자동 혈액의 이중 주입에 의한 대규모 폰틴 출혈

요약

우리는 자가 혈액의 이중 주입을 통해 쥐에 거대한 pontine 출혈 모델을 설정하는 프로토콜을 제시한다.

초록

우리는 쥐에 거대한 pontine 출혈 모델을 설정하는 프로토콜을 제공합니다. 약 250 그램의 무게 쥐는이 연구에서 사용 되었다. 백 마이크로리터의 자가 혈액은 꼬리 정맥에서 가져와 입체적으로 폰에 주입되었습니다. 주사 과정은 2단계로 나뉘었다: 첫째, 10 μL의 혈액은 특정 위치, anteroposterior 위치 (AP) -9.0 mm로 주입되었다; 측면(Lat) 0mm; 수직(Vert) -9.2 mm, AP-9.0 mm에 위치한 잔류 혈액의 제2 주입; 위도 0mm; 20분 간격으로 -9.0mm를 정점하십시오. 밸런스 빔 테스트, 사지 배치 테스트 및 수정된 Voestch 신경 점수는 신경 기능을 평가하는 데 사용되었습니다. 자기 공명 화상 진찰 (MRI)는 생체 내출혈의 부피를 평가하기 위하여 이용되었습니다. 이 모형의 현상은 거대한 pontine 출혈을 가진 환자와 일치했습니다.

서문

인트레이스레브랄 출혈은 뇌졸중 환자의 1/5을 차지합니다. 무추적 출혈의 예후는 출혈^1,2의속도, 볼륨 및 위치에 따라 달라집니다. 뇌출혈과 비교하여 뇌간 출혈은 사망률이 높고^{이환율3이}더 높습니다. 뇌간 출혈의 약 40%는 폰^4에서발생합니다. pontine 출혈의 병인학 및 병리학은 뇌 출혈^5보다매우 다르고 덜 연구된다.

퐁틴 출혈 동물 모델의 두 종류가 있습니다. 하나는폰^6,7,8에서세균 콜라게나아제의 주입에 의해 유도된 자발적인 출혈 모델이다. 이 모델의 가장 큰 장점은 출혈이 자발적이라는 것입니다. 그러나 콜라게나아제는 소량의 폰틴 출혈만 유발할 수 있습니다. 게다가, 콜라게나아제는 두뇌에 그밖 상해를 일으키는 원인이 될 수 있습니다. 다른 모델은 폰^9에자가 혈액의 스테레오테 삽입에 의해 유도된다. 이 모델의 장점은 높은 성공률로 마스터하기 쉽다는 것입니다. 이론적으로, 연구원은 폰의 어떤 위치에 혈액의 어떤 볼륨을 주입할 수 있습니다. 그러나, 바늘 경로를 통한 백 누설로 인해 주입된 부피가 제한됩니다. 최근에는 이중 주입 방법이^{배분방지9를}감소시키는 방법을 추진하고 있다. 이 방법은 주사 사이의 20 분 간격으로 두 번 자가 혈액을 주입합니다. 이중 분사 방법은 온화한(30 μL) 및 중간(60 μL) 폰틴 출혈을 유도하기 위해 적용되지만 대규모 폰틴 출혈은 유발되지 않습니다. 클리닉에서, 가난한 예후를 가진 pontine 출혈 환자의 대다수는 거대한 출혈이 있습니다 (10 mL 이상).

이전 연구에서는, 우리는 쥐^10에서pontine 허혈성 뇌졸중 모델을 설정하는 프로토콜을 제공했다. 본 연구에서는, 기존의 이중 주입 방법을 수정하고, 폰의 두 개의 다른 위치에서 100 μL 자가 혈액의 이중 주입에 의해 쥐에서 대규모 pontine 출혈을 유도하는 상세한 프로토콜을 제공한다.

프로토콜

이 프로토콜은 광저우 의과 대학 제 2 부속 병원의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 검토되고 승인되었습니다. 쥐는 남부 의과 대학의 동물 센터에 의해 제공되었다. 실험 설계는 도 1에도시되어 있다.

1. 동물 및 계측기

1. 250 ± 10g의 8주된 남성 스프라그-Dawley 쥐를 사용하십시오.
2. 쥐를 25°C의 주변 온도, 65%, 12/12-h 의 밝은-암흑 주기로 통제된 환경 조건 하에서 수술 전에 적어도 7일 동안 보관하십시오.
3. 음식과 물을 제한 없이 제공합니다.
4. 악기를 준비(그림 2A-E).

2. 폰에 혈액을 주입

1. 실험에 적합한 체중을 가진 쥐를 선택하기 위해 수술 3 일 전에 다시 쥐를 무게.
2. 모델링 하기 전에 3 일 동안, 정상적인 쥐 일시 중지 없이 균형 빔을 통과 할 수 있도록 하루 3 번 균형 빔에 걸을 쥐를 훈련.
3. 마취 전에 가열 패드를 37 °C로 예열합니다.
4. 스테레오탁스 프레임의 홀더에 마이크로드릴을 부착합니다.
5. 쥐를 주입 50 mg/kg 케타민과 5 mg/kg 자일라진 peritoneally. 발가락 핀치 응답이 없을 때까지 기다립니다.
6. 쥐를 입체 프레임으로 운반하는 경향이 있는 위치에 놓입니다. 이어바를 외이도 위에 올려 머리를 고정시세요. 주사의 왜곡을 피하기 위해 수평 위치에 두개골을 고정(도 2F).
7. 입구와 콘센트 포트가 있는 스테레오탁스 코 콘을 통해 이소플루란(97.5% 산소 및 2.5%이소플루란)에 의한 마취를 유지한다.
8. 눈 연고를 사용하여 각막을 촉촉하게 유지하십시오.
9. 마이크로 면도기와 두개골 위의 머리를 면도.
10. 그림 2F에도시된 바와 같이, 양측 측면 캔투스의 선에서 0.5cm 뒤로 두개골에 마커 펜이 있는 3cm 중간선을 그립니다.
11. 표시된 중간선중앙에서 시작하여 바깥쪽으로 회전하는 원을 그리며 엔토오딘 수술 스크럽을 발라주세요.
12. 외과 커튼을 놓습니다.
13. 표시된 중간 선을 따라 메스로 절개를 합니다.
14. 면 봉봉을 사용하여 잠재적인 혈액을 제거하십시오.
15. 두개골(그림 2G)을노출시키기 위해 두피 플랩의 각 면에 집게 조각을 놓습니다.
16. 면봉을 0.9% 식염수에 담그고 두개골 뼈에서 결합 조직을 부드럽게 제거하여 결합 조직이 마이크로 드릴에 걸리지 않도록하십시오.
17. 마커 펜을 통해 브레그마의 중심점을 원점으로 표시합니다.
18. AP-9.0mm, 도0mm(도1B 및 표 1)에서 마이크로드릴을 사용하여 두개골 절제술(직경 1mm)을수행합니다. 이 점은 정맥 부비동(도 2G)에매우 가깝기 때문에 신중하게 진행하십시오.
19. 스테레오탁스 프레임에서 마이크로드릴을 제거합니다.
20. 100 μL 해밀턴 주사기를 스테레오탁홀더(그림 2K)에넣습니다. 사출 펌프 스위치를 켜고, 급속 흡입 버튼을 클릭하고, 흡면 헤파린 용액(100mL에서 100mL의 희석)을 100 μL로 클릭한 다음 혈액 응고가 너무 빨리 방지하도록 완전히 배수합니다.
21. 클로르헨시딘과 75% 알코올 수술 스크럽을 뿌리부터 끝까지 3번 이상 꼬리에 바르면 피부를 소독하고, 흥분을 완화하고, 꼬리 정맥을 팽창하여 주사성공률을 높입니다.
22. 1 mL 주사기에 두피 침술을 부착합니다.
23. 꼬리 끝에서 3cm 의 측면 꼬리 정맥에 두피 침술을 삽입하고 혈액 150 μL(그림 2H)를복용하십시오.
24. 1 mL 주사기에서 두피 침술을 제거합니다.
25. 혈액을 튜브로 옮기십시오(도2I).
    참고: 혈액 응고를 방지하기 위해 신속하게 전달합니다.
26. 수술 용 장갑을 변경합니다.
27. 인출 모드를 선택하고, 볼륨을 100 μL로 설정하고, 속도를 200 μL/min로 설정하고, RUN 버튼을 클릭하고, 100 μL의 혈액을 해밀턴 주사기(그림2J)로흡인시킵니다.
28. 인퓨즈 모드를 선택하고 속도를 1 μL/분으로 설정합니다.
29. 팁이 뇌 표면 아래 9.2 mm에 도달할 때까지 주사기를 전진시다(그림1C 및 도 2L).
30. 달리기 버튼을 클릭하고, 1 μL/min(표1)의속도로 혈액의 처음 10 μL을 주입합니다.
31. 주사를 멈추고 주사기가 20분 동안 제자리에 두어 혈액이 지주막 공간으로 흘러 들어가는 것을 방지하십시오.
32. 팁이 뇌 표면 아래 9.0mm에 도달할 때까지 주사기를 철회합니다.
33. 잔류 혈액이 완전히 주입 될 때까지 1 μL / 분의 동일한 속도로 주사를 다시 시작합니다.
34. 혈류를 피하기 위해 주사기를 10 분 동안 위치에 둡니다.
35. 뇌에서 주사기를 천천히 제거합니다.
36. 뼈 시멘트를 사용하여 두개골 구멍을 덮습니다.
37. 시멘트가 마르면 상처를 4-0 폴리아미드 봉합사 필라멘트로 봉합합니다. 3 또는 4 개의 스티치를 바느질 한 후 2-1-1 표준 수술 매듭을 묶습니다.
38. 감염을 방지하기 위해, 페니실린 (0.25 mL, 80 IU 4 mL 식염수로 희석)와 쥐를 주입하여 회귀적으로 주입하십시오.
39. 부차아톨 타르트(2.5 mg/kg)로 쥐를 피하시키고 수술 후 24시간까지 수술 후 통증을 완화하기 위해 2시간마다 주사를 반복합니다.
40. 그것은 완전히 마취에서 회복 될 때까지 쥐를 15 분마다 관찰. 케이지 아래에 난방 패드가 있는 오리지널 케이지로 되돌아갑니다. 쥐에게 희생될 때까지 음식과 물에 무료로 접근할 수 있도록 하십시오.

3. 행동 테스트

참고: 밸런스 빔 테스트, 사지 배치 테스트 및 수정된 Voetsch 신경 점수를 포함하여 모델링 후 1일, 3일째, 7일 및 14일째에 행동 테스트를 수행합니다.

1. 밸런스 빔^{테스트(11)}.
   참고: 이것은 힌드림의 감각 운동 기능을 검사하기 위한 시험입니다.
   1. 빔(너비 3cm × 70cm)이 바닥 위 20cm임을 보장하기 위해 장치를 준비하였다.
   2. 좁은 진입로가 있는 빔의 뒷쪽 끝에 어두운 상자를 놓습니다.
   3. 광선의 머리 끝에, 빔을 통과하고 목표 상자를 입력 하는 쥐를 동기를 부여하는 데 사용되는 백색 잡음 생성기와 밝은 광원을 배치합니다.
   4. 동물이 골 상자에 들어갈 때 소음과 빛을 중지합니다. 머리 끝에서 골 상자(초)까지의 대기 시간과 빔을 통과하는 동안 뒷다리의 성능을 기록합니다.
   5. 다음과 같이 성능 점수를 기록 : 0, 꾸준한 자세와 균형; 1, 빔의 그립 측면; 2, 1 뒷다리 떨어지는 빔을 포옹; 3, 2 개의 사지가 떨어지거나 60 s 이상 빔 주위를 회전하여 빔을 껴안습니다. 4, 빔에 균형을 시도 >40 s, 하지만 떨어져 떨어진다; 5, 빔에 균형을 시도 >20 s, 하지만 떨어져 떨어진다; 및 6, 빔 <20s에 균형이나 균형을 시도하지 않고, 떨어진다.
2. 사지 배치 테스트
   참고: 사지 배치 테스트는 쥐의 감각 운동 기능을 평가하기 위해 6개의 매개 변수로 비전, 터치 및 프로프리오셉션의 3개의 독립적인 자극을 검사합니다. 총 신경 기능 점수는 0에서 12까지 다양했습니다. 테스트 전에 쥐는 처리에 습관화되어야합니다.
   1. 쥐를 뒤로 잡고 10cm 높이에서 천천히 테이블에 놓습니다. 일반적으로 쥐는 앞다리를 뻗어 테이블에 놓습니다.
   2. 쥐를 뒤로 잡고 테이블 가장자리를 향합니다. 앞다리의 반응이 관찰됩니다. 일반 쥐는 앞다리를 테이블에 놓습니다.
   3. 쥐가 테이블의 가장자리를 잡게 합니다. 일반 쥐는 턱을 사용하여 코와 코 머리가 테이블 가장자리를 만지지 않도록합니다.
   4. 테이블에 쥐를 넣고 쥐의 어깨 뒤에서 테이블 가장자리를 향해 부드러운 측면 압력으로 쥐를 밀어 내고 앞다리와 뒷다리의 배치를 관찰합니다. 일반 쥐는 앞다리와 뒷다리로 가장자리를 잡을 것입니다.
   5. 테이블에 쥐를 놓고 얼굴을 가장자리쪽으로 놓고 뒤쪽에서 가장자리로 부드럽게 밀어 넣습니다. 일반 쥐는 앞다리로 가장자리를 잡을 것입니다.
   6. 테이블에 쥐를 뒤로 모서리에 놓고 뒤쪽으로 테이블 가장자리로 밀어 넣습니다. 뒷다리의 반응을 관찰한다. 일반 쥐는 뒷다리로 가장자리를 잡을 것입니다.
   7. 테이블 가장자리에 앞다리 또는 뒷다리의 배치를 평가합니다. 다음과 같이 점수를 기록 : 0, 아니 배치; 1, 미완성 및/또는 지연배치; 2, 즉각적이고 완전한 배치.
3. 수정된 Voetsch 신경 점수⁸
   참고: 수정된 Voetsch neuroscore는 14개의 매개변수를 포함하는 감각 운동 능력의 척추 브로바실라 스케일 점수입니다: 머리 운동, 활동, 청각, 통증 반사, 각막 반사, proprioception, 목 감각, 탐사, 원형, 축 몸통 감각, 4 다리 운동, 앞다리 운동, 등반, 그리고 보행. 각 매개 변수의 점수는 0 (완전한 신경 적자)에서 3 (신경 학적 적자 없음)에 이르기까지 다양합니다. 총 신경 기능 점수는 0에서 42까지 다양합니다.
   1. 쥐를 테이블 위에 놓고(길이 × 35cm)를 5분간 이동합니다. 머리의 자발적인 움직임을 관찰 : 모든 차원에서 이동, 3; 한쪽을 선호, 2; 1면으로만 이동, 1; 일방적인 면으로 구부러져 0.
   2. 쥐를 테이블 위에 놓고(길이 × 35cm)를 5분간 이동합니다. 활동은 완전히 반응하는 3으로 정의됩니다. 적당히 반응하는, 2; 최소한의 반응, 1; 혼수 상태에, 0.
   3. 두개골 순환을 관찰 : 양자, 3 회전; 1면, 2면을 선호합니다. 1면, 1개까지만; 1면, 0으로 떨어졌다.
   4. 앞다리 운동을 평가하십시오: 평등하고 양자 운동, 3; 약간의 비대칭, 2; 위대한 비대칭, 1; 파레시스, 0.
   5. 4 팔다리 운동을 평가: 동등하고 양자 운동, 3; 약간의 비대칭, 2; 위대한 비대칭, 1; 파레시스, 0.
   6. 쥐가 고정되어 있을 때, 귀 꼬집을 수행하여 고귀를 자극하고 통증 반사를 테스트합니다: 자극에서 신속하고 대칭적으로 이동, 3; 자극에서 천천히 또는 비대칭으로 이동, 2; 통증에 대한 응답으로 일부 움직임을 보여줍니다, 1; 반응 없음, 0.
   7. 쥐가 고정되어있을 때, 청력을 테스트하기 위해 쥐의 몸의 양쪽에 소음을 확인 : 손가락 마찰, 3; 손가락의 스냅, 2; 큰 박수, 1 과 아니 놀라운, 0.
   8. 프로프리오셉션을 확인하려면, 양쪽에 쥐의 비브리사에 무딘 막대기로 각각 터치하고 자극에 대한 반응을 관찰하십시오: 터치에 반응, 3; 한쪽에 반응 감소, 2; 양쪽에 감소, 1; 결석, 0.
   9. 몸통 축 감각을 평가하려면 쥐의 몸 양쪽에 무딘 막대기를 놓고 자극에 대한 반응을 관찰하십시오: 자극에 대한 활발하고 대칭적인 반응, 3; 약간 감소 또는 비대칭 반응, 2; 크게 감소 및 비대칭 반응, 1 및 반응 없음, 0.
   10. 각막 반사를 테스트하려면 쥐를 잡고 면봉으로 양쪽의 각막을 빠르게 터치하십시오: 두 눈은 빠르게 닫히는 3; 한쪽에 반사를 감소, 2; 양쪽에 감소, 1; 결석, 0.
   11. 목의 감각을 확인하려면, 쥐를 잡고 목을 만지도록 무딘 막대기를 사용하십시오 : 적극적으로 만지고 반응, 3; 터치에 느린 반응, 2; 크게 감소 반응, 1; 반응 없음, 0.
   12. 탐색을 관찰하려면 밝은 어두운 상자를 사용합니다.
       참고: 상자의 3분의 2는 열고 켜야 하며 나머지 상자는 덮여 있고 어둡습니다. 7cm 도어는 두 개의 구획을 연결합니다.
   13. 쥐를 5분 동안 등구에 놓고 어두운 구획을 5분 더 놓고 쥐의 활동을 기록할 수 있습니다. 한 방에 팔다리가 4개 놓으면 입구로 기록합니다. 다음과 같은 기록 점수: 빛과 어두운 구획에 적극적으로 도달, 3; 1 구획, 2에 도달; 자극 후 천천히 이동, 1; 무브먼트, 0.
   14. 등반 능력을 확인하려면 랫트를 가로지면에 30도 각도로 폭 20cm, 길이 70cm의 평면 바닥에 놓습니다. 다음과 같은 기록 점수 : 정상에 올라갈 수, 3; 장애인 등반, 2; 고정 그립, 1; 즉시, 0.
   15. 빔 워크를 검사하려면, 폭 3cm, 70cm 길이빔의 한쪽 끝에 쥐를 지면 위로 20cm, 기록 점수: 전체 빔을 탐구, 3; 빔의 일부를 탐구, 2; 일부 움직임과 폭포, 1; 무브먼트 없음, 0.
   16. 점을 계산합니다.

4. MRI에 의한 출혈 확인

1. 수술 후 24시간에서 MRI 스캔을 수행합니다.
2. 이소플루란으로 쥐를 마취시합니다 (유도의 경우 5 %, 유지 보수의 경우 1 %- 1.5 %).
3. 쥐 뇌 어레이 코일에서 쥐의 머리를 송신 전용 볼륨 코일과 결합하여 고정하십시오.
4. MRI 스캐너에 쥐와 함께 코일을 놓습니다. 치아와 이어 바를 통해 요람 내의 쥐를 고정하십시오.
5. 폐회로 열 재킷을 사용하여 MRI 스캐닝 시 쥐의 체온을 37 ± 0.5°C에서 유지합니다.
6. 파일럿 시퀀스를 수행하여 올바른 형상을 보장합니다.
7. 빠른 스핀 에코 시퀀스를 적용하여 T2 가중치 검사를 수집합니다. 매개 변수를 다음과 같이 설정합니다: 에코 시간(TE), 132ms; 반복 시간 (TR), 2,500 ms; 인수 매트릭스, 148 × 148; 시야, 100mm × 100mm; 12 슬라이스; 두께 1.5mm.
8. 쥐를 케이지로 돌려놓습니다.

5. 총 해부학에 의한 출혈 확인

참고: 지정된 시점에서 쥐를 희생, 24 시간 및 수술 후 14d (그림 1D).

1. 의식을 상실할 때까지 쥐를 5%의 이소플루란으로 마취시합니다. 그런 다음, 이산화탄소 (CO 2)(분당 케이지의 부피의 20-30%)로 안락사한다.
2. 다음 징후를 사용하여 죽음을 확인 : 가슴이 상승하고 떨어지는, 만져 볼 수있는 심장 박동, 발가락 핀치에 대한 응답, 가난한 점막 색상, 색상 변화 또는 눈의 불투명도.
3. 자궁 경부 탈구를 수행합니다.
4. 멸균 플랫폼에서 발을 테이핑하여 쥐를 보호합니다. 자궁 경부에서 중증 절개를 만들어 심부전을 흉부와 간으로 노출시하십시오. 쇄골을 따라 상선 여백에서 맨 왼쪽으로 측면 절개를 하고, 횡격막을 따라 시피드에서 맨 왼쪽으로 다른 측면 절단을 하여 심장을 노출시합니다. 흉곽 플랩을 들어 올리고 핀으로 플랫폼에 고정합니다.
5. 바늘(27G)의 끝을 4°C 식염수를 함유한 관류 펌프에 연결한다. 아트리움에 들어가지 않도록 왼쪽 심실의 왼쪽 가장자리를 따라 바늘 끝을 심장으로 전진시키게 합니다. 관류 펌프를 켜서 팁이 왼쪽 심실에 있는지 확인한 다음 오른쪽 아트리움에서 잘라냅니다.
6. 오른쪽 아트리움에서 배출된 액체가 무색으로 변하고 간이 흰색으로 변할 때 관류 펌프를 끕니다. 이 절차는 약 100mL 4 °C 식염수가 필요합니다.
7. 쥐를 참수하고 가위와 집게를 사용하여 전체 뇌를 수확합니다. 얼룩종이로 뇌 표면에서 수분을 제거합니다.
8. 전체 뇌를 -80°C에서 1분 동안 유지합니다.
   참고: 뇌가 동결 없이 절단될 수 있다면 이 단계는 건너뛸 수 있습니다.
9. 등쪽 측이 위로 있는 관상 쥐 뇌 매트릭스에 뇌를 놓습니다.
10. 뇌 표면의 구멍에 따라 0.21mm 두께의 스테인리스 스틸 블레이드를 출혈 센터에 삽입합니다.
11. 다른 블레이드를 2mm 간격으로 뇌에 삽입합니다.
12. 4°C에서 24시간 동안 4% 파라포름알데히드(PFA) 용액의 10mL에 뇌 섹션을 담급니다. 0.01 mmol/L 인산염 완충식식식(PBS)으로 헹구는다.
13. 로스트랄에서 코달까지 섹션을 구성하고 이미지화합니다.

6. 파라핀 섹션과 헤마톡시린과 에신 (HE) 염색

1. 실온에서 적어도 24 시간 동안 4 % PFA 솔루션으로 뇌를 수정하십시오. PFA의 부피는 뇌 볼륨의 5-10 배이어야한다.
2. 출혈 센터에서 뇌를 블레이드와 관상 쥐 뇌 매트릭스를 통해 두 조각으로 잘라냅니다.
3. 파라핀에 내장된 조직 블록을 만듭니다.
4. 파라핀 임베디드 티슈 블록을 마이크로톤에 40 μm 두께 슬라이드로 관상으로 단면, 출혈 중심에서 시작하여 연속적으로 4개의 단면을 자르고 40°C 수조에 띄워 넣습니다.
5. 40 μm 섹션(뇌 1개에 대해 총 8개의 슬라이드)을 깨끗한 유리 슬라이드에 장착하고 실온에서 밤새 건조한 공기건조를 제공합니다.
6. 슬라이드를 56°C에서 1시간 동안 굽습니다.
7. 자일렌에서 3 분, 3 번 씻으시면 씻으실 수 있습니다.
8. 딥 섹션은 100% 에탄올에서 30회, 에탄올 100% 30회, 에탄올 95% 30회, 에탄올 95%에서 30회 더.
9. 수돗물로 헹구고 맑아질 때까지 헹구는 것.
10. 헤마톡슬린의 섹션을 약 10분 동안 담가 두면 됩니다.
11. 수돗물로 헹구고 맑아질 때까지 헹구는 다.
12. 에오신 얼룩에 섹션을 30 s에 담가 두는 다.
13. 3-4딥 95% 에탄올, 100% 에탄올3-4 딥, 1분 동안 100% 에탄올, 100% 에탄올 + 자일렌(1:1)으로 10회 딥을 장착한 탈수 슬라이드.
14. 1 분, 2 시간 자일렌섹션 청소.
15. 비수성 장착 매체와 커버슬립을 사용하여 마운트하십시오.
16. 실온에서 밤새 공기 의 섹션을 건조 한 다음 산.

7. 통계

1. 그래프 패드 프리즘 6.0을 사용하여 학생의 t-테스트 또는 Mann Whitney U 테스트를 계산합니다.
   참고: 모든 데이터는 ± SE. 두 그룹 간의 차이점은 두 꼬리 학생의 t-test 또는 Mann Whitney U 시험으로 결정됩니다. P<0.05는 통계적 유의성으로 정의된다.

결과

총 25마리의 동물이 사용되었고, 3마리는 대조를 위해, 30 μL에 6마리, 60 μL, 100μL 혈액 주사에 10마리가 사용되었다. 자가 혈액 (1/10)의 100 μL 주입을 받은 한 쥐는 수술 후 24 시간 이내에 사망했습니다.

행동 검사는 수술 후 1 일, 3 일, 7 일 및 14 일째에 실시되었습니다. 수술 후 다른 시점에서 대조군 및 혈액 주사 그룹에 대한 점?...

토론

본 연구에서는, 우리는 거대한 pontine 출혈 쥐 모형을 생성하는 프로토콜을 제공했습니다. 이 모형은 거대한 pontine 출혈의 병리학 적인 기계장치 그리고 예후에 대한 연구에 사용될 수 있습니다.

실험 내내 25마리의 쥐가 사용되었고, 그 중 한 마리만 죽었습니다. MRI의 확인, 총 해부학, 그리고 HE 염색이 방법은 매우 낮은 사망률과 높은 성공률을 가지고 있음을 나타냈다. 거대한...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
100ml Saline solution	Guangdong yixiang	191222201 C1	Preparing heparin diluent
100μl Microinjector	Shanghai Gaoge		Injection of autologous blood
1ml Syringe	Jiangsu Zhiyu	20191014	Withdraw autologous blood from the tail vein
75% Alcohol	Shandong Lierkang		Disinfection of rat tail
Adhesive tape	Shanghai Jinzhong		Surgicl instruments
Animal anesthesia system	RWD	R510-31S-6	Inducing and maintaining anesthesia
Balance beam	Jiangsu Saiangsi		For neurological deficit scores
Blades	Shanghai Feiying	74-C	For gross anatomy
Bone cement	Shanghai Xinshiji	20180306	Surgicl instruments
Brain tank	Shenzhen LEIYEA		For gross anatomy
Butorphanol tartrate	Jiangsu Hengrui		For pain management
Electric cranial drill	Nanjing  Darwin biotechnology	20180090018	Making a burr hole on the skull
EP tube	Nantong Surui		Transfer autologous blood
Erythromycin eye cream	Yunnan pharmacy		Eyes protection
HE dye liquor	Solarbio	G1120	For HE staining
Heating pad	Dangerous Jungle	JR01	Keeping warm
Heparin sodium injection	Chengdu Haitong Pharmacal Company	190701	Preparing heparin diluent
IndoPhors	Guoyao of China		Sterilization
Isoflurane	RWD	20080701	Inducing and maintaining anesthesia
Light dark box	Jiangsu Saiangsi		For neurological deficit scores
Micro-injection pump	Baoding Leifu	TFD03-01-C	Injection of autologous blood
MRI system	Philips		Confirmation of infarction in vivo
Needle holder	Shanghai Jinzhong	J32020	Surgicl instruments
Penicilin	Guoyao of China		Infection Prevention
Q-tips	Jiangxi Songhe		Surgicl instruments
Scalp heedle	Jiangxi Hongda	20200313	Withdraw autologous blood from the tail vein
Scalpel	Shanghai Kaiyuan	170902	Surgicl instruments
Shearing scissors	Shanghai Jinzhong	Y00040	Surgicl instruments
Stereotaxic apparatus	RWD	900-00001-00	for surgical positioning
Surgical towel	Xinxiang Huakangweicai	20070601	Surgicl instruments
Suture needle	Shanghai Jinzhong		Surgicl instruments
Suture scissors	Shanghai Jinzhong	J25041	Surgicl instruments
Tissue holding forcepts	Shanghai Jinzhong	J31080	Surgicl instruments