온전한 심낭 허혈성 설치류 모델

요약

이 프로토콜은 심낭과 그 내용물을 보존하면서 마우스에서 심근 경색을 유도하는 단계를 설명합니다.

초록

이 프로토콜은 심낭과 그 내용물이 허혈성 설치류 모델 (심근 손상을 유도하는 관상 동맥 결찰)에서 필수적인 항 섬유화 역할을한다는 것을 보여주었습니다. 전임상 심근 경색 모델의 대부분은 항상성 세포 환경의 손실과 함께 심낭 완전성의 파괴를 필요로합니다. 그러나 최근에는 심낭 손상을 최소화하고 심장의 상주 면역 세포 집단을 유지하는 심근 경색을 유도하는 방법론이 개발되었습니다. 관상 동맥 결찰 후 손상되지 않은 심낭 공간을 가진 마우스에서 개선 된 심장 기능 회복이 관찰되었습니다. 이 방법은 심근 경색 후 심낭 공간에서 염증 반응을 연구 할 수있는 기회를 제공합니다. 라벨링 기술의 추가 개발은이 모델과 결합하여 섬유증을 포함하여 심장에서 리모델링을 유도하는 염증 메커니즘을 조절하는 심낭 면역 세포의 운명과 기능을 이해할 수 있습니다.

서문

오늘날까지 심혈관 질환(CVD)은 전 세계적으로 주요 사망 원인으로 인식되어 상당한 재정적 부담과^{환자의 삶의 질} 저하를 초래합니다1. 관상 동맥 질환 (CAD)은 CVD의 하위 유형이며 사망률의 주요 원인 인 심근 경색 (MI)의 발병에 필수적인 역할을합니다. 정의에 따르면, MI는 허혈 및 저산소증의 장기간의 상태로 인한 심근 조직의 돌이킬 수없는 손상으로 인해 발생합니다. 심근 조직은 재생 능력이 부족하므로 부상은 영구적이며 처음에는 보호 할 수 있지만 궁극적으로 불리한 심장 리모델링 및 궁극적 인 심부전²에 기여하는 섬유 성 흉터로 심장 근육을 대체합니다.

CAD 환자의 관리가 지난 수십 년 동안 극적으로 개선되었지만 허혈에 이차적인 만성 심부전(CHF)은 전 세계적으로 많은 환자에게 영향을 미칩니다. 이 전염병을 예방하고 관리하기 위해서는 기본 메커니즘을보다 광범위하게 이해하고 새로운 치료법을 개발해야합니다. 또한 과거의 연구 결과는 전신 요법의 한계와 정확한 대안 개발의 필요성을 강조합니다. 인간에서 MI의 분자 후유증을 조사하는 것은 경색 조직에 접근하는 능력에 의해 영향을 받는다는 점을 감안할 때, CVD와 관련된 인간 MI 및 CHF의 특성 및....

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프로토콜

8-14주령의 수컷 및 암컷 C57BL/6J 마우스를 이들 실험에 사용하였다. 이 프로토콜은 캘거리 대학의 동물 관리위원회로부터 윤리적 승인을 받았으며 모든 동물 관리 지침을 따릅니다.

1. 마우스 준비 및 수술

1. 수술 도구를 소독합니다(비드 멸균기 또는 오토클레이브를 통해).
2. 수술 전 체중과 진통제 용량에 대해 마우스의 무게를 잰다.
3. 마우스를 4% 이소플루란과 800mL/분의 산소가 포함된 유도 상자에 넣습니다. 발가락을 꼬집고 반사가 부족한 동물을 관찰하여 마취면을 확인하십시오.
4. 진통제를 피하 주사 (부 프레 노르 핀 0.1mg / kg) ( 재료 표 참조).
5. 수술 중 가열된 수술 패드에 마우스를 놓고 코뿔을 통해 전달되는 3% 이소플루란으로 마취를 유지합니다. 각 눈에 건조한 눈을 피하기 위해 안과 연고를 바르십시오.
6. 가슴과 목 수술 부위에서 머리카락을 면도하십시오.
7. 마우스의 발을 제지하고 수술대 위에 놓습니다.
8. 끝이 부드러운 23G 카테터를 입과 인두를 통해 기관에 삽입하여 마우스를 삽관합니다.
   1. 삽관 후 110회 호흡/분의 속도, 250μL의 일회 호흡량....

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결과

이 수정된 관상동맥 결찰 모델은 재현성과 동물 생존을 달성하도록 최적화되었습니다. 그러나 심장에 유발 된 심각한 손상으로 인해 일부 예상 수술 중 및 수술 후 사망률이 절차와 관련이 있습니다. 표준 사망률은 일반적으로 여성 (~ 10-15 %)보다 남성 (~ 25-35 %)에서 더 높습니다.

수정 된 관상 동맥 결찰로 MI를 성공적으로 유도하는 것은 심장의 기능적 매개 변수 및 구조적 특?.......

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토론

설치류의 닫힌 심낭에서 MI를 유도하는 것은 독특하며 잠재적으로 중요한 응용 프로그램을 가질 수 있습니다. 이 절차는 설치류 모델과 설치류 심장 해부학에 대한 외과 의사의 친숙함에 크게 의존합니다. 성공은 또한 늑간 근육 절개 및 갈비뼈 수축 (1.11-1.13 단계), 경색 생성 (1.17 단계) 및 동물 회복 (1.22-1.24 단계)의 세 가지 중요한 단계에서 제공되는 치료에 달려 있습니다.

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자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Steri-350 Bead Sterilizer	Inotech	NC9449759
10% Formalin	Millipore Sigma	HT501128-4L
40 µm Cell strainer	VWR	CA21008-949	Falcon, 352340
70 µm Cell strainer	VWR	CA21008-952	Falcon, 352350
ACK Lysis Buffer	Thermo Fisher	A1049201
BD Insyte-W Catheter Needle 24 G X 3/4"	CDMV Inc	108778
Betadine (10% povidone-iodine topical solution)	CDMV Inc	104826
Blunt Forceps	Fine Science Tools	FST 11000-12
BNP Ophthalmic Ointment	CDMV Inc	17909
Castroviejo Needle Driver	Fine Science Tools	FST 12061-01
Centrifuge 5810R	Eppendorf	22625101
Collagenase I	Millipore Sigma	SCR103
Collagenase XI	Millipore Sigma	C7657
Covidien 5-0 Polysorb Suture - CV-11 taper needle	Medtronic Canada	GL-890
Covidien 5-0 Polysorb Suture - PC-13 cutting needle	Medtronic Canada	SL-1659
Curved Blunt Forceps	Fine Science Tools	FST 11009-13
Dako Mounting Medium	Agilen	CS70330-2
DNase I	Millipore Sigma	11284932001
Ethanol, 100%	Millipore Sigma	MFCD00003568
Ethicon 8-0 Ethilon Suture - BV-130-4 taper needle	Johnson & Johnson Inc.	2815G
Fiber-Optic Light	Nikon	2208502
Fine Forceps	Fine Science Tools	FST 11150-10
Fluoresbrite® YG Carboxylate Microspheres 1.00 µm	Polysciences, Inc.	15702
Geiger Thermal Cautery Unit	World Precision Instruments	501293	Model 150-ST
Hyaluronidase	Millipore Sigma	H4272
Isofluorane Vaporizer	Harvard Apparatus	75-0951
Isoflurane USP, 250 mL	CDMV Inc	108737
Magnetic Fixator Retraction System	Fine Science Tools	18200-20
MX550D- 40 MHz probe	Fujifilm- Visual Sonics
Needle Driver	Fine Science Tools	FST 12002-12
PE-10 Tubing	Braintree Scienctific, Inc.	PE10 50 FT
Scissors	Fine Science Tools	FST 14184-09
SMZ-1B Stereo Microscope	Nikon	SMZ1-PS
VentElite Small Animal Ventilator	Harvard Apparatus	55-7040
Vetergesic (10 mL, 0.3mg/mL buprenorphine))	CDMV Inc	124918	controlled drug
Vevo 2100 Software	Fujifilm-Visual Sonics