쥐 간 이식 모형에 있는 혈역학적인 변경을 시뮬레이션하여 기관 허혈-재관류 상해

요약

이 논문은 간 이식 후 허혈 재관류 손상에 대한 기본 연구를 용이하게하기 위해 쥐에서 간 형 편 (간 허혈)의 동물 모델을 구축하는 방법에 대한 자세한 설명을 제공합니다.

초록

쥐의 직소 간 이식 (OLT)은 수술 전, 수술 내 및 수술 후 연구에 사용되는 시도되고 입증 된 동물 모델이며, 비형 기관의 허혈 재관류 손상 (IRI)을 포함합니다. 이 모델에는 수많은 실험과 장치가 필요합니다. 간 단계의 기간은 이식 후 IRI를 개발하는 시간과 밀접한 관련이 있습니다. 이 실험에서, 우리는 쥐에 있는 외간 기관 손상을 유도하기 위하여 혈역학 변경을 사용하고 최대 허용 오차 시간을 결정했습니다. 가장 심한 장기 손상까지 의 시간은 다른 장기에 대 한 변화. 이 방법은 쉽게 복제 될 수 있으며 간 이식 후 외간 장기의 IRI를 연구하는 데 사용할 수도 있습니다.

서문

허혈 -재관류 부상 (IRI) 간 이식 후 일반적인 합병증이다. 간 IRI는 허혈 매개 세포 손상 및 간 재관전의 비정상적인 악화를 관련시키는 병리학적인 과정입니다. 간 IRI 및 국천성 면역 반응은 임상 환경 의 차이에 따라 뜨겁고 차가운 IRI로 나눌 수 있습니다^1. 뜨거운 IRI는 줄기 세포 손상에 의해 유도되며, 일반적으로 간 이식, 충격 및 외상^2의결과로. 감기 IRI는 내피 세포 및 말초 순환에 의한 간 이식의^{합병증이다 3.} 임상 보고는 간 IRI가 초기 장기 실패의 10%와 연관되고 급성 및 만성^거부4,5의부각을 증가시킬 수 있다는 것을 보여주었습니다. 또한, IRI간 은 또한 높은 사망률^6을가진 다중 장기 기능 장애 증후군 또는 전신 염증 반응 증후군을 유도할 수 있다. 간 장기 에 관여하는 환자는 병원에서 더 오래 머물고, 더 많은 돈을 지출하고, 더 나쁜 예후^7이있는경향이 있다. 합병증의 발달은 간 이식^8의간 절단 단계의 길이와 밀접한 관련이 있다.

쥐에 있는 직교성 간 이식 (OLT) 1973년에 미국 교수 리에 의해 처음 보고되었습니다. 실험 적 수술은 봉합 방법을 사용하여 임상 간 이식 및 혈관및 일반적인 담관 (CBD)의 해부학단계를 시뮬레이션했습니다. 절차는 어렵고^{성공률 9의}낮은 시간 소모. 1979년, 카마다 등은 26분^10분이내에 항간위상을 조절하기 위해 포털 정맥의 아나스토모정신에 '2-커프 방법'을 창의적으로 사용하여 쥐의 OLT에 상당한 개선을 이루었다. 같은 해, 짐머만은 '단일 담즙 스텐트 방법'을 제안했다. 이이남의 작품을 바탕으로 짐머만은 폴리에틸렌 튜브를 사용하여 기증자와 수령인의 CBD를 직접 마취하고 CBD의 재건을 단순화하고 괄약근의 기능을 보존했으며,이 방법은 OLT 모델^11의담즙 재건을위한 표준이되었습니다. 1980년, Miyata 등은 포탈 정맥(PV), 수프라간 정맥(SVC), 및 간내 정맥 카바(IVC)가 커프 방법에 의해 마취된 '3-커프 방법'을 제안했다. 그러나, 열등한 베나 카바^{역류(12)의}방해로 이어질 수 있는 이 방법으로 캐뉼라의 왜곡의 위험이 있다. 1983년, '투커프 방식'은 PV 및 IVC의 해부학을 위한 커프 방법을 사용하여 제안되었지만,^SVC(13)에대한 봉합방법을 채택하였다. 이 방법은 OLT 모델을 확립하기 위해 전 세계 학자들에 의해 채택되었습니다. 그 이후, 커프 아나스토모시스 단계는 간항상을 단축하고^쥐(14)의생존율을 향상시키기 위해 개선되었다. 유사하게, 개선된 방법은^15년형을 단축하기 위해 임상 실습에서 사용된다. 그러나, 간 이식 후 IRI에 대한 기본 연구는 생존율이 비반대로 외간 장기에 상해의 정도와 관련이 있음을 보여 주었다. 따라서 간 이식 후 IRI를 시뮬레이션하기 위해서는 추가 연구가 필요하며, 간 이식 후 IRI를 시뮬레이션하기 위해서는 간단하고 재현 가능한 동물 모델이 필요합니다.

ancc 단계의 정의에 근거하여, 우리는 쥐에 있는 외측 기관의 IRI결과로 간 이식에 있는 혈역학적인 변경을 시뮬레이션했습니다. 본명, 간 이식 후 IRI에 대한 기초 연구를 용이하게 하기 위해 쥐에서 간편상(간 허혈)의 동물 모델을 구축하는 방법에 대한 상세한 설명을 제공합니다.

프로토콜

동물윤리위원회는 광시의과대학(No20190920)의 실험을 승인했다. 모든 동물은 광시 의과 대학의 동물 실험 센터에 의해 공급되었다. 우리는 SPF 남성 스프라그 Dawley 쥐 (200-250 g, 10-12 주)를 사용했으며, 25 ± 2 ° C의 실온 과 습도 50 ± 10 %를 사용했습니다. 수유는 작동 24시간 전에 중단되었습니다. 그러나 물이 제공되었습니다.

참고: 한 운전자는 미세 수술 기초 또는 수술 현미경 없이 모든 수술을 수행할 수 있습니다.

1. 작동

1. 계량 후, 이소플루란으로 쥐를 마취 (5%) 동물 마취 기계를 사용 하 여.
2. 1-2분 후, 쥐의 발가락을 핀셋으로 부드럽게 고정합니다. 쥐가 꼬집은 후에 반응하지 않으면 마취 상태에 들어갔습니다. 눈에 수의사 연고를 사용하여 건조함을 방지하십시오. 동물 가열 램프를 사용하여 쥐의 체온을 37-38 °C에서 유지하십시오.
3. 복부 소독 (povidone 요오드 용액)에 따라 동물 해부 테이블에 쥐를 고정하십시오. 집게와 가위를 사용하여 xiphoid 프로세스 보다 3cm 의 중앙분리를 합니다.
4. 복강을 열고, 리트랙터를 사용하여 간을 노출하고, 간위 인대를 동원합니다. 면봉을 사용하여 간 의 중간 엽을 부드럽게 뒤집고 위로 돌려 포타 간염을 노출시십시오. CBD, PV 및 HA를 식별합니다.
5. 작은 내장을 면 봉면을 사용하여 왼쪽 하복위를 향해 밀어 젖은 거즈로 덮고 자궁 내 정맥을 오른쪽 신장 정맥으로 옮춥니다.
6. 포털 정맥, 간 동맥 및 오른쪽 신장 정맥 위에 열등한 정맥을 3-0 실크 실로 표시된 집게로 분리합니다.
7. 왼쪽과 오른쪽 하부 사지 피부를 잘라 안과 포셉을 사용하여 대퇴 정맥을 노출합니다. 대퇴 정맥을 통해 저분자 헤파린 625 IU/kg을 천천히 주입하여 전신을 헤패린시합니다.
8. 포털 정맥, 간 동맥 및 열등한 정맥 위에 3-0 봉합사로 오른쪽 신장 정맥 위에 45 분 동안 지속됩니다(그림 1). 복강내의 소장을 교체하고 거즈로 덮습니다. 이 기간 동안 흡입 마취를 감소시십시오.
9. 45분 후, 오른쪽 신장 정맥 위에 포문 정맥, 간 동맥 및 열등한 정맥을 방출한다.
10. 근육과 피부를 봉합하고, 층별로 겹쳐서, 흡입 마취를 종료한다. 4시간마다 5 mg/kg의 피하 모르핀을 사용하여 수술 후 항간증을 제공합니다.
11. 2 ±5 °C의 온도에서 깨어 있고 50 ± 10 %의 습도에서 먹이를 줄 때까지 쥐를 관찰하십시오. 동물 난방 램프가 필요합니다.

결과

간 허혈에 쥐의 내성
이 동물 모델에서는 수술 중에 혈관이 결찰된 부위가 도 1에도시되어 있다. 쥐는 무작위로 15 분 동안 허혈을 위한 5 개의 그룹으로 분할되었다 (I15 그룹), 30 분 (I30 그룹), 45 분 (I45 그룹), 60 분 (I60), 그리고 샴 그룹, 각 그룹에 10 쥐와. 각 군의 생존율은 수술 후 14일 후에 관찰되었다. 모든 쥐는 I15 그룹, I30 그룹, 그리고 가짜 그룹에서 살아남...

토론

쥐의 OLT는 간 이식, IRI, 이식 거부, 면역 내성, 이식 병리학 및 약리학, 균동 이식 및 외국인 이식에서 장기 보존을 연구하기위한 이상적인 모델입니다. 현재, 그것은 널리 간 이식의 실험 연구에 사용.

파일럿 연구 도중 우리는 먼저 pentobarbital 나트륨 내 성소 마취를 관리하고 이것이 높은 수술 후 사망률 및 혈역학 변화에 짧은 내성으로 이끌어 낸다는 것을 것을을 발견했습니?...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
4% paraformaldehyde solution	Shanghai Macklin Biochemical Co.,Ltd	P804536
air drying oven	Shanghai Binglin Electronic Technology Co., Ltd.	BPG
Alanine aminotransferase (ALT)Kit	Elabscience Biotechnology Co.,Ltd	E-BC-K235-S
ammonia	Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd	10002118
amylase Kit	Elabscience Biotechnology Co.,Ltd	E-BC-K005-M
anhydrous ethanol	Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd	100092183
Animal anesthesia machine	Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd	R640
aspartate aminotransferase (AST)kit	Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd.	S03040
automatic biochemical analyzer.	SIEMENS AG FWB:SIE, NYSE:SI Co., Ltd.	2400
Biosystems (when nessary)	Chengdu Taimeng Electronics Co., Ltd.	BL-420F
Centrifuge	Baiyang Medical Instrument Co., Ltd.	BY-600A
cover glass	Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co. Ltd	10212432C
creatinine Kit	Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd.	S03076
dewatering machine	Hungary 3DHISTECH Co.,Ltd	Donatello Series 2
embedding machine	Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd.	KH-BL1
frozen machine	Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd	JB-L5
hematoxylin-eosin dye solution	Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd	G1005
high-efficiency paraffin wax	Shanghai huayong paraffin wax co., Ltd	Q/YSQN40-91
hydrochloric acid	Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd	10011018
intraocular lens (IOL)forceps	Guangzhou Guangmei Medical Equipment Co., Ltd.	JTZRN
Isoflurane	Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd	—
micro Scissors(when nessary)	Shanghai Surgical Instrument Factory	WA1010
needle holders	Shanghai Surgical Instrument Factory	J32010
neutral gum	Shanghai Huashen Healing Equipment Co.,Ltd.	—
normal optical microscope	Nikon Instrument Shanghai Co., Ltd	Nikon Eclipse CI
ophthalmic forceps	Shanghai Surgical Instrument Factory	J3CO30	straight
ophthalmic forceps	Shanghai Surgical Instrument Factory	JD1060	bending
ophthalmic Scissors	Shanghai Surgical Instrument Factory	J1E0
pathological slicer	Shanghai Leica Instrument Co., Ltd	RM2016
pipettes	Dragon Laboratory Instruments Co., Ltd.	7010101008
retractors	Beijing Jinuotai Technology Development Co.,Ltd.	JNT-KXQ
scanner	Hungary 3DHISTECH Co.,Ltd	Pannoramic 250
slide	Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd	G6004
xylene	Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd	1330-20-7