의 인터페이스에는 캘리퍼스를 위치, 소프트웨어 LV 후부 벽 두께 측정으로 전환 됩니다.
  16. LV 후부 벽과 LV 확장기 후부 벽 두께를 심장 막 간의 인터페이스에는 캘리퍼스를 배치 합니다. LV 수축 차원에 대 한 스크린에 터치에는 " LVAWs " 아이콘 및 위치 오른쪽 심 실 구멍 및 LV 앞쪽 벽 사이의 인터페이스에 전자 캘리퍼스 systole.
  17. LV 앞쪽 벽와 LV 수축 앞쪽 벽 두께를 LV 구멍 사이의 인터페이스에 전자 캘리퍼스를 배치 합니다. LV 내부 끝 수축 기 직경 및 LV 수축 후부 벽 두께 대 한 위에서 설명한 대로 프로세스를 반복 합니다. 심장 초음파 검사의 미국 사회에 의해 채택-첨단 규칙을 사용 하 여 추적 endocardial epicardial 테두리 13 , 27.
    참고: LV 수축 함수 매개 변수 자동으로 계산 됩니다 이전 측정을 사용 하 여. 분수 (FS) 단축 LV FS (%)로 정의 됩니다 [(LVIDd-LVIDs)/LVIDd =] x 100. LV 방출 분수 (EF) 수정된 Teicholz 수식으로 계산 됩니다 어디 EF (%) = [(LVIDd3-LVIDs3)/LVIDd 3] x 100 12. 그림 1A와 B를 참조 하십시오.
  18. USB 메모리 스틱 또는 콤팩트 디스크에 데이터를 저장 하 고 백업 복사본.
  19. 가져오기, 분석, 그리고 적절 한 소프트웨어를 사용 하 여 데이터를 내보냅니다.
    참고: 이러한 기준선 측정 후 실험 수 일시 정지 됩니다. 녹아웃 동물 및 야생-타입 littermates 사이 직접적인 비교를 수행 하는 경우 진행 조직학 분석 6. Cre-ERT2;에 대 한 lox/lox 마우스 라인 설명된 5 , 24로 i.p. 주입 tamoxifen 유도 함께 다음 날 계속. Echocardiographic 측정 후 직접 수술을 수행할 수 왼쪽된 관상 동맥 5 , 28의 결 찰 하 여 실험적인 심근 경색을 유도 하는 경우 때 쥐 마 취를 받고 있다입니다. 그렇지 않으면, 1 주일 사이 마 취의 두 라운드의 최소 지연 수술 치의 속도 제한에 유지 되어야 합니다.

2. 조직학 평가 위한 심장 샘플의 준비

  1. 경부 전위에 의해 동물 희생. 그들의 몸 무게를 측정 합니다. 가슴 및 복 부를 70% 알코올 면봉을 사용 하 여 소독.
  2. 게 가로 절 개 피부 1cm에에서 원심 흉 골. 무딘 집게를 사용 하 여, 가슴, 머리의 방향으로 이동에서 피부를 제거 합니다. 좋은 집게와 흉 골을 가볍게 잡고 하 고 좋은 위의 무뚝뚝한 끝을 삽입 하 여 횡 경 막 엽니다.
  3. 흉 골에 평행 하 게 양쪽에 흉 곽을 잘라. 흉 골의 머리 방향으로 이동 합니다. 가슴에서 마음을 찾습니다. 좋은 집게와 심장의 혈관 트렁크를 누른 좋은 위를 사용 하 여 아래 컷.
  4. 가슴을 열고 삭제할 흉부에서 전체 심장, 심장 무게를 측정 고 설정 마음-몸 무게 비율 4 , , 5 6 , 23 , 29 , 30 < /sup >.
  5. 수정 2 ml 15 mL 튜브에 10% 중립 버퍼링 된 포 르 말린 솔루션의 심장 4에서 하룻밤 ° C.
    주의: 위험! 화학 증기 두건;에 말린 솔루션 작업을 수행 해야 합니다. 착용 장갑 및 안전 안경.
    참고: 말린 솔루션에 대 한 버퍼 구성 다른 공급 업체에 따라 다릅니다, 연구를 통해 동일한 공급 업체 사용.
  6. 다음 날, 마음, 중간에서 가로 평면에서 잘라내어 파라핀 포함, 카세트에 그들을 전송는 자동된 삽입 장치를 사용 하 여 병 리 실험실에서 수행 됩니다.
  7. 단면 수행.
    1. 섹션 파라핀 톰와 40 ° C 물에 포함 된 증류수 목욕 float를 사용 하 여 3 µ m의 두께에서 차단.
    2. 이전 슬라이드에 섹션. 37 ° C 배양 기에서 건조 하룻밤 슬라이드를 허용 하 고 사용을 위해 준비 될 때까지 4 ° C에서 저장.
      참고: 프로토콜 일시 중지할 수 있습니다 여기 사용자 얼룩 (3 단계)에 대 한 준비가 될 때까지.
  8. Deparaffinize 및 리하이드레이션 조직 슬라이드.
    1. 얼룩이 지는 파라핀을 녹여 10 분 55 ° C 오븐에 유리 삽입과 함께 항아리에 슬라이드를 놓습니다.
    2. Deparaffinize 크 실 렌 또는 크 실 렌 대신 5 분의 200 mL의 두 변경에서 슬라이드.
      주의: 매우 가연성 및 독성! 화학 증기 두건;에서 일 착용 장갑 및 안전 안경.
    3. 는 100% 알코올 200ml에 슬라이드를 전송합니다. 3 분 동안 두 변경 하 고 3 분에 대 한 95% 알콜 200 mL를 통해 한 번 전송
      주의: 가연성! 멀리 점화;의 소스 금연.
    4. 린스 200 mL의 인산 염 버퍼 염 (PBS) 5 분에 두 번 3, 4, 또는 5 단계를 계속 하 고.

3. 되며 고 오신 얼룩

  1. 증류수에 그들의 단면도 가진 슬라이드 린스.
  2. 8 분에 대 한 되며 솔루션 핵 얼룩
  3. 실행 하는 10 분에 대 한 수돗물에 씻어
  4. 2 분에 오신 솔루션 얼룩
  5. Dehydrate 100% 에탄올 (EtOH)에 2 분 동안 세 번. 크 실 렌 또는 크 실 렌 대신에 2 분 동안 세 번을 선택을 취소 합니다. 크 실 렌 기반 설치 매체에 마운트.
  6. 는 슬라이드 사진 하 고 interventricular 심장의 경도 섹션에서 핵의 수준에서 cardiomyocyte 직경을 측정 한다. 심장 당 세 섹션 및 섹션 당 적어도 100 셀 측정.

4. WGA 얼룩

  1. tetramethylrhodamine (또는 다른 형광 성 염료) 2.7 단계에서 가져온 슬라이드를 품 어-습 한 챔버에 실 온에서 60 분에 대 한 WGA (PBS에 1: 100)를 활용.
  2. PBS를 가진 5 분 세 번 세척.
  3. 마운트 형광 DAPI 포함 된 미디어를 탑재와 함께입니다. 분석 하기 전에 어둠 속에서 4 ° C에서 저장소.
    주의: 눈 보호와 호환 화학 내성 장갑 착용.
  4. 슬라이드 사진.
    1. 사용 현미경 epi 조명 형광 및 필터 DAPI와 tetramethylrhodamine (테이블의 자료를 참조)를 설정 합니다. 최대 밝기를 자동 노출 조리개 설정.
    2. 취득 파란색과 빨간색 채널에 대 한 400 x 배율에서 이미지를 구분합니다. ImageJ에서 이미지를 엽니다. 밝기를 조정 하 고 필요한 경우를 대비 (이미지 > 조정 > 밝기/대비).
    3. 8 비트 각 이미지 설정 (이미지 > 유형 > 8-비트). DAPI WGA 이미지 오버레이. DAPI를 빨강 채널 파랑 채널을 사용 하 여 WGA;에 대 한 없음으로 녹색과 회색 채널 설정 (이미지 > 색상 > 채널 병합) 31.
  5. Cardiomyocyte 직경 interventricular 심장의 횡 근 섹션에서 핵의 수준에서 결정.
    1. 정의 ImageJ에 이미지의 규모. 이 목적을 위해 (예를 들어, 심장 섹션으로 같은 확대 hemocytometer 챔버; 단계 4.4) 알려진된 크기의 사진.
    2. 처음부터 끝까지 선을 그리는 직선 도구를 사용 하 여 알려진 구조 (분석 > 규모 설정).
      참고: 픽셀에서 거리 표시 됩니다 자동으로; 알려진된 거리와 길이 단위 입력 해야 합니다. 핵의 수준에서 cardiomyocyte 측정 진행.
    3. WGA-긍정적인 세포 막의 반대 사이트에 DAPI 긍정적인 핵 통해 WGA 긍정적인 막에서 직선을 그릴 (분석 > 측정). 결과 창에서 길이 값 소수 자릿수의 의미 있는 수 있는지 확인 (분석 > 측정을 설정 > 소수 자릿수).
    4. 심장 당 세 섹션 및 섹션 당 적어도 100 셀을 측정합니다. 결과 Excel로 내보내기 (결과 클릭 > 파일 >로 저장 >.csv) 6 , 31.

5. Pecam-1 Immunostaining

  1. 항 unmasking 수행.
  2. 나트륨 시트르산의 추가 1, 600 mL
      버퍼 (10 m m 나트륨 구 연산 염, 0.05% 트윈 20, pH 6.0) 압력 밥 솥입니다. 열판에 압력 밥 솥을 놓고 전체 전력에 그것을 설정 합니다. 이 시점에서; 압력 밥 솥의 뚜껑을 확보 하지 마십시오 단순히 위에 휴식.
      주의: 핫!
    1. 나트륨 구 연산 염 버퍼 끓는 일단 단계 2.5에서에서 압력 밥 솥 슬라이드를 전송. 압력 밥 솥 뚜껑을 보호 합니다. 밥 솥 전체 압력에는, 7 분을 기다립니다. 7 분 경과 열판을 해제 하 고 빈 싱크대에 압력 밥 솥을 배치. 압력 방출 벨 브를 활성화 하 고 밥 솥을 통해 냉 수를 실행. 그것은 드 가압, 일단 뚜껑 열고 냉 수 5 분 장소에 대 한 솥에 슬라이드에서에서 실행 200 mL PBS의.
      참고: 또는, 마이크로웨이브 항 unmasking 사용할 수, 과열 위험 증가.
  3. 사용 0.3%의 5 분에 대 한 블록 내 인 성 과산화 효소 활동에 메탄올에 과산화 수소 3 시간 2 분에 대 한 PBS의 각에서 200 mL에 대 한 슬라이드를 린스.
    주의: 가연성 및 독성!
  4. 희석된 정상적인 차단 혈 청 (PBS에 5% 정상 염소 혈 청) 또한 avidin 블록 (4 방울 1 ml에서)을 포함 하는 15 분에 대 한 슬라이드를 품 어.
  5. 신중 하 게 섹션에서 액체 누르고 토끼에서 Pecam-1 항 체, mL 당 biotin 블록의 2.5% 정상 염소 혈 청 및 4를 포함 하는 PBS에 희석된 1시 50분으로 그들을 품 어. 4 습 한 챔버에 하룻밤 슬라이드를 품 어 ° c.
  6. 는 PBS의 200 mL에 5 분에 대 한 세 번 슬라이드를 씻어. Biotinylated 염소-토끼 IgG 항 체 희석 1: 200 실 온에서 1 h 2.5% 정상 염소 혈 청을 포함 하는 PBS에로 섹션을 품 어. PBS의 200 mL에 5 분에 대 한 세 번 슬라이드를 씻어.
  7. 품 어 t그는 20 분 (시 약 A와 결합 된 30 분 이전 해야 시 B 사용)에 대 한 과산화 효소 avidin/biotin 기반 시스템 섹션입니다. PBS의 200 mL에 5 분에 대 한 세 번 슬라이드를 씻어.
  8. 분해 1 3, 3 '-diaminobenzidine (한 덩어리)와 과산화 수소 1 요소 두 번 증 류 물 5 mL에 태블릿. 약 3 분, 컬러 개발을 신중 하 게 모니터링 DAB 솔루션 섹션을 품 어. 부드럽게 200 ml PBS의 슬라이드를 세척 하 여 발 색 반응을 중지.
    주의: 발암 성; 화학 방지 장갑 착용!
  9. 는 Hematoxylin와 6 분에 대 한 핵 counterstain. 100% 알코올 200ml에 2 분을 위한 3 시간 2 분 Dehydrate의 수돗물을 실행에 린스. 크 실 렌 또는 크 실 렌 대신에 각 200ml 3 시간 2 분 대 한 선택을 취소 합니다. 크 실 렌 기반 설치 매체에 마운트.
  10. (적어도 10 필드 각 심장의 interventricular 심장에서 40 x 확대) 슬라이드 사진 하 고 자유롭게 사용할 수 ImageJ 소프트웨어 31를 사용 하 여 Pecam-1 영역 밀도 측정 한다. DAB 및 되며 색상 deconvolution 32 플러그인을 사용 하 고 같은 수준으로 이미지 대비를 조정.
    참고: 갈색과 보라색/파란색 색상 색상 deconvolution 어려움이 발생할 수 있습니다, 중요 한 스펙트럼 중복 경우에 하나를 명확 하 고, 밝은 파란색 핵 얼룩 되며 솔루션의 다른 브랜드를 시도할 수 있습니다. 면역 형광 검사 또는 모 세관의 수동 계산을 수행할 수 또는.

결과

그림 1, 대표 echocardiographic 녹음 유전자 변형 쥐에서 심장 고기를 식별 하기 위해 심장 초음파의 유용성을 보여 줍니다. 정상적인 심장 기능 (그림 1A)와 마우스 및 넓혀 진된 좌 심 실 및 감소 된 LV 기능 (그림 1B)와 동물의 차이 쉽게 확인 될 수 있다. 그림 2 에서는 cardiomyocyte 비교 직경...

토론

다른 방법은 심장 구조와 쥐, 심장 초음파, 등 대비 강화 된 MRI, 마이크로 CT, PET 스캔 기능을 평가 하기 위해 개발 되었습니다. 비용 효율성과 단순함, 심장 초음파는 마우스11기능 분석에 대 한 가장 널리 사용 되 기술입니다. 마음과 쥐에서 심장 박동, 주파수 변환기의 높은 주파수의 작은 크기 때문에 일반적으로, > 10 MHz 해야 사용할 수 있지만 성공적인 측정 8 또는 9 MHz 변환?...

공개

저자는 공개 없다.

감사의 말

작품 "미래 위한 투자" LABEX SIGNALIFE 프로그램 (참조 ANR-11-LABX-0028-01) (국립 연구 기관, ANR) 프랑스 정부에 의해 지원 되었다 하 고 공화국을 교부 금에 의해 협회에서 D. W. 부 la Recherche 쉬르 르 암, Fondation 드 프랑스, 고 암 Inserm 계획입니다. D. B.와 A. V. 받은 장학 Fondation 부 라 검색 Médicale에서에서와 니스의 도시에서 각각. 필립스에 의해 제공 되는 echocardiograph와 변환기를 친절 하 게 했다. 우리가 그들의 숙련 된 기술 지원에 대 한 A. Borderie, S. Destree, M. Cutajar Bossert, A. Landouar, A. Martres, A. Biancardini, 및 S. M. 바그너 감사합니다.

자료

NameCompanyCatalog NumberComments
Wheat germ agglutinin (WGA) conjugated tetramethylrhodamineLife Technologies, Molecular ProbesW849
Biotinylated Goat Anti-Rabbit IgG AntibodyVectorlabsBA-1000
Avidin/Biotin Blocking KitVectorlabsSP-2001
VECTASTAIN Elite ABC HRP Kit (Peroxidase, Standard)VectorlabsPK-6100
VECTASHIELD Antifade Mounting Medium with DAPIVectorlabsH-1200
SIGMAFAST 3,3'-Diaminobenzidine tabletsSigmaD4168
Hydrogen peroxide solutionSigmaH1009
Anti-Pecam-1 (CD31) antibodyAbcamab28364
Ultrasound transmission gel, Gel Aquasonic 100Parker
Linear ultrasound probe, L15-7ioPhilips Healthcare
Echocardiograph, IE33 xMATRIXPhilips Healthcare
Microscope, Leica DMi8Leica
Fluorescence Filterset DAPILeica11525304
Filterset TxRLeica11525310
Digital Camera, SPOT RT3 Color SliderSpot Imaging
Imaging Software, SPOT 5.2 Advanced and Basic SoftwareSpot Imaging
Imaging ComputerDell
Fine ScissorsFine Science Tools14028-10
Large ScissorsFine Science Tools14501-14
Scalpel bladesFine Science Tools10023-00
Graefe ForcepsFine Science Tools11650-10
Rodent shaverHarvard Apparatus34-0243
cassettes for paraffin embeddingSakura4155F
neutral buffered FormalinSakura8727
XyleneSakura8733
Paraffine TEK IIISakura4511
automated embedding apparatus, Tissue-Tek VIPSakura6032
paraffin-embedding station Tissue-Tek TEC 5Sakura5229
microtome blades,Accu-Edge S35Sakura4685
microscopy slides, Tissue-TekSakura9533
cover slips, Tissue-TekSakura9582
Mounting medium Tissue-TekSakura1408
slide boxesSakura3958
eosine solutionSakura8703
hematoxyline solutionSakura8711
microtome, RM2125RTLeica720-1880 (VWR)
water bath, Leica HI1210Leica720-0113(VWR)
EthanolVWRACRO444220050
15 ml tubesVWR734-0451
staining glass dishVWRMARI4220004
staining jarsVWRMARI4200005
IncubatorBinder9010-0012
DAB and urea hydrogen peroxide tablets, SIGMAFAST 3,3′-Diaminobenzidine tabletsSigmaD4293
PBS (10X)Thermo Fisher Scientific70011044

참고문헌

  1. Ormandy, E. H., Dale, J., Griffin, G. Genetic engineering of animals: ethical issues, including welfare concerns. Can Vet J. 52 (5), 544-550 (2011).
  2. Karl, T., Pabst, R., von Hörsten, S. Behavioral phenotyping of mice in pharmacological and toxicological research. Exp Toxicol Pathol. 55 (1), 69-83 (2003).
  3. Phoon, C. K., Turnbull, D. H. Cardiovascular Imaging in Mice. Curr Protoc Mouse Biol. 6 (1), 15-38 (2016).
  4. Wagner, N., et al. Peroxisome proliferator-activated receptor beta stimulation induces rapid cardiac growth and angiogenesis via direct activation of calcineurin. Cardiovasc Res. 83 (1), 61-71 (2009).
  5. Wagner, K. D., Vukolic, A., Baudouy, D., Michiels, J. F., Wagner, N. Inducible Conditional Vascular-Specific Overexpression of Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Beta/Delta Leads to Rapid Cardiac Hypertrophy. PPAR Res. 2016, 7631085 (2016).
  6. Ghanbarian, H., et al. Dnmt2/Trdmt1 as Mediator of RNA Polymerase II Transcriptional Activity in Cardiac Growth. PLoS One. 11 (6), e0156953 (2016).
  7. Meguro, T., et al. Cyclosporine attenuates pressure-overload hypertrophy in mice while enhancing susceptibility to decompensation and heart failure. Circ Res. 84 (6), 735-740 (1999).
  8. de Araújo, C. C., et al. Regular and moderate aerobic training before allergic asthma induction reduces lung inflammation and remodeling. Scand J Med Sci Sports. 26 (11), 1360-1372 (2016).
  9. Benavides-Vallve, C., et al. New strategies for echocardiographic evaluation of left ventricular function in a mouse model of long-term myocardial infarction. PLoS One. 7 (7), e41691 (2012).
  10. Colazzo, F., et al. Murine left atrium and left atrial appendage structure and function: echocardiographic and morphologic evaluation. PLoS One. 10 (4), e0125541 (2015).
  11. Pachon, R. E., Scharf, B. A., Vatner, D. E., Vatner, S. F. Best anesthetics for assessing left ventricular systolic function by echocardiography in mice. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 308 (12), H1525-H1529 (2015).
  12. Gao, S., Ho, D., Vatner, D. E., Vatner, S. F. Echocardiography in Mice. Curr Protoc Mouse Biol. 1, 71-83 (2011).
  13. Mor-Avi, V., et al. Current and evolving echocardiographic techniques for the quantitative evaluation of cardiac mechanics: ASE/EAE consensus statement on methodology and indications endorsed by the Japanese Society of Echocardiography. J Am Soc Echocardiogr. 24 (3), 277-313 (2011).
  14. Collins, K. A., Korcarz, C. E., Lang, R. M. Use of echocardiography for the phenotypic assessment of genetically altered mice. Physiol Genomics. 13 (3), 227-239 (2003).
  15. Rottman, J. N., Ni, G., Brown, M. Echocardiographic evaluation of ventricular function in mice. Echocardiography. 24 (1), 83-89 (2007).
  16. Hart, C. Y., Burnett, J. C., Redfield, M. M. Effects of avertin versus xylazine-ketamine anesthesia on cardiac function in normal mice. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 281 (5), H1938-H1945 (2001).
  17. Moran, C. M., Thomson, A. J., Rog-Zielinska, E., Gray, G. A. High-resolution echocardiography in the assessment of cardiac physiology and disease in preclinical models. Exp Physiol. 98 (3), 629-644 (2013).
  18. Fayssoil, A., Tournoux, F. Analyzing left ventricular function in mice with Doppler echocardiography. Heart Fail Rev. 18 (4), 511-516 (2013).
  19. Schoensiegel, F., et al. High throughput echocardiography in conscious mice: training and primary screens. Ultraschall Med. 32, S124-S129 (2011).
  20. Yariswamy, M., et al. Cardiac-restricted Overexpression of TRAF3 Interacting Protein 2 (TRAF3IP2) Results in Spontaneous Development of Myocardial Hypertrophy, Fibrosis, and Dysfunction. J Biol Chem. 291 (37), 19425-19436 (2016).
  21. Jara, A., et al. Cardiac-Specific Disruption of GH Receptor Alters Glucose Homeostasis While Maintaining Normal Cardiac Performance in Adult Male Mice. Endocrinology. 157 (5), 1929-1941 (2016).
  22. Kerr, B. A., et al. Stability and function of adult vasculature is sustained by Akt/Jagged1 signalling axis in endothelium. Nat Commun. 7, 10960 (2016).
  23. Wagner, N., et al. Coronary vessel development requires activation of the TrkB neurotrophin receptor by the Wilms' tumor transcription factor Wt1. Genes Dev. 19 (21), 2631-2642 (2005).
  24. Wagner, K. D., et al. The Wilms' tumour suppressor Wt1 is a major regulator of tumour angiogenesis and progression. Nat Commun. 5, 5852 (2014).
  25. Yang, X. P., et al. Echocardiographic assessment of cardiac function in conscious and anesthetized mice. Am J Physiol. 277 (5 Pt 2), H1967-H1974 (1999).
  26. Rottman, J. N., et al. Temporal changes in ventricular function assessed echocardiographically in conscious and anesthetized mice. J Am Soc Echocardiogr. 16 (11), 1150-1157 (2003).
  27. Quiñones, M. A., et al. Recommendations for quantification of Doppler echocardiography: a report from the Doppler Quantification Task Force of the Nomenclature and Standards Committee of the American Society of Echocardiography. J Am Soc Echocardiogr. 15 (2), 167-184 (2002).
  28. van Laake, L. W., et al. Monitoring of cell therapy and assessment of cardiac function using magnetic resonance imaging in a mouse model of myocardial infarction. Nat Protoc. 2 (10), 2551-2567 (2007).
  29. Wagner, K. D., et al. The Wilms' tumor suppressor Wt1 is expressed in the coronary vasculature after myocardial infarction. FASEB J. 16 (9), 1117-1119 (2002).
  30. Wagner, K. D., et al. RNA induction and inheritance of epigenetic cardiac hypertrophy in the mouse. Dev Cell. 14 (6), 962-969 (2008).
  31. Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis. Nat Methods. 9 (7), 671-675 (2012).
  32. Ruifrok, A. C., Johnston, D. A. Quantification of histochemical staining by color deconvolution. Anal Quant Cytol Histol. 23 (4), 291-299 (2001).
  33. Lazzeroni, D., Rimoldi, O., Camici, P. G. From Left Ventricular Hypertrophy to Dysfunction and Failure. Circ J. 80 (3), 555-564 (2016).
  34. Ismail, J. A., et al. Immunohistologic labeling of murine endothelium. Cardiovasc Pathol. 12 (2), 82-90 (2003).
  35. Benton, R. L., Maddie, M. A., Minnillo, D. R., Hagg, T., Whittemore, S. R. Griffonia simplicifolia isolectin B4 identifies a specific subpopulation of angiogenic blood vessels following contusive spinal cord injury in the adult mouse. J Comp Neurol. 507 (1), 1031-1052 (2008).
  36. Ayoub, A. E., Salm, A. K. Increased morphological diversity of microglia in the activated hypothalamic supraoptic nucleus. J Neurosci. 23 (21), 7759-7766 (2003).
  37. Maddox, D. E., Shibata, S., Goldstein, I. J. Stimulated macrophages express a new glycoprotein receptor reactive with Griffonia simplicifolia I-B4 isolectin. Proc Natl Acad Sci U S A. 79 (1), 166-170 (1982).
  38. dela Paz, N. G., D'Amore, P. A. Arterial versus venous endothelial cells. Cell Tissue Res. 335 (1), 5-16 (2009).

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